江苏省高校自然科学研究项目(07KJD310220)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：史震汤仁仙郑葵阳刘晓梅甘宜敏更多>>
- 相关机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙肝病毒X基因重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的为了探讨HBx基因与肝癌发生的关系,构建HBx基因重组腺病毒载体。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统,首先从质粒pCDNA3.l-HBx中酶切得到HBx基因,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,得到pAdTrack-CMV-HBx,将其Pm eⅠ酶切线性化后,转到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的B J5183感受态细菌中,通过同源重组得到重组腺病毒质粒载体pAd-HBx,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚肾293细胞,产生重组腺病毒颗粒Ad-HBx。结果PCR和酶切鉴定证明重组腺病毒Ad-HBx构建成功,在转染的293细胞中可以观察到绿色荧光蛋白GFP。结论成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒载体,为后续研究奠定了基础。
- 史震李向阳周峰李金龙尤红娟汤仁仙
- 关键词：乙型肝炎病毒HBX基因腺病毒载体
- 应用RNA干扰抑制乙肝病毒X基因促HepG2细胞凋亡的作用被引量：2
- 2009年
- 目的:构建靶向乙肝病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并应用其体外抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。方法:设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72小时后,分别以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测HBX的表达量。Annexin V-FITC/PI双染经流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果:重组质粒pSilencer3.1-shHBX酶切鉴定和测序结果均与设计的一致。该质粒使HBX基因mRNA表达量降低了47.1%,进而使HBx蛋白表达量降低了58.9%,HBx蛋白荧光强度减弱,并使HBX诱导的HepG2细胞凋亡率降低了52.11%。而阴性对照质粒无此作用。结论:成功构建靶向HBXshRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并可应用其抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。
- 范宝峰刘晓梅甘宜敏史震汤仁仙郑葵阳
- 关键词：HBXRNA干扰凋亡HEPG2
