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Identification of Two Novel Mitochondrial DNA Deletions Induced by Ionizing Radiation被引量：1: 2012年; Objective We identify ionizing radiation-induced mitochondrial DNA (mtDNA) deletions in human lymphocytes and their distribution in normal populations. Methods Long-range polymerase chain reactions (PCR) using two pairs of primers specific for the human mitochondrial genome were used to analyze the lymphoblastoid cell line following exposure to 10 Gy 60 Co γ-rays. Limited-condition PCR, cloning and sequencing techniques were applied to verify the mtDNA deletions detected with long-range PCR. Human peripheral blood samples were irradiated with 0, 2 and 6 Gy 60 Co γ-rays, and real-time PCR analysis was performed to validate the mtDNA deletions. In order to know the distribution of mtDNA deletions in normal population, 222 healthy Chinese adults were also investigated. Results Two mtDNA deletions, a 7455-bp deletion (nt475-nt7929 in heavy strand) and a 9225-bp deletion (nt7714 -nt369 in heavy strand), occurring between two 8-bp direct repeats, were identified in lymphoblastoid cells using long-range PCR, limited-condition PCR and sequencing. These results were also observed for 60 Co γ-rays irradiated human peripheral blood cells. Conclusion Two novel mtDNA deletions, a 7455-bp deletion and a 9225-bp deletion, were induced by ionizing radiation. The rate of the mtDNA deletions within a normal population was related to the donors' age, but was independent of gender.; ZHAO Xiao TaoFENG Jiang BinLI Yu WenLUO QunYANG Xin ChunLU XueCHEN De QingLIU Qing Jie; 关键词：线粒体DNA 电离辐射诱导聚合酶链反应 PCR扩增 MTDNA

人外周血线粒体DNA4934bp自发缺失及^(60)Coγ射线诱发缺失的剂量效应关系初探被引量：3: 2008年; 为探索正常人群外周血样品中线粒体DNA(mtDNA)4934bp缺失的发生比例及电离辐射是否可以诱发该缺失,对109例正常人外周血样品进行分析,确定正常人外周血样品中发生该缺失的比例,将3例缺失阳性正常人外周血样品,使其受到0、2和6Gy60Coγ射线照射,对4934bp缺失发生情况进行研究;经分析发现,41%的正常人外周血样品具有该缺失,聚合酶链反应PCR产物经克隆、测序和核苷酸同源性分析证实该缺失发生在线粒体DNA重链nt8435-nt13368之间。自发缺失发生比例与供者年龄增长相关(p<0.01),与性别无关。使用半定量聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR),缺失阳性正常人外周血样品在接受0、2和6Gyγ射线照射后,检测其mtDNA4934bp的缺失情况,发现在照射前后外周血线粒体DNA均有该缺失;以正常人外周血所做的半定量分析发现在照射0、2和6Gy后该缺失水平分别为23、25和27。说明电离辐射诱发人外周血样品缺失水平随剂量增加而增高。; 封江彬李玉文陆雪陈德清刘青杰; 关键词：人外周血线粒体DNA缺失

^60Coγ射线诱导人淋巴细胞线粒体COX基因表达改变的研究被引量：4: 2010年; 目的探讨电离辐射诱导人淋巴细胞线粒体COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢ基因表达的改变.方法用1、3、5、8和10 Gy 60Co γ射线分别照射指数增长期的人淋巴细胞永生化细胞株,8 h后用逆转录PCR（RT-PCR）和实时荧光定量PCR（Real-time PCR）方法检测COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢ基因在mRNA水平上的表达;流式细胞术检测其在蛋白水平上的表达;比色法检测COX活性,来分析辐射诱导线粒体COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢ基因表达改变的量效关系.同时,以5 Gy γ射线照射人淋巴细胞,分别于照后不同时间（0.5、4、8、12、24、48和72 h）,同样通过上述指标来分析3种线粒体基因的表达变化,观察其时效关系.结果在mRNA水平上,线粒体COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢ基因表达总体上调.COX Ⅰ和COXⅢ基因在0～3 Gy剂量范围内具有量效关系,而COXⅡ基因在0～8 Gy剂量范围内具有量效关系（FCOXⅠ=116.62,FCOXⅡ=17.89,FCOXⅢ=8.20,P＜0.05）;5 Gy照后4 h左右COXⅡ和COXⅢ基因表达上调最显著,而COX Ⅰ基因持续低表达（FCOXⅠ=31.99,FCOXⅡ=19.47,FCOXⅢ=20.64,P＜0.05）.在蛋白水平上,不同剂量照射后,COX Ⅰ和COXⅡ蛋白表达先下调后上调,COXⅢ蛋白表达下调（FCOXⅠ=16.96,FCOXⅡ=32.5,FCOXⅢ=6.51,P＜0.05）;5 Gy照后4 h,COX Ⅰ蛋白表达明显增强,达到8 h后出现COXⅡ蛋白表达显著上调,而COXⅢ蛋白表达普遍下调（FCOXⅠ=14.68,FCOXⅡ=17.18,FCOXⅢ=2.52,P＜0.05）.此外,受照后COX活性普遍降低.结论电离辐射可以诱导人淋巴细胞线粒体COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢ基因表达的改变,基因表达总体增强的同时,COX活性普遍降低.; 李玉文封江彬陆雪范莉陈德清刘青杰; 关键词：线粒体 COX 基因表达

线粒体基因组D-loop区变异及辐射诱发突变被引量：2: 2008年; 线粒体基因组D环区作为非编码区,控制着mtDNA的复制与转录,由于自身的结构和功能特点,极易发生变异。变异形式包括突变和多态性,这些变异在疾病的发生和发展过程中起着非常重要的作用。此外,本文还简要介绍了辐射诱导的D环区突变的研究现状及其前景。; 李玉文刘青杰; 关键词：突变多态性

男性不育患者Y染色体的AZF基因微缺失分析被引量：5: 2006年; 目的探索男性不育患者Y染色体AZF基因微缺失的发生情况,为男性不育的临床诊断和治疗提供科学依据。方法应用PCR方法对36例无精或严重少精患者AZF基因的SY84、SY127和SY254进行检测分析。结果在36例患者中发现16例发生AZF基因的微缺失,均为三个基因区段不同组合的缺失。其中涉及AZFa或AZFb缺失的各8例,涉及AZFc缺失的有14例。结论AZF基因的微缺失与某些男性不育密切相关。AZFc缺失可能是男性不育中无精子、严重少精子的主要病因之一。; 陆雪封江彬贾金铭刘青杰; 关键词：男性不育 AZF基因微缺失

电离辐射诱导的两种新线粒体DNA缺失的分析鉴定被引量：3: 2008年; 目的筛选电离辐射诱导的线粒体DNA（mtDNA）缺失类型，并进行鉴定。方法用10Gy^60Coγ射线照射正常人淋巴细胞细胞系，用2对引物的长PCR扩增照射前后样品的mtDNA基因组。发现可能缺失片段后用限制条件的普通PCR进行确认，并对PCR产物进行纯化、克隆、测序和核酸同源性（BLAsT）分析。结果照射前的淋巴细胞系mtDNA样品只扩增出预期全长片段，照射后每对引物还扩增出可能为缺失造成的短片段；进一步限制条件的普通PCR证实了mtDNA缺失的存在。PCR产物经纯化、克隆后测序进行BLAST分析表明两种mtDNA缺失分别为7455bp（重链nt475～7929）、9225bp（重链nt7714～369）的mtDNA缺失，均发生在8bp正向重复序列之间。进一步的生物信息学检索得出两种mtDNA缺失为新发现的mtDNA缺失类型。结论电离辐射诱导出人淋巴细胞mtDNA 7455bp和9225bp缺失。; 刘青杰封江彬赵宝锋陆雪田梅陈德清; 关键词：电离辐射淋巴细胞系线粒体DNA BP BP

滚环DNA扩增技术及其应用被引量：9: 2007年; 滚环扩增技术是一种等温信号扩增方法,DNA可在很短时间内实现指数扩增,因此,可用于痕量分子的检测。目前,该技术既可以扩增环状DNA、RNA,也可以扩增线性DNA,甚至全基因组DNA。目前,该技术主要用于全基因组扩增、核酸测序、单核苷酸多态性以及DNA芯片、蛋白质芯片分析等广泛领域。; 刘青杰陈德清; 关键词：滚环扩增全基因组分析单核苷酸多态性芯片

电离辐射诱导淋巴细胞线粒体DNA 889bp和3895bp缺失的分析被引量：4: 2007年; 探索电离辐射是否诱导人淋巴细胞永生化细胞系mtDNA 889bp和3895bp缺失。对指数生长期的人淋巴细胞永生化细胞系照射10Gy ^(60)Coγ射线,照射后24h、48h提取纯线粒体DNA,用巢式巢式聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法进行线粒体DNA 889bp、3895bp缺失分析,与未照射细胞系进行比较;并将纯化的第二轮PCR产物进行测序和核苷酸同源性分析。结果表明,用于分析线粒体DNA 3895bp缺失的引物,可特异性扩增出10Gy照射诱导的淋巴细胞线粒体DNA 3895bp缺失,该扩增产物经纯化、测序证实线粒体缺失发生在线粒体DNA序列的548-4443bp之间。研究发现,用于扩增线粒体DNA 889bp的引物在扩增出目的DNA片段的同时,也可扩增出未发生缺失的DNA片段。第二轮缺失片段扩增产物经纯化、测序证实线粒体缺失发生在线粒体DNA序列的11688-12576bp之间。所有未照射细胞无线粒体DNA 889bp和3895bp的缺失。说明电离辐射可诱导淋巴细胞线粒体DNA 889bp和3895bp的缺失。; 封江彬陆雪陈德清刘青杰; 关键词：电离辐射线粒体DNA缺失

^(60)Coγ射线照射淋巴细胞诱导PIG3和GADD45基因mRNA变化被引量：13: 2008年; 用^(60)Coγ射线照射正常人外周血永生化淋巴细胞系后,初步分析受照细胞中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平的改变状况,并探讨上述基因作为辐射生物剂量计的可能性及意义。用^(60)Coγ射线照射淋巴细胞,采用不同剂量(0～10Gy)照射和照射后不同时间点(0～72h)收集细胞,抽提mRNA,用Real-time PCR检测细胞中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平的变化。结果表明,正常人外周血永生化淋巴细胞系中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平随照射剂量的增高而增加,并呈现出剂量效应关系。5Gy剂量^(60)Coγ射线照射后,淋巴细胞中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平随时间的推移不断增高,在8h时均达到最高,随后开始降低。PIG3和GADD45基因对辐射均较敏感,其表达具有良好的剂量效应和时间效应关系,但相比而言,PIG3的表达随照射剂量和照射后时间的变化更加显著,更有潜力作为生物剂量计以满足实际需要。; 潘艳李玉文封江彬陆雪刘青杰苏旭; 关键词：淋巴细胞 GADD45

电离辐射诱发的淋巴细胞线粒体DNA多个片段缺失的分析被引量：7: 2008年; 背景与目的:探讨电离辐射是否诱发人淋巴细胞永生化细胞系中mtDNA中多个片段的缺失。材料与方法:用10Gy60Coγ射线照射指数生长期的人淋巴细胞永生化细胞系,照射后24h、48h提取纯线粒体DNA,用巢式PCR方法进行线粒体DNA889bp、3895bp和7436bp的缺失分析,并与未照射细胞进行比较;并将纯化的最后一轮PCR产物进行DNA测序和核苷酸同源性分析。结果:用于分析线粒体DNA3895bp缺失的并引物对可特异性扩增出线粒体DNA3895bp缺失,该扩增产物经纯化、测序证实线粒体缺失发生在线粒体DNA序列的nt548～4443之间。用于扩增线粒体DNA889bp的引物对可扩增出目的DNA片段,同时也可扩增出未发生缺失的DNA片段,扩增产物经纯化、测序,证实线粒体缺失发生在线粒体DNA序列的nt11688～12576之间。所有未照射细胞无线粒体DNA889bp和3895bp的缺失。而照射前后mtDNA7436bp缺失并未增加。结论:电离辐射可诱发淋巴细胞线粒体DNA889bp和3895bp的缺失,而对7436bp缺失影响不大。; 封江彬陆雪陈德清刘青杰; 关键词：电离辐射淋巴细胞系线粒体DNA缺失

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