国家转基因植物研究与产业化专项(J00-A-009)
- 作品数：5 被引量：30H指数：3
- 相关作者：李宝健许新萍朱华晨刘良式肖国樱更多>>
- 相关机构：中山大学国家杂交水稻工程技术研究中心中国科学院亚热带农业生态研究所更多>>
- 发文基金：国家转基因植物研究与产业化专项广东省科技计划工业攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 利用四价抗病基因提高超级杂交稻的抗性被引量：16
- 2006年
- 以籼型超级杂交稻(Oryza sativaL.subsp.indica)恢复系9311的胚性愈伤组织为受体,采用改良的基因枪轰击法将构建在同一植物表达载体上的四价抗真菌病基因(RCH10,RAC22,β-Glu和B-RIP)导入到9311的基因组中.Southern印迹杂交结果表明,潮霉素抗性再生植株中,hpt标记基因和四价抗真菌病基因是连锁在一起并以孟德尔遗传方式进行传递的.部分转基因R1代和R2代植株分别在烟溪和三亚的典型稻瘟病鉴定圃中表现出对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea(Hebert) Barr.)的高抗性.在高抗的转基因植株中,多个外源基因均能正常表达.将高抗稻瘟病的9311R2代转基因纯系与培矮64S原种进行杂交,杂种F1代除对稻瘟病仍可表现出高抗性外,还同时表现出对稻曲病和黑粉病明显提高的抗性.
- 朱华晨许新萍肖国樱袁隆平李宝健
- 关键词：超级杂交稻稻瘟病稻曲病黑粉病抗病性
- 水稻矮化突变体G蛋白α亚基基因的结构和表达被引量：3
- 2004年
- 利用γ-Co60辐射诱发水稻特光矮-2(Oryza sativa L.cv.TGA-2)产生变异,获得一种稳定遗传的新型水稻矮化突变体dwarf69。dwarf69和TGA-2及其杂交后代F1、F2、F3成熟期的株高数据表明矮化表型受一对隐性基因控制。进一步研究发现,虽然dwarf69和TGA-2的G蛋白α亚基基因(Rice G protein alpha-subunit,RGA)编码区核苷酸序列只有一个核苷酸的差异,但RGA在野生型TGA-2中的表达量明显高于在突变体dwarf69中的表达量。对矮化突变体dwarf69和野生型TGA-2的RGA基因5'上游区的序列分析表明,dwarf69 RGA 5'上游区比TGA-2RGA 5'上游区多出1 076 bp。首次报道水稻矮化突变体中的RGA 5'上游区序列与其野生种的RGA 5'上游区序列存在显著的差异。
- 费小雯邓晓东王永胜刘良式徐增富
- 关键词：水稻矮化突变体
- 线粒体定位序列介导的绿色荧光蛋白基因在烟草中表达的分析被引量：3
- 2002年
- 由于绿色荧光蛋白可在活组织或细胞中直接检出 ,因而近年已在转基因植物的研究中用作报告基因 ,这样可在植物生长的任何阶段进行活体筛选和鉴定。本研究利用线粒体定位序列对改良 gfp基因在转基因烟草中的表达进行了观察 ,结果表明 :将GFP直接在细胞质中大量表达会对植物细胞产生毒性 ,从而影响植物细胞的分化 ,而将其定位在线粒体中 ,则从转化细胞产生植株的频率明显增高。
- 贺竹梅李华平陈谷黄定华李志芳刘荣维李宝健
- 关键词：绿色荧光蛋白转基因植物烟草荧光强度
- 水稻小GTP蛋白OsRab5A的表达、纯化和GTP结合分析(英文)
- 2002年
- 小GTP结合蛋白是一类在细胞内的运输过程中重要作用的蛋白。它们通过结合子GTP而激活 ,当GTP被水解为GDP后处于非活性状态。哺乳动物中的研究表明 ,Rab5A蛋白是细胞内的形成早期内吞体 (earlyendosome)的限速因子。证实了所克隆的水稻rab5A基因编码的蛋白具有GTP结合功能。将Osrab5A基因的编码序列按正确读码框重组到pGEX4T1载体中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,电泳判定插入片段大小无误后 ,进一步测序鉴定其读码也无误。将该克隆命名为pG_5AE。以IPTG诱导 pG_5AE所编码的融合蛋白GST_OsRab5A的表达。SDS_PAGE电泳与无外源质粒和表达谷胱甘肽硫转移酶 (GST)的对照相比 ,得到了预计大小的融合蛋白。以GSTrapTM亲和柱纯化融合蛋白。在不同的泳道分离纯化的融合蛋白和作为对照的含GST以及无外源蛋白的细菌总蛋白 ,电转移到硝酸纤维膜上。将该膜与α_3 2 PGTP温育 ,洗膜 ,放射自显影后 ,获得了融合蛋白结合GTP的结果 ,这表明在原核中表达出的水稻Rab5A蛋白能在体外结合GTP。
- 刘筱斌林慧贤梁承邺刘良式
- 关键词：水稻基因表达纯化融合蛋白
- 一种简捷的Southern印迹杂交方法被引量：8
- 2004年
- 在综合前人方法的基础上,发展了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案。使用0 4mol LNaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,晾干膜后无需固定就可以直接用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统,该缓冲系统中仅需10g LBSA作为封闭剂即可。整个洗膜过程可简化为一种溶液、2～3次洗涤。碱变性及转移后的尼龙膜,也可以用于地高辛(DIG)等非放射性检测系统,并可耐多轮杂交和洗脱。本方法可适用于包括高等植物基因组在内的多种生物材料的DNA检测。
- 朱华晨许新萍李宝健
- 关键词：DNA杂交植物基因组
