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温州市科技计划项目(Y20100016)
作品数:
1
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王良国
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转录因子Pax-8基因干扰后线粒体功能对心肌细胞凋亡的影响
被引量:2
2013年
目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,引起线粒体功能的变化,借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8siRNA)组],阴性对照组[非特异性siRNA(NCsiRNA)组]和空白对照组(BCsiRNA组)。荧光分光光度法检测半胱天冬酶(caspase-3)活性以反映细胞凋亡,RT—PCR测定B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcelllymphoma/lewkmia-2,Bcl2)和其同源类似物Bax的mRNA表达,Westernblot测定Bcl2、Bax和胞浆细胞色素C(Cyto)的蛋白表达,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(△咿m,用JC-1单体/聚合物比值来衡量线粒体去极化的比例,比值越大,△ψm越低)。结果Pax-8siRNA组心肌细胞caspase-3活性(0.167±0.012)明显高于NCsiRNA组(0.075±0.021)和BCsiRNA组(0.072±0.019),P均〈0.05。Pax-8siRNA组Bcl,mRNA和蛋白的表达水平(分别为0.61±0.06和0.94±0.11)明显低于NCsiRNA组(分别为0.90±0.070和1.39±0.15)和BCsiRNA组(分别为0.94±0.09和1.49±0.20),P均〈0.05。Pax-8siRNA组BaxmRNA和蛋白表达水平(分别为1.05±0.10和1.25±0.12)明显高于NCsiRNA组(分别为0.72±0.03和0.99±0.12)和BCsiRNA组(分别为0.64±0.03和0.92±0.06),P均〈0.05。Pax-8siRNA组心肌细胞线粒体释放Cyto至胞浆的量(0.75±0.14)明显高于NCsiRNA组(0.51±0.06)和BCsiRNA组(0.48±0.07),P均〈0.05。Pax-8siRNA组JC-1单体/聚合物比值(0.163±0.011)明显高于NCsiRNA组(0.092±0.015)和BCsiRNA组(0.072±0.025),P均〈0.05,提示Aqtm明显低于NCsiRNA组和BCsiRNA组(P均〈0.05)。NCsiRNA组与BCsiRNA组上述指标比较,差异均无统计学意义。结论Pax-8基因干扰心肌细胞,促进了心肌细胞的凋亡,线粒体参与了心肌�
戴晓春
周希
黄晓燕
王良国
林素
杨德业
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肌细胞
细胞凋亡
线粒体
转录因子
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