国家自然科学基金(31060350)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
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- 阿拉瑞林免疫影响FSHR表达及FSHR生物信息学分析被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨阿拉瑞林主动免疫绵羊对垂体和卵巢FSHR表达的作用，分析绵羊FSHR的生物信息学特点。方法：42只5～6月龄母绵羊随机分为6组（n＝7），EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0 d和14 d皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg；EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg，0、7、14、21 d各一次，共4次；对照组在0 d和14 d皮下注射抗原溶媒2.0ml。于70 d（实验结束时）屠宰动物，无菌采集垂体和卵巢。从绵羊垂体中提取FSH，进行PCR扩增、克隆和测序，荧光定量PCR分析，将得到的序列运用生物信息学软件行分析，用Western blot检测卵巢FSHR蛋白表达。结果：实验组垂体FSHR mRNA的2^-ΔΔCt均低于对照组， EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的2^-ΔΔCt值逐渐下降；而且EG-Ⅳ低于EG-Ⅰ，EG-Ⅴ低于EG-Ⅱ，即注射阿拉瑞林4次后FSHR mRNA的2^-ΔΔCt值分别低于注射2次后的值。各实验组卵巢FSHR蛋白表达量随阿拉瑞林注射剂量的增加而逐渐增加，EG-IV和EG-V卵巢FSHR蛋白显著高于对照组相比（P＜0.01）。 FSHR序列为1091 bp，开放阅读框（0RF）780 bp，位于41～820位点，其半衰期、理论等电点、不稳定指数、疏水性平均值和脂肪指数分别为1.2 h、5.05、47.75、0.836和30.61。结论：阿拉瑞林免疫可抑制垂体FSHR mRNA的表达，但是增加卵巢FSHR蛋白表达；FSHR蛋白为不稳定的疏水性蛋白。
- 雷池月巩转娣韦敏欧阳霞辉谢坤陈士恩魏锁成
- 关键词：GNRH激动剂主动免疫生物信息学
- GnRHa主动免疫对绵羊FSH与LH分泌及阴道电阻的作用研究
- (目的)探讨GnRH激动剂免疫对生殖激素和阴道电阻(VER)的作用,为合理进行超排和生殖调节提供依据。(方法)42只5～6月龄健康母绵羊随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、...
- 魏锁成邹文辉张勇宋洋铭巩转娣张峰李玉孔
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂绵羊
- 文献传递
- 垂体GnRHR、FHS-β和LH-β基因表达与GnRHR生物信息学研究被引量：2
- 2011年
- 为探讨GnRH-A激动剂主动免疫对雌兔垂体GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA表达的影响及调节动物生殖功能的分子机理。24只日本大耳白兔分为4组,在EG-I、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ兔的颈背侧注射100?g、100?g和50?gGnRH-A抗原,EG-Ⅱ和EG-Ⅲ20d加强注射一次,用荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA的表达,并测定GnRHR的核苷酸序列。结果表明雌兔垂体中存在GnRHR、FSH-β和LH-β基因。EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的GnRHR、FSH-β和LH-βΔΔCt均显著高于EG-Ⅰ(P<0.05)。GnRHR、FSH-β和LH-β的核苷酸序列的同源性分别为98%、100%和94%;GnRHR中α-螺旋占36.63%,理论等电点(pI)5.01,不稳定指数57.08,脂肪指数29.1,疏水性平均值(GRAVY)0.872,表明该蛋白为不稳定的疏水性信号蛋。GnRH-A能明显的影响兔GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA在垂体中的表达,而且重复注射会加大这种变化。
- 魏锁成巩转娣韦敏
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂GNRH受体垂体生物信息学雌兔
- 阿拉瑞林免疫对FSHR表达与子宫发育的影响被引量：1
- 2013年
- 为研究GnRHa主动免疫对绵羊子宫FSHR表达与分布及子宫发育的作用,探讨GnRHa调节生殖功能的机制,将42只5～6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ动物分别皮下注射阿拉瑞林(alarelin)抗原200、300和400μg,0 d和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ动物皮下注射alarelin抗原200μg和300μg,0、7、14和21 d各1次;对照组皮下注射药物溶媒,0 d和14 d各1次。于70 d在颈动脉放血处死绵羊,无菌切取两侧子宫角。免疫组织化学SP法染色并进行图像分析,光学显微镜和电子显微镜分别观察子宫显微和超微结构变化。Western blot分析FSHR蛋白表达。结果发现各试验组FSHR蛋白表达量随着alarelin免疫剂量和次数的增多而逐渐增加。EG-Ⅲ和EG-Ⅴ极显著高于对照组(P<0.01)。FSHR主要分布于子宫内膜细胞和子宫腺上皮细胞的胞质和胞核;EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ灰度值逐渐升高,EG-Ⅲ和EG-V(P<0.01)显著高于CG,证明alarelin主动免疫能增强子宫FSHR的分布与表达,加大注射剂量和次数作用更明显。EG-I、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的子宫质量、UWT和EET均变小,EG-Ⅲ和EG-Ⅴ显著小于对照组(P<0.05)。试验组出现不同程度的子宫壁和上皮变薄,细胞胞质减少,腺体数量减少,腺腔缩小,平滑肌细胞及核均变小。线粒体和线粒体嵴减少,微绒毛变短,以EG-Ⅲ最明显。结果表明,Alarelin主动免疫母羊能增强子宫FSHR的分布与蛋白表达,使子宫超微和超微结构明显改变,抑制子宫发育,尤其是子宫内膜的生长显著受阻。
- 魏锁成巩转娣安利峰谢坤李玉孔
- 关键词：阿拉瑞林蛋白表达组织学结构子宫母羊
- 阿拉瑞林主动免疫对绵羊垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及卵巢GnRHR分布的影响被引量：3
- 2012年
- 为探讨促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂主动免疫对绵羊腺垂体GnRH受体(GnRHR)、促卵泡激素受体(FSHR)和促黄体激素受体(LHR)表达及分布的影响,将42只5～6月龄母绵羊分为6组(n=7),即EG-Ⅰ组、EG-Ⅱ组、EG-Ⅲ组、EG-Ⅳ组、EG-Ⅴ组和对照组(CG)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组绵羊分别皮下注射200μg、300μg和400μg阿拉瑞林抗原,分2次皮下注射(0 d和14 d),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ组绵羊分别皮下注射200μg和300μg阿拉瑞林抗原,分4次皮下注射(0 d、7 d、14 d和21 d),对照组(CG)绵羊皮下注射2.0 ml溶剂,分2次(0 d和14 d)。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢,提取垂体总RNA,PCR扩增,反转录,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,免疫组织化学SP法染色。结果表明,GnRHR、FSHR和LHR mRNA PCR扩增曲线的起始循环数分别为20、28和24。5个试验组Gn-RHR、FSHR和LHR mRNA值均低于对照,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组的mRNA值逐渐下降;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ组的mRNA值分别低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ组。GnRHR阳性染色主要分布在卵泡细胞以及卵母细胞胞质和胞核及胞膜。各组的染色强度不同,以EG-Ⅲ阳性染色最为明显。阴性对照全部为阴性。显微图像的绿色值和亮度无显著差异,各组灰度值差异显著(P<0.05),以EG-Ⅱ均为最小,EG-Ⅴ最高。EG-Ⅰ的饱和度最小(P<0.05),EG-Ⅲ最高。上述结果说明阿拉瑞林抗原免疫抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNA表达,GnRHR阳性染色主要在卵母细胞和卵泡细胞的胞核和胞质。阿拉瑞林免疫可抑制卵巢GnRHR的分布与表达,增加注射剂量和次数作用更明显。
- 魏锁成巩转娣董江陵谢坤韦敏张杰王江川
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂阿拉瑞林卵巢绵羊
- Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨GnRHa主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素的作用。方法 42只5～6月龄母绵羊均分为6组。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg,0和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ皮下注射阿拉瑞林抗原200、300μg,0、7、14和21 d各1次;对照组皮下注射药物的溶媒。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢。实时荧光定量PCR测定GnRHR、FSHR和LHR mRNA的表达。ELISA测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果实验组GnRHR、FSHR和LHR mRNAs的2-(ΔΔCt)值均低于对照组,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ的GnRHR、FSHR和LHR mRNA的2-(ΔΔCt)值低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ(P<0.05)。EG-Ⅰ和EG-Ⅱ血清GnRH在21和28 d达到谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45d达到谷值(P<0.01)。实验组血清FSH始终高于对照组(P<0.05),EG-IV和EG-V在45和60 d达到峰值(P<0.01)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ血清LH分别在21、21和28 d抵至谷值(P<0.05),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35 d抵至谷值(P<0.01);35 d时,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。结论阿拉瑞林主动免疫可抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNAs表达,促进FSH的合成与释放,降低GnRH和LH的合成与释放,增加抗原的注射剂量和次数,作用更明显。
- 魏锁成巩转娣董江陵谢坤李琼毅韦敏
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂生殖激素绵羊
- GnRH激动剂主动免疫对GnRHR在腺垂体与子宫表达及分布的作用研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨GnRH激动剂主动免疫对绵羊腺垂体与子宫GnRHR表达及分布的影响,为深入研究GnRH-A调节生殖功能的机理及合理应用提供依据。方法 28只5～6月龄健康母绵羊(Ovis aries)随机分为4组(n=7),实验Ⅰ组(EG-Ⅰ)、实验Ⅱ组(EG-Ⅱ)和实验Ⅲ组(EG-Ⅲ)于0 d和14 d分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg(0 d和14 d各1次);对照组(CG)皮下注射2.0 ml药物的溶媒(0 d和14 d各1次)。各组于70 d无菌切取腺垂体和子宫。提取腺垂体总RNA,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测GnRHR mRNA表达的变化,Western blotting分析子宫GnRHR蛋白表达,免疫组织化学SP法染色检测GnRHR表达的变化。结果 EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ腺垂体GnRHR mRNA表达量均低于对照组,以EG-Ⅲ最小(P<0.01)。与CG相比,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ子宫GnRHR蛋白表达水平分别减少3.46%、4.90%和24.78%(P<0.05)。子宫组织中有GnRHR分布主要见于子宫内膜细胞和子宫腺上皮细胞的胞质和胞核,EG-Ⅲ灰度值显著低于CG(P<0.05)。结论 GnRH激动剂主动免疫可以剂量依赖性地抑制垂体GnRHR mRNA和子宫组织中GnRHR蛋白的表达。GnRHR主要分布在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞的胞核和胞质,GnRHR激动剂免疫对子宫中GnRHR的分布具有抑制作用。
- 魏锁成巩转娣董江陵韦敏谢坤张杰王江川
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂GNRH受体子宫
- GnRH激动剂主动免疫母羊对生殖激素分泌的作用被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5～6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300、0、7、14和21天各一次,共4次;对照组在0和14天皮下注射抗原溶媒(除不用阿拉瑞林外,其余成分和制备方法与阿拉瑞林抗原相同)2.0 ml。无菌采集不同时段的血液,分离血清。以ELISA测定血清GnRH抗体浓度,用激素检测试剂盒(ELISA)分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果:①阿拉瑞林首次免疫7天后,各实验组的抗体浓度逐渐升高,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28、28和35天达到峰值(P<0.05),EG-IV和EG-V则在在45天达到峰值(P<0.01),至60天时仍明显高于对照组(P<0.05)。14～60天间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ(P<0.05)。②EG-Ⅰ、EG-Ⅱ的GnRH在21和28天抵谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45天抵谷值(P<0.01),且以EG-Ⅴ为最低。谷值之后逐渐上升趋势,70天时达到免疫注射前水平。③实验组血清FSH浓度始终高于对照组(P<0.05)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于28、28和35天达到峰值(P<0.05),而EG-IV和EG-V在60天达到高峰值(P<0.01)。④实验组绵羊血清LH呈下降趋势,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在21、21和28天达到谷值(P<0.01),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35天达到谷值(P<0.01)。35天时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。⑤各组的血清E2含量无显著差异。结论:GnRH激动剂(阿拉瑞林)抗原主动免疫可促进GnRH抗体的生成,抑制母羊GnRH和LH的合成与分泌,增强FSH的合成与分泌,且随着注射剂量和注射次数的增加,这种作用更加明显,而对血清E2无明显影响。
- 魏锁成巩转娣欧阳霞辉董江陵李琼毅韦敏谢坤张锋孙建龙
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂阿拉瑞林生殖激素
- GnRHa主动免疫对幼鼠子宫发育的作用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)主动免疫对幼鼠子宫发育的作用。方法 60只昆明雌鼠随机均分为四组,分别颈部皮下注射不同剂量阿拉瑞林抗原,各组均连续注射7 d。在0 d、7 d、14 d和21 d测定体重,于21 d处理小鼠,显微镜观察子宫的组织结构变化,并用Motic imagles软件测定分析图像数据。结果阿拉瑞林能明显抑制子宫的发育,且剂量越大作用越明显。EG-Ⅲ的UWT明显缩小(P<0.05);实验组EET均小于对照组(P<0.05)。EG-Ⅰ子宫腔轻度缩小;EG-Ⅱ子宫腔和腺体管腔缩小,子宫管壁明显变薄;内膜皱襞减少,上皮变薄;EG-Ⅲ子宫壁变薄,子宫腺减少,内膜细胞胞核变小,上皮变薄,胞质明显减少。结论阿拉瑞林主动免疫能显著抑制幼鼠的子宫发育,且连续重复免疫对小鼠具有毒性作用,剂量越大,作用越明显。
- 巩转娣魏锁成韦敏李久海张峰王瑞博
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂显微结构子宫
- 不同品级拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina)脑部雌激素相关受体基因的表达被引量：2
- 2012年
- 采用原位杂交方法对不同品级拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina)脑部雌激素相关受体pvERRmRNA的表达进行了检测.结果表明,pvERRmRNA在不同品级的蕈形体、附叶、视叶、中脑、食道下神经节和球状细胞中都有表达.蚁后蕈形体和球状细胞中pvERRmRNA的阳性表达最为明显;工蚁中脑pvERR mRNA的阳性反应强度明显高于蚁后和雄蚁;pvERR mRNA在雄蚁视叶中有较强的表达.pvERR mRNA在不同品级的拟黑多刺蚁脑部的表达差异可能与它们各自在蚁群中的功能和行为有关.
- 欧阳霞辉李春鸣魏锁成侯兰新奚耕思
- 关键词：拟黑多刺蚁原位杂交
