国家自然科学基金(30800881)
- 作品数：2 被引量：9H指数：1
- 相关作者：于波吴华玲黄天带戴雪梅曾日中更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院中国热带农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 巴西橡胶树乳管高效表达焦磷酸酶基因双元表达载体的构建
- 2009年
- 巴西橡胶树橡胶生物合成过程中,焦磷酸酶(PPase)具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高其在乳管中的表达,有可能促进橡胶的生物合成,从而提高橡胶树产量。笔者以巴西橡胶树叶片为材料提取DNA,用特异引物经PCR扩增获得了378bp的REF启动子片段,该片段序列与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.68%和99.47%。以胶乳为材料提取总RNA,用特异引物经RT-PCR方法获得了2310bp的V-PPase基因片段,该片段序列与NCBI报道的V-PPase基因序列一致。然后通过酶切和连接,将REF启动子和V-PPase基因重组到植物表达载体pCAMBIA1301中,构建了含有潮霉素磷酸转移酶基因(hptⅡ)的乳管高效表达V-PPase基因的载体pC1301RV,然后用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,为进一步通过转基因技术转化橡胶树奠定了基础。
- 于波吴华玲曾日中
- 关键词：橡胶树焦磷酸酶根癌农杆菌
- 根癌农杆菌介导的巴西橡胶树胚性悬浮细胞的遗传转化被引量：9
- 2012年
- 为了建立橡胶树胚性悬浮细胞遗传转化体系,用根癌农杆菌EHA105(携带pCAMBIA1301,含有gusA和hptⅡ)侵染胚性悬浮细胞团,用GUS检测的方法分析了共培养时间和菌液浓度对转化效率的影响;同时,测定了胚性细胞团对潮霉素敏感性。结果表明,适宜的共培养时间为3天,适宜的菌液浓度为OD600=0.4～0.6。潮霉素的致死剂量为15mg/L。使用大约1g鲜重的胚性细胞团,经过转化和选择培养,获得53块抗性愈伤组织,经诱导获得7个体细胞胚。GUS检测和PCR鉴定证实了gusA基因已经整合到橡胶树基因组中。本研究为根癌农杆菌介导的橡胶树胚性悬浮细胞遗传转化体系建立奠定了基础。
- 于波吴华玲黄天带戴雪梅
- 关键词：橡胶树根癌农杆菌胚性悬浮细胞
