国家自然科学基金(30871256)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王英明乔守怡方晓吴燕华穆颖更多>>
- 相关机构：复旦大学医学部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- BRMS1过表达促进肝癌SK-HEP-1细胞凋亡被引量：3
- 2009年
- BRMS1基因和多种肿瘤的转移有关,但其在肝癌发生和转移中的作用及机制仍有待研究.Westernblot的结果显示在SK-HEP-1细胞中检测到差异剪接体2的表达,Hep G2细胞仅检测到差异剪接体1,而L-02和Hep 3B细胞两种差异剪接体都表达,而且在表达差异剪接体1的3株细胞中,Hep 3B细胞差异剪接体1的表达量较高,另两个较低.实时定量PCR对BRMS1基因差异剪接体1的表达进一步检测,发现SK-HEP-1细胞的表达水平最低,Hep 3B最高,L-02和Hep G2介于两者之间.随后以Hep G2细胞的mRNA为模板,扩增人的BRMS1基因差异剪接体1,构建pEGFP-BRMS1质粒,在SK-HEP-1细胞株进行过表达,并用Annexin V-PE和7-AAD双染的流式细胞术研究BRMS1对SK-HEP-1细胞凋亡的影响,结果显示:pEGFP-BRMS1转染组两种染料双阳性,即处于凋亡后期的细胞数目显著高于pEGFP-N2对照组;用PI单染检测存活率,发现pEGFP-BRMS1转染组与pEGFP-N2对照组相比存活率显著降低.上述实验结果表明,BRMS1基因的过表达能够促进SK-HEP-1细胞的凋亡,抑制细胞生存,从而为BRMS1基因抑制肝癌转移机制的阐明提供思路.
- 方晓王英明乔守怡
- 关键词：细胞凋亡肝癌
- 类泛素蛋白FAT10共价结合底物蛋白质的活性分析被引量：1
- 2012年
- 目的探讨类泛素蛋白FAT10的C末端双甘氨酸基团及双泛素结构域结合修饰底物蛋白质的活性。方法分别将野生型全长FAT10,C末端双甘氨酸的缺失突变体FAT10ΔGG,分别包含N端、C端泛素结构域的截断突变体FAT10-N和FAT10-C构建到真核表达载体中,转染HEK293T细胞,并使用26S蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞。利用Western blot方法检测野生型FAT10及其突变体结合底物蛋白质的活性。结果与野生型FAT10的蛋白质底物结合能力相比,FAT10ΔGG、FAT10-N、FAT10-C与底物蛋白质结合能力均显著下降。蛋白酶体抑制剂MG132能够促进FAT10及其突变体的底物结合活性。结论 FAT10的C末端双甘氨酸基团及双泛素结构域都是FAT10与底物共价结合所需的活性基团,被FAT10标记后的底物蛋白质通过26S蛋白酶体途径降解。
- 于欣王英明吴燕华金成学穆颖乔守怡
- 关键词：FAT10
