济南市科技发展计划项目(201201077)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 天蚕素AD和BuforinⅡ表达载体的改良和融合蛋白表达条件优化被引量：1
- 2013年
- 为提高重组大肠杆菌表达天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白的表达效率,研究表达菌株、质粒稳定性和诱导条件对天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白表达的影响。通过SDS-PAGE分析目的蛋白占全菌总蛋白的含量,确定大肠杆菌BER2566为表达菌株;利用基因工程技术,构建卡那霉素抗性的表达质粒pET(K)-Trx-CADBuforinII,提高质粒稳定性和蛋白表达效率;优化了IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等诱导条件,确定菌体浓度为OD600=0.8时,IPTG浓度为0.8mmol·L-1,诱导时间为5h,目的蛋白表达量最高,可达到全菌总蛋白含量的50%以上。
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- 关键词：大肠杆菌蛋白表达
- 重组大肠杆菌利用乳糖自诱导系统融合表达天蚕素AD和蛙BuforinⅡ被引量：1
- 2014年
- 以包含质粒pET-Trx-CAD-BuforinⅡ的大肠杆菌BL21(DE3)为研究对象,开发了一种利用乳糖自诱导方式表达天蚕素AD和蛙BuforinⅡ的表达系统。首先,在LB培养基中研究了乳糖浓度、诱导时机和诱导时间对目的蛋白表达的影响。然后,利用"分解代谢物阻遏"原理构建乳糖自诱导表达系统,以"葡萄糖+主碳源"两种碳源的依次代谢将蛋白表达过程分为两个阶段:第一阶段为菌体生长阶段,菌体利用葡萄糖生长,乳糖无法进入细胞诱导蛋白表达;第二阶段为蛋白表达阶段,葡萄糖耗尽,菌体开始利用主碳源生长;同时乳糖进入细胞诱导蛋白表达。最后,利用优选的"葡萄糖+木糖"组合自诱导表达天蚕素AD和BuforinⅡ的融合蛋白,得到的目的蛋白占全菌总蛋白含量的45.2%。
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- 关键词：大肠杆菌乳糖
