国家自然科学基金(31000398)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：杜冰钱旻潘新华李瑞梅黄侃更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Glypican-3的原核表达及其单克隆抗体的制备和初步应用
- 2012年
- 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3)是一类主要表达在原发性肝细胞癌表面的硫酸乙酰肝素聚糖蛋白,是一种重要的肝癌标志物。本实验通过构建含有Glypican-3C端原核载体pIGH3-GPC3并诱导表达,以之免疫BALB/c小鼠后筛选到两株分泌特异性抗Glypican-3抗体的杂交瘤细胞株GPC3-9和GPC3-11,抗体亲和力常数分别达到1.24×109 mol/L和1.668×109 mol/L;经ELISA、Western blot以及免疫荧光试验进一步验证了GPC3-9和GPC3-11均能特异性识别原核表达或肝癌细胞内源性Glypican-3分子,具有潜在的开发及应用前景。
- 黄侃唐喆伟顾虹洁岳苗苗任华钱旻杜冰
- 关键词：原发性肝癌GLYPICAN-3原核表达单克隆抗体
- P2Y6稳定干扰乳腺癌细胞系的建立及其增殖能力评价被引量：1
- 2012年
- 目的:应用shRNA技术,构建P2Y6基因稳定干扰的乳腺癌细胞株,为P2Y6调控乳腺癌发生发展的功能及机制研究奠定基础。方法:以人P2Y6基因为靶序列,设计并合成干扰序列,并将其插入经EcoR I和Age I酶切的PLKO线性化质粒。阳性克隆经EcoRⅠ和NdeⅠ酶切、测序正确后与ps-PAX2、pMD2.G和PLKO重组慢病毒载体共转染293T细胞,包装成完整病毒。病毒经富集后感染乳腺癌细胞BT549,经嘌呤霉素筛选P2Y6稳定干扰的乳腺癌细胞。通过RT-PCR、Western blot等方法检测P2Y6的干扰效率。最后通过MTS实验对P2Y6基因稳定干扰后乳腺癌细胞的增殖能力进行评价。结果:阳性克隆经DNA测序后与预期相符。稳定转染P2Y6shRNA的BT549细胞中P2Y6的mRNA和蛋白表达水平与对照组细胞相比明显下降。P2Y6基因干扰后乳腺癌细胞的增殖能力没有显著变化。结论:成功构建人P2Y6基因表达稳定干扰的乳腺癌细胞株BT549。P2Y6的表达与乳腺癌细胞增殖无明显相关性。
- 杨林立李瑞梅潘新华钱旻杜冰
- 关键词：SHRNA慢病毒增殖乳腺癌细胞
