黑龙江省留学归国人员基金(LC02C08)
- 作品数：6 被引量：47H指数：3
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- 鹅α和γ干扰素基因的克隆及序列分析被引量：26
- 2005年
- 从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_γ94.95%;氨基酸序列同源性分别为IFN_α93.72%I、FN_γ93.29%。这为进一步研究鹅干扰素的生物学特性和应用奠定了基础。
- 秘晶玮王君伟许丽娜李洪涛
- 重组鹅IFN-α蛋白在内含肽-冷激诱导表达系统中的表达被引量：2
- 2011年
- 为了在大肠杆菌系统中高效表达具有抗病毒活性的重组鹅IFN-α(GoIFN-α)蛋白,在GoIFN-α基因上游融合内含肽Ssp Dnabmini-intein(SDI)序列,然后克隆至pET-43.1a(+)载体中,再将获得的pET-43.1a(+)-SDI-GoIFN-α重组载体和pColdⅢ载体分别进行双酶切,构建内含肽-冷激表达载体pColdⅢ-Nu-sA-SDI-GoIFN-α,将重组载体转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞,IPTG低温诱导表达。结果表明,融合基因获得高效表达,表达的融合蛋白主要以可溶形式存在。表达产物经Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经CGBQ-GPMV系统检测,证实表达的融合蛋白具有生物学活性,为后续的纯化工作和研究具有天然活性的重组鹅IFN-α奠定了基础。
- 王艺萌崔子寅高明春马波王君伟
- 关键词：内含肽可溶性表达
- 鹅IL-2成熟基因的表达及重组蛋白生物活性检测
- 2009年
- 从PHA活化的东北白鹅外周血淋巴细胞中分离提取总RNA,利用反转录PCR技术扩增获得鹅IL-2(GoIL-2)基因,连接至克隆载体后进行测序鉴定,结果与预期大小一致。将去除信号肽的成熟基因亚克隆至原核表达载体,构建原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌中进行诱导表达,用表达纯化的融合蛋白制备多克隆抗血清。此外,体外淋巴细胞增殖实验结果显示,鹅GoIL-2重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性,这为进一步研究GoIL-2的功能奠定了基础。
- 卫娜鞠环宇王君伟
- 关键词：白细胞介素-2克隆多克隆抗体生物活性
- 鹅γ-干扰素成熟蛋白的表达及其生物学活性研究被引量：17
- 2007年
- 【目的】检测重组鹅IFN-γ的生物学活性。【方法】将鹅IFN-γ成熟蛋白基因分别克隆到原核表达载体pET30a,杆状病毒转移载体pMelBacA和pBlueBacHis2A。对鹅IFN-γ成熟蛋白进行原核和真核表达系统表达;利用体外活性试验检测表达产物的生物学活性。【结果】原核和真核表达系统表达了重组鹅IFN-γ成熟蛋白,并制备其原核表达产物的多克隆抗体;重组鹅成熟IFN-γ可以诱导鹅巨噬细胞产生NO,并能抑制GPMV在鹅胚成纤维细胞中的增殖。【结论】重组鹅成熟IFN-γ具有鹅巨噬细胞激活活性和抗病毒活性。
- 李洪涛马波王君伟金红岩
- 关键词：成熟蛋白原核表达真核表达生物学活性
- 抗鹅α干扰素单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2008年
- 以含有鹅α干扰素(IFN-α)基因的真核表达载体pcDNA3.1-GoIFN-α免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤技术制备抗鹅α干扰素单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究。实验获得2株抗鹅IFN-α的单克隆抗体。经鉴定,Ig亚类均为IgM,轻链为κ链;腹水效价均达到10-4以上;Western blot证实2株McAb均能与重组IFN-α发生反应,出现特异性条带;其中一株单抗能与鹅脾细胞诱导产生的天然干扰素反应;杂交瘤细胞株连续传20代以上及冻存后复苏,细胞生长良好,效价稳定。抗鹅IFN-α单克隆抗体的制备,为研究和检测IFN-α提供了一种重要的手段,并为其在免疫机制研究、免疫功能检测、纯化IFN-α等领域提供了广泛的应用价值。
- 呼鑫鑫王君伟
- 关键词：单克隆抗体
- 抗鸭胸腺细胞单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究被引量：5
- 2008年
- 目的:研究鸭胸腺细胞表面标志。方法:利用杂交瘤细胞融合技术,制备抗鸭胸腺细胞单克隆抗体,并利用免疫组织化学方法研究其反应阳性细胞的组织分布和发生。结果:单克隆抗体C12反应阳性细胞在胸腺,法氏囊和脾脏组织中均有分布,阳性细胞类型不同。结论:C12株杂交瘤细胞分泌的抗体所反应的阳性细胞是成熟的T淋巴细胞和树突状细胞,配体是两者的共同表面标志。
- 李洪涛马波王君伟
- 关键词：胸腺细胞单克隆抗体T淋巴细胞树突状细胞
