河北省科学技术研究与发展计划项目(09276192D)
- 作品数：10 被引量：35H指数：2
- 相关作者：马小兵王献华朱兰侯文娜徐慧蓉更多>>
- 相关机构：河北联合大学淄博市中心医院华北煤炭医学院更多>>
- 发文基金：河北省科学技术研究与发展计划项目河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠矽肺相关基因组织蛋白酶B的电子克隆与验证
- 2014年
- 目的探讨差异表达基因组织蛋白酶B在大鼠矽肺模型中的作用。方法对以往经抑制消减杂交筛选得到的一条编号为ES110708的差异表达序列标签(EST)作为种子序列,通过电子克隆进行延伸,并在大鼠矽肺模型中用RT-PCR方法进行验证。结果筛选得到的大鼠矽肺差异表达EST经电子克隆延伸得到了含有完整开放读码框架(ORF)的cDNA序列,长度为1977bp,比原来的EST片段(172bp)延伸了1805 bp。其ORF预测为1020 bp,符合Kozak规则。将ORF序列进行同源性检索,其与序列号为NM022597.2的cDNA部分序列完全同源,说明所测ORF属于序列NM022597.2。该序列代表的基因是组织蛋白酶B。经RT-PCR验证,实验组大鼠肺组织Cathepsin B mRNA表达量明显上调。15 d、30 d、60 d时,其吸光度(A)值分别为对照组的4.133、6.639、4.981倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论电子克隆能有效延伸EST序列直至全长cDNA序列,差异表达基因组织蛋白酶B可能参与了矽肺的发生与发展。
- 王朝辉马小兵侯文娜徐慧蓉朱兰伊雪
- 关键词：组织蛋白酶B矽肺差异表达基因电子克隆
- 小干扰RNA技术及其在肺纤维化中的应用
- 2011年
- 近年来随着RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术研究的进一步深入,利用该技术可以产生相关基因功能沉默,因此被广泛应用到基因调控的研究中。RNAi技术不仅为疾病发病机制的基础研究提供新的发展道路,而且为在基因水平上对疾病的治疗提供了可能。
- 胡科迪赵静马小兵王献华
- 关键词：肺纤维化
- 二氧化硅刺激矽肺肺泡巨噬细胞上清介导的人胚肺成纤维细胞Ⅲ型胶原和Ⅲ型前胶原的表达被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨经SiO2刺激的肺泡巨噬细胞（AM）通过人胚肺成纤维细胞（HELF）对Ⅲ型胶原（CⅢ）和Ⅲ型前胶原（pCⅢ）表达的影响及抗TGF-β1抗体的干预作用.方法 收集矽肺患者AM,将其分为加入SiO2粉尘悬液的处理组和仅加入无血清培养液的对照组.培养18 h后获取培养上清.将原代培养的HELF分为：（1）处理组：加入经SiO2刺激的AM上清;（2）对照组：加入未经SiO2刺激的AM上清;（3）空白对照组：仅加入含体积分数为3%胎牛血清的DMEM;（4）处理组＋抗转化生长因子β1（TGF-β1）抗体干预组：在处理组的基础上加上抗TGF-β1抗体（10 μg/ml）;（5）对照组＋抗TGF-β1抗体干预组：在对照组的基础上加上抗TGF-β1抗体（10 μg/ml）.前3组分别培养6、12、18、24、36、48 h,后2组分别培养18、24、36 h,用免疫细胞化学法检测HELF中pCⅢ的表达,用免疫印迹（Western blot）法检测HELF条件培养上清中CⅢ的表达.结果 与对照组（0.1212±0.0079、0.1414±0.0058、0.1620±0.0081、0.1965±0.0103、0.1715±0.0116）相比,处理组12、18、24、36和48 h pCⅢ表达（0.1423±0.0107,0.1624±0.0011,0.1925±0.0056,0.2421±0.0097,0.2102±0.0103）明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.与对照组（0.2296±0.0121、0.2778±0.0116、0.3367±0.0269、0.3722±0.0214）相比,处理组12、18、24、36、48 hCⅢ含量（0.2559±0.0061、0.3249±0.0110、0.4171±0.0193、0.5441±0.0452、0.4751±0.0252）明显增高,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.与同期相对应的非干预组相比,18、24、36 h抗TGF-β1抗体干预组CⅢ和pCⅢ均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）.结论 SiO2经AM的介导,诱导HELF高表达CⅢ和pCⅢ,部分效应是通过TGF-β1起作用.
- 朱兰冯莉孙影王献华马小兵
- 关键词：二氧化硅成纤维细胞胶原
- 电子克隆技术及其在医学领域的应用被引量：1
- 2012年
- 基于表达序列标签（ESTs）和基因组数据库的电子克隆（insilico cloning）策略，是近年发展起来的一门基因克隆的新技术。其技术核心是利用生物信息学技术组装延伸ESTs序列，获得基因部分乃至全长cDNA序列。它具有投入低、速度快、技术要求低和针对性强等优点。人类疾病发生与基因的关系已经被广泛证实，因此电子克隆技术必将成为疾病研究的重要手段。旨在阐述电子克隆技术在医学领域的应用进展。
- 王朝辉马小兵
- 关键词：表达序列标签电子克隆生物信息学基因克隆
- 矽肺大鼠差异表达基因的筛选与验证被引量：2
- 2012年
- 目的 筛选矽肺大鼠肺组织与正常大鼠肺组织的差异表达基因,并对差异表达基因基质金属蛋白每-12（MMP-12）和组织蛋白酶E（Cathepsin E）进行鉴定,探讨其在矽肺发病中的作用.方法 将健康SD大鼠随机分为模型组（24只）和对照组（6只）,采用非气管暴露法建立雄性SD大鼠矽肺模型,HE染色和VG染色进行肺组织病理观察.对染尘60d的大鼠肺组织,应用基因芯片筛选大鼠肺组织中的差异表达基因.选择明显上调的MMP-12和Cathepsin E基因,用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫组织化学法及蛋白质印迹（Western blot）法进行鉴定.结果 从26 962个基因中共筛选出模型组和对照组的差异表达基因338个,其中上调基因267个,下调基因71个.经RT-PCR验证,染尘后30、60、90d时,模型组大鼠肺组织中MMP-12 mRNA表达的吸光度值分别为对照组的4.306、5.338、6.713倍,Cathepsin E分别为1.434、2.974、3.889倍.经免疫组织化学法验证,染尘后30、60、90 d时,模型组大鼠肺组织中MMP-12蛋白表达的平均吸光度值分别为对照组的1.435、1.746、2.069倍,Cathepsin E分别为1.372、1.663、2.103倍.经Western blot法验证,染尘后30、60、90d时,模型组大鼠肺组织中MMP-12蛋白表达的平均吸光度值分别为对照组的1.214、1.531、1.959倍,Cathepsin E分别为1.262、1.828、1.907倍.与对照组相比,模型组大鼠肺组织中MMP-12和Cathepsin E mRNA和蛋白表达量明显上调,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 应用基因芯片筛选出矽肺大鼠肺组织差异表达基因并得以验证,MMP-12和Cathepsin E可能通过降解肺泡壁基底膜及参与免疫应答等参与矽肺的发生发展过程.
- 徐慧蓉王献华马小兵侯文娜朱兰向聚才孙瑞军
- 关键词：矽肺基因表达基质金属蛋白酶
- 抑制消减杂交技术在筛选矽肺大鼠差异表达基因中的应用
- 2014年
- 目的对正常大鼠肺组织与矽肺大鼠肺组织之间基因表达差异进行比较,筛选与矽肺相关的差异表达基因片段。方法 30只SD大鼠随机分为2个组,对照组6只,实验组24只。实验组大鼠采用非气管暴露法染尘制作矽肺大鼠模型,对照组灌注生理盐水,利用HE切片确定建立模型成功;抑制消减杂交技术构建cDNA双向消减文库;菌液RCR技术初步筛选cDNA消减文库,将获得的阳性克隆进行测序、同源性比对及生物信息学分析。结果扩增消减cDNA文库获得400多个白色阳性克隆,随机挑取252个白色克隆用PCR进行扩增,95%的克隆中均有100-1 500bp的插入片段,经测序,得到具有差异表达的基因175个。经生物信息学分析表明,筛选出的已知差异表达基因与众多生物学过程和分子功能相关,包括物质代谢、物质转运、细胞增殖、细胞凋亡、细胞黏附、信号转导等,其中许多差异表达基因与矽肺的关系尚未被报道。结论利用抑制消减杂交技术可以建立高质量的矽肺正、反向差异消减cDNA文库,筛选与矽肺相关的已知和未知基因,为寻找矽肺诊断和预后的检查指标和筛选治疗靶点提供有用的信息。
- 侯文娜马小兵徐慧蓉陈阳朱兰伊雪
- 关键词：矽肺差异表达基因抑制消减杂交CDNA消减文库
- 抑制消减杂交技术及其在肺纤维化中的应用被引量：1
- 2011年
- 随着人类基因组测序的完成,疾病相关基因的鉴定和克隆将会变得更加方便.分离差异表达基因的方法很多,其中抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）技术是近年来发展起来的一种有效的方法.
- 侯文娜马小兵王献华
- 关键词：抑制消减杂交技术肺纤维化人类基因组测序差异表达基因疾病相关基因
