国家自然科学基金(30200199)
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
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- 相关机构：吉林农业大学山东宝来利来生物工程股份有限公司中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
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- 鸡消化道β-半乳糖苷酶基因缺陷型共生乳酸菌的筛选
- 2003年
- 以健康雏鸡消化道优势共生乳酸菌为试验对象 ,用氮_甲基_氮_硝基_氮_亚硝基胍对其进行 β_半乳糖苷酶基因缺陷型菌株定向诱导突变 ,在选择培养基上对突变体菌株进行筛选。结果成功地对鸡消化道共生乳酸菌进行了诱导突变 ,筛选到 β_半乳糖苷酶基因缺陷型的乳酸菌受体菌株 ,为构建以 β_半乳糖苷酶基因为选择标记的食品级载体表达系统奠定了基础。
- 王春凤孙哲汪明
- 关键词：Β-半乳糖苷酶基因乳酸菌
- 轮状病毒感染的免疫保护机制被引量：2
- 2005年
- 王春凤从彦龙
- 关键词：轮状病毒感染免疫急性腹泻肠道感染病原体RV
- 植酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的作用研究被引量：2
- 2015年
- 通过在培养基中添加不同浓度的植酸,探究了植酸对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)0085和0090菌体生长、芽孢形成的影响及对枯草芽孢杆菌噬菌体P85和P90的抑制效果。结果表明,添加0.150%植酸对其噬菌体P85和P90有明显抑制效果,但影响芽孢的形成;添加0.070%植酸既可以在一定程度上抑制噬菌体P85和P90又不会影响枯草芽孢杆菌及芽孢的生长。
- 刘秀侠穆熙军赵效南王鑫孙学森谷巍
- 关键词：植酸枯草芽孢杆菌噬菌体
- 猪A组轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达
- 2005年
- 以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了1194bp的Vp6基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-TVector中,构建克隆质粒pGEM-T-Vp6。用SacⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM-T-Vp6和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,并将纯化的Vp6基因亚克隆至表达载体pW425t中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-Vp6。将pW425t-Vp6转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coliX13中,经生长功能弥补筛选阳性克隆,通过SDS-PAGE分析,可见约44.88kD的融合蛋白。由Western blot分析,表明该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性,从而为pW425t-Vp6在乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。
- 王春凤丛彦龙刘尚高李玉
- 关键词：轮状病毒VP6基因大肠杆菌
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：3
- 2016年
- 为建立一种敏感、特异、快速的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV N蛋白,亲和层析纯化后作为包被抗原,通过对各反应条件优化选择,建立了PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法,并进行了交叉反应和重复性试验,以及同类成品试剂盒间的应用效果对比试验。最终确定了抗原包被最佳浓度为2μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,血清及酶标二抗孵育时间均为30min,显色时间为10min,检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒等5种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该ELISA检测方法批内和批间重复性的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒效果比较显示符合率为94.7%。本研究建立的间接ELISA方法将为猪群感染野毒PRRSV后的快速诊断及流行病学调查提供一种简便易行、快速高效的血清学抗体检测方法。
- 程福亮李复辉刘洋庆聂兆晶陈甜甜房栋樊梅娜谷巍王春凤
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征N蛋白ELISA
- 猪源植物乳杆菌的诱变选育及其对小鼠免疫性能的影响被引量：2
- 2014年
- 为了获得1株具有较好耐酸耐胆盐、体外黏附率较高的植物乳杆菌,研究其对小鼠免疫性能的影响,试验将植物乳杆菌进行紫外诱变,对其耐酸和耐胆盐性能进行选育,将植物乳杆菌选育株BL-15冻干后,定量溶解,分3次口服(灌胃)BALB/c小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后测定小鼠免疫性能指标的变化情况。结果表明,经过诱变后,从17株诱变株中成功筛选获得了1株耐酸耐胆盐较好、体外黏附率较高的植物乳杆菌BL-15,经小鼠口服后,提高了小鼠生长初期的脾脏指数及细胞因子IL-2的含量,加强免疫后肠内容物中SIgA含量与对照组相比,均差异显著(P<0.05)。说明该菌株可以诱导小鼠产生良好的黏膜免疫应答,提高小鼠的免疫性能。
- 程福亮王春凤聂兆晶姜艳萍王丽荣刘洋庆谷巍
- 关键词：植物乳杆菌诱变选育小鼠免疫性能
- 猪A组轮状病毒Vp4全基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2005年
- 应用RT-PCR技术,从猪A组轮状病毒总RNA中扩增了2 331 bp的Vp4全基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T中,转化至受体菌株JM109中,通过质粒提取、限制性内切酶酶切、PCR、序列测定等方法鉴定,构建出重组阳性克隆质粒pGEM-T-Vp4。经DNASTAR软件分析核苷酸和氨基酸序列,结果显示该实验株与黑龙江株和美国株的同源性最高,均达到99%以上,并具有轮状病毒Vp4全基因的抗原表位区。
- 王春凤于守平杨树宝李玉
- 关键词：轮状病毒
- 重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究被引量：5
- 2014年
- 为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID50,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×210 U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。
- 程福亮聂兆晶陈甜甜刘洋庆房栋崔兆连谷巍王春凤
- 关键词：生物活性
- 猪A组轮状病毒Vp4全基因在MA-104细胞中的表达与DNA疫苗的研究
- 2006年
- 本研究采用LipofectamineTM2000将真核重组表达质粒pVAXI-Vp4转染至MA-104细胞中,得到了表达。以荧光抗体检测法和RT-PCR法双重检测了真核重组表达质粒pVAXI-Vp4在MA-104细胞中的表达情况。并将pVAXI-Vp4免疫BALB/c鼠,检测其血清抗体和脾脏中的淋巴细胞增殖情况及CD4+,CD8+T细胞的数量变化情况。结果表明,猪A组轮状病毒Vp4全基因不但在哺乳动物细胞中获得了表达,而且将真核重组表达质粒pVAX-I-Vp4给动物免疫后,获得了免疫效果。这为pVAXI-Vp4DNA核酸疫苗的进一步推广应用提供了科学依据。
- 张二芹王会岩宫宇宏王春凤
- 关键词：免疫活性
- 食品级乳酸菌高效表达载体系统的研究进展
- 本文在乳酸菌表达载体构建的以往研究基础上,本文综述了食品级乳酸菌高效表达载体系统的研究进展。
- 郝凤奇王春凤
- 关键词：食品级乳酸菌
- 文献传递
