海外青年学者合作研究基金(30028017)
- 作品数：7 被引量：6H指数：1
- 相关作者：张苏明黎红华汪道文方思羽陈春莲更多>>
- 相关机构：华中科技大学广州军区武汉总医院华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：海外青年学者合作研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组腺相关病毒载体介导的LacZ基因转染骨胳肌途径的研究被引量：1
- 2004年
- 目的研究重组腺相关病毒载体(recombinantadeno-associatedvirusvector,rAAV)介导的β-半乳糖苷酶的结构基因LacZ,构建的rAAVLacZ病毒经不同途径给药后骨骼肌的转染效率、表达持续时间,为rAAV载体介导的目的基因对Duchenne肌营养不良的基因治疗探索合适的给药途径。方法采用报告基因LacZ、包装质粒PXX2、腺病毒成份辅助质粒PXX6三质粒共转染293细胞,包装重组腺相关病毒载体介导的rAAVLacZ,将rAAVLacZ局部腓肠肌肌肉注射转染至C57/BL6鼠骨胳肌,分别于单点注射后2个月、5个月取肌肉切片X-Gal染色。采用经股动脉注射rAAVLacZ观察LacZ基因在后肢骨骼肌的转染表达。结果(1)C57/BL6鼠局部肌注rAAVLacZ后,2个月和5个月时,均呈LacZ基因阳性表达,5个月时无表达减低。(2)经股动脉注射rAAVLacZ,C57/BL6小鼠后肢骨骼肌的肌膜及血管壁平滑肌LacZ基因广泛转染。结论重组腺相关病毒载体介导的报告基因LacZ可在C57/BL6鼠骨胳肌中高效持续表达5个月以上,经股动脉转染是有希望的下肢肌肉转染途径,此工作为神经肌肉遗传病,尤其是Duchenne肌营养不良基因治疗的进一步研究奠定了基础。
- 黎红华张苏明方思羽陈春莲汪道文Xiao Xiao
- 关键词：重组腺相关病毒载体介导LACZ基因股动脉注射
- Duchenne肌营养不良基因缺陷及基因治疗被引量：2
- 2003年
- Duchenne肌营养不良 (DMD)是常见的神经肌肉遗传病之一 ,由于骨胳肌肌膜上的抗肌萎缩蛋白 (dys trophin)完全或部分缺失引起。本文介绍了dystrophin的结构和功能 ,对DMD基因治疗的目的基因 ,基因治疗方式(包括病毒载体和非病毒载体 ) ,基因转染途径作了较为全面的介绍 ,指出腺相关病毒载体介导的基因治疗及干细胞移植是有希望的治疗方向 ,经全身途径使目的基因广泛转染骨胳肌并实现心肌和膈肌的转染 。
- 黎红华方思羽汪道文张苏明
- 关键词：DUCHENNE肌营养不良基因缺陷基因治疗神经肌肉遗传病
- Duchenne肌营养不良模型鼠基因型及肌肉病理的研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究Duchenne肌营养不良(DMD)模型鼠mdx基因型及肌肉病理改变。方法分别采用光镜、免疫荧光、EvansBlue染料、电镜等方法研究mdx小鼠与正常对照组C57/BL6小鼠腓肠肌病理改变,并检测mdx小鼠的基因型。结果经Dys-3、δ-sarcoglican抗体染色后mdx小鼠肌膜基本未见绿色荧光,正常对照组C57/BL6小鼠肌膜呈明显网状绿色荧光;荧光显微镜观察EvansBlue红色荧光染料,mdx小鼠肌纤维呈明显红色荧光,而肌膜完整的正常对照组C57/BL6小鼠肌纤维不摄取红色荧光染料。mdx模型鼠肌丝排列紊乱,方向不一,肌细胞核位于肌纤维中央,Z盘模糊,肌膜局部不连续,C57/BL6小鼠肌丝排列整齐,Z盘清晰可见。结论mdx小鼠以肌纤维变性、坏死为特征,肌细胞膜缺损是mdx小鼠主要病理改变之一。mdx小鼠dystrophin基因缺陷同时伴有dystrophin相关蛋白缺失,mdx小鼠肌肉病理为DMD进一步治疗研究奠定了基础。
- 黎红华陈文军崔敏林琅吴非张苏明汪道文
- 关键词：DUCHENNE肌营养不良MDX免疫荧光超微病理
- 重组腺相关病毒载体介导的小基因SMCKA3999治疗Duchenne肌营养不良小鼠的研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究重组腺相关病毒载体(rAAV)介导的人抗肌萎缩蛋白(dystrophin)小基因SMCKA3999对Duchenne肌营养不良(DMD)在病理、肌电图、肌力方面的治疗作用。方法将dystrophin小基因SMCKA3999克隆至rAAV并包装成rAAV SMCKA3999病毒,以5×109病毒颗粒多点注射于DMD模型鼠(mdx鼠)腓肠肌,基因治疗4个月后,以免疫荧光双标法检测肌膜dystrophin基因表达,采用Nicolet肌电及诱发电位仪记录mdx鼠肌电图,基因治疗5个月后以肌肉离体灌注电刺激法测定腓肠肌肌力,观察rAAV SMCKA3999对DMD动物模型鼠的治疗作用。结果rAAVSMCKA3999能有效稳定表达,并使肌膜缺失的dystrophin恢复,明显改善DMD肌电图表现,肌力恢复。结论rAAV SMCKA3999对mdx鼠治疗有效,能显著改善其肌肉功能,应用rAAV介导的dystrophin小基因SMCKA3999基因治疗是临床治疗DMD有希望的方法。
- 黎红华张苏明陈春莲胡晓琴方思羽Xiao Xiao 汪道文
- 关键词：依赖病毒肌电描记术DUCHENNE肌营养不良重组腺相关病毒载体病毒载体介导
- 重组腺相关病毒(rAAV)介导基因SMCKA3999对Duchenne肌营养不良病理和功能的影响
- 2004年
- 目的 研究重组腺相关病毒 (rAAV)载体介导的dystrophin小基因SMCKA3999治疗DMD模型鼠mdx ,从病理和功能观察rAAVSMCKA3999治疗对DMD模型小鼠mdx的疗效。方法 以dystrophin小基因SMCK A3999为目的基因 ,将SMCKA3999克隆至rAAV并包装成rAAVSMCKA3999,以 5× 10 10 病毒颗粒单点注射于DMD模型鼠mdx腓肠肌 ,基因治疗后 4个月及 7个月 ,采用免疫荧光、光镜组织病理、肌电图等方法 ,从形态和功能观察rAAVSMCKA3999治疗对DMD模型小鼠mdx的疗效。 结果 rAAVSMCKA3999使肌膜缺失的dys trophin恢复并稳定表达持续 7个月以上 ,肌肉组织病理改变好转 ,肌病肌电图改变明显改善 ,疗效持续 4个月以上。 结论 rAAVSMCKA3999能改善mdx小鼠骨骼肌的病理及功能 ,采用rAAV介导的dystrophin小基因SMC KA3999对Duchenne肌营养不良基因治疗是有希望的治疗方法。
- 黎红华胡晓琴张苏明方思羽陈春莲XIAO Xiao 汪道文
- 关键词：重组腺相关病毒RAAVDUCHENNE肌营养不良
- 重组腺相关病毒载体介导的小基因SMCKA3999治疗对Duchenne肌营养不良肌力的影响被引量：1
- 2005年
- 目的研究重组腺相关病毒载体(rAAV)介导的人dystrophin小基因SMCKA3999对DMD病理、肌力改变的治疗作用。方法将dystrophin小基因SMCKA3999克隆至rAAV并包装成rAAVSMC-KA3999病毒,以5×109病毒颗粒多点注射于DMD模型鼠mdx腓肠肌,基因治疗4月后免疫荧光法检测肌膜dystrophin基因表达,治疗5月后采用肌肉离体灌注电刺激测定腓肠肌肌力,观察rAAVSMCKA3999对mdx鼠肌力的疗效。结果rAAVSMCKA3999有效稳定表达并使肌膜缺失的dystrophin恢复,明显改善mdx鼠肌力。结论rAAVSMCKA3999对DMD治疗有效,能显著改善mdx鼠肌肉功能,应用重组腺相关病毒载体介导的dystrophin小基因SMCKA3999是治疗DMD有希望的方法。
- 黎红华陈文军张苏明方思羽汪道文
- 关键词：DUCHENNE肌营养不良重组腺相关病毒载体基因治疗肌力
- 重组腺相关病毒介导的Dystrophin小基因载体构建及在mdx鼠中表达
- 2003年
- 目的 :研究重组腺相关病毒载体 (rAAV)介导的人Dystrophin小基因 (SMCKA3 999)载体构建及在DMD模型鼠 (mdx鼠 )的表达。方法 :将SMCKA3 999质粒 ,包装质粒pXX2、腺病毒成分辅助质粒pXX6共转染 2 93细胞 ,包装重组腺相关病毒载体介导的SMCKA3 999基因 (rAAVSMCKA3 999) ,以斑点杂交法测定病毒滴度 ,将rAAVSMCKA3 999单点注射到mdx鼠腓肠肌 ,于注射后 7个月取肌肉提取蛋白质行Westernblot检测。结果 :经三质粒共转染法构建的rAAVSMCKA3 999病毒滴度为 5 0× 10 10 ,在mdx鼠骨骼肌表达持续 7个月以上。结论 :构建的rAAVSMCKA3 999载体为进一步DMD基因治疗研究奠定了基础。
- 黎红华张苏明方思羽王燕汪道文XiaoXiao
- 关键词：重组腺相关病毒介导DYSTROPHIN重组腺相关病毒基因表达
