国家重点基础研究发展计划(2004CB518804) 作品数:58 被引量:261 H指数:9 相关作者: 钱程 刘立 黄倩 陈霞芳 刘新垣 更多>> 相关机构: 浙江理工大学 上海交通大学 上海市第一人民医院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
微小RNA(miR)和肿瘤 被引量:1 2005年 微小RNA(miR)由长约21~25核苷酸的双链RNA分子构成,是非编码小RNA(noncoding small RNA)大家族中迄今研究最多的成员.除了作用于转录后及翻译水平上,miR还影响染色质结构、DNA和组蛋白的共价修饰,继而在表观遗传学水平上施加监控基因表达.miR在高等生物的正常发育中起着举足轻重作用,其表达和功能异化会在包括肿瘤在内的重大疾病中起着重大的病理学作用.由此,miR当仁不让地被作为目前最受关注的生物大分子. 蒋朕 朱景德关键词:MIR 肿瘤 E1B缺失腺病毒H101的研究进展 被引量:1 2007年 E1B缺失腺病毒H101是采用基因重组技术对人5型腺病毒进行基因重组得到的一种溶瘤腺病毒,它主要是删除了人5型腺病毒的E1B-55×10~3和E3区19×10~3基因片段,具有在肿瘤细胞中特异性复制而最终导致溶瘤的特性。 叶玲 钱关祥 葛盛芳关键词:基因治疗 全文增补中 基因治疗中腺病毒载体免疫逃逸的新策略 2008年 邱丰源 蔡荣 钱程关键词:肿瘤基因治疗 腺病毒载体 免疫逃逸 晚期肿瘤患者 生命安全 二氯化钴对腺病毒基因表达的影响 被引量:3 2009年 目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响。方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2处理后,Western印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率。结果:适当浓度的CoCl2(0.4和0.08μg/mL)能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4μg/mLCoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制。0.4μg/mLCoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平;Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达。结论:CoCl2能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关。 刘新建 季迅达 田毓华 陈霞芳 谢匡成 吴继红 张圣海 徐萍 李川源 黄倩关键词:胃肿瘤 腺病毒感染 基因表达调控 肿瘤 缺氧诱导因子1 二氯化钴 肿瘤干细胞起源及其生物学特性 被引量:9 2007年 肿瘤干细胞与正常成体干细胞在自我更新与增殖分化能力、表型标记和强耐药性等诸多方面存在着相类似的生物学特征,所以肿瘤干细胞被推测为肿瘤发生的细胞起源。基于肿瘤干细胞与正常干细胞之间的相似性质和肿瘤发生的分子机制,科学家建立了一系列从肿瘤组织或肿瘤细胞系分离肿瘤干细胞的实验方法和研究肿瘤干细胞起源的动物实验模型。现就目前在肿瘤干细胞起源和生物学特性领域的研究作概括阐述。 陈晶 蔡荣 钱程关键词:肿瘤干细胞 成体干细胞 构建多顺反子表达载体的有效工具——FMDV 2A 被引量:13 2007年 近年来肿瘤多基因治疗倍受关注,然而目前缺少一种有效的构建多顺子的工具。传统的构建多顺反子的工具,如IRES等,由于存在结构大,上下游基因表达差异显著等缺陷,严重限制了其应用。FMDV2A,因其具有结构小、剪切效率高等优点为多基因治疗带来了新的希望。主要介绍了FMDV2A的特性、"剪切"活力及其在构建多顺反子载体中的应用。 刘必胜 刘新垣 钱程关键词:FMDV 多顺反子 基因治疗 肿瘤 溶瘤腺病毒与抗癌药物联合治疗肝肿瘤的可行性研究 2010年 通过抗肿瘤药物PHA-767491联合溶瘤腺病毒AdCN305-HcRed开展针对肝癌细胞系HepG2的杀伤效率研究。通过PHA-767491单独及其与AdCN305-HcRed联合共同杀伤肝癌细胞来探究细胞周期抑制性化疗药物与溶瘤腺病毒联合使用的可行性。细胞杀伤实验结果发现PHA-767491能抑制溶瘤腺病毒在肝肿瘤细胞HepG2内的增殖,从而影响溶瘤腺病毒的增殖溶瘤作用。结果表明:溶瘤腺病毒与抑制细胞周期的化疗药物联合在肝肿瘤中的应用需要慎重。 王刚 李伟 黄青红 娄文加 陈青 钱程 刘立关键词:溶瘤腺病毒 携带pri-mir-20a的慢病毒表达载体的构建 2010年 采用PCR扩增获得的pri-mir-20a,过渡质粒pcDNA3.0-H1经BamHⅠ与HindⅢ双酶切后将两者连接产生pcDNA3.0-H1-pri-mir-20a重组质粒,再将PCR获得的H1-pri-mir-20a克隆到慢病毒载体pdc-SEW上获得重组慢病毒载体pdc H1-pri-mir-20a-SEW。将pCMV 8.91、pMD2.VSV.G、pdc H1-pri-mir-20a-SEW三质粒共转染293FT细胞,结果显示48 h后绿色荧光蛋白的表达达到80%,表明已成功构建出携带pri-mir-20a的慢病毒表达载体。该载体的成功构建为深入开展对mi R-20a的生物学功能和靶标验证提供了有效的工具。 马清华 徐艳敏 武佳 李伟 钱程 刘立关键词:慢病毒载体 索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株的建立及其生物学特性 被引量:3 2012年 目的建立索拉菲尼诱导的PLC/PRF/5和Huh7耐药细胞株,并研究其耐药细胞的生物学特性。方法通过药物敏感性实验CCK8法测定索拉菲尼的半数抑制浓度IC50值;采用体外间歇诱导法,使用PLC/PRF/5和Huh7各自IC50值作为筛选浓度,建立索拉菲尼诱导的耐药细胞株模型;Real time-PCR检测5种耐药基因(GST-π、LRP、MDR1、MRP、TopoⅡ)在耐药组和对照组中的表达差异;Western blot检测MAPK信号通路中关键信号因子细胞外调节蛋白激酶(extra-cellular regulated protein kinases,ERK)ERK1/2在不同组别细胞中的磷酸化水平差异。结果所筛选的PLC/PRF/5和Huh7耐药组细胞与对照组细胞相比较,其细胞生存率有显著性提高(P<0.05);5种耐药基因中MDR1的表达有显著性上调(P<0.05);索拉菲尼作用靶点的下游信号因子ERK1/2的磷酸化水平上调。结论成功地在体外建立索拉菲尼诱导的PLC/PRF/5和Huh7耐药细胞株,其耐药机制可能与ERK1/2的磷酸化水平上调导致耐药基因MDR1高表达有关。 姚超 朱传琳 何倩 李果 夏锋 钱程关键词:索拉菲尼 肝细胞癌 葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞内钙离子浓度动态变化及其信号传导途径的研究 2008年 目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)内钙离子(Ca2+)浓度的动态变化及其信号转导途径。方法:在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(Hypericin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(Genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME),利用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察HK-2细胞内[Ca2+]动态变化。结果:LSCM下观察发现,150mmol/L葡萄糖可引起HK-2细胞内[Ca2+]增高。150mmol/L葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入10-4mmol/LHypericin、10-6mmol/LApopain、10-7mmol/LGenistein、10-2mmol/LNAME可抑制葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高。结论:葡萄糖作用于HK-2细胞,可引起细胞内[Ca2+]增高;蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)均参与了葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高的信号传导过程。 胡亮 倪培华 徐洪 赵涵芳 吴洁敏 钱关祥关键词:信号传导