国家重点基础研究发展计划(2004CB518803)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张文娟李慧艳何昆许正新张佩景更多>>
- 相关机构：复旦大学中国药科大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- φC31位点特异性整合酶系统在生物医学上的应用被引量：1
- 2004年
- 理想的基因转移系统是成功实现基因治疗的关键因素。噬菌体φC31位点特异性整合酶体系集有效性和安全性于一体,通过介导特异性识别位点间的同源重组反应,将外源基因整合到基因组中,使转基因的表达达到持续、高效的目的,为非病毒载体转移系统在遗传病基因治疗上的应用开辟了新的途径。
- 张文娟朱焕章薛京伦
- 关键词：整合酶生物医学基因转移非病毒载体位点特异性
- 孕激素受体激活系统建立及对细胞周期的影响被引量：1
- 2008年
- 建立孕激素受体(PR)转录激活系统,同时探索孕激素受体对细胞周期的影响。有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制。运用双荧光报告系统,建立内、外源孕激素受体转录激活系统,运用细胞流式技术检测孕激素受体对细胞周期的影响。发现孕激素可以激活外源构建的孕激素受体,孕激素能够通过结合内源受体促进细胞生长。我们成功建立了孕激素受体转录激活系统,并发现孕激素可以通过其受体增加细胞的S期比例,促进肿瘤细胞T47D的增殖。
- 张佩景李慧艳赵洁陈媛周涛李爱玲张学敏何昆
- 关键词：孕激素受体细胞周期
- ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体。方法:将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b+载体构建表达质粒并转化E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白,His-Bind Quick Car-tridge纯化表达产物。重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体,Western blotting确定抗体的特异性,体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性。最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布。结果:16℃条件下0.2 mmol/LIPTG诱导培养30 h,携带pET22b-ΦC31质粒的E.coliBL21(DE3)在YTG培养基中,可表达出大量的融合蛋白,该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性。使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后,分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体,Western blotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实,该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原。结论:本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法,并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体。
- 许正新张茂祥李智慧王秋娟陈金中
- 关键词：ΦC31整合酶蛋白表达多克隆抗体纯化
