国家自然科学基金(31372106) 作品数:17 被引量:32 H指数:3 相关作者: 徐立 雷明 王之 张学全 王加宾 更多>> 相关机构: 中国热带农业科学院 海南大学 华中农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 海南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 自动化与计算机技术 更多>>
蜻蜓凤梨TERMINAL FLOWER 1基因的克隆及组织表达分析 被引量:3 2016年 为了更好地利用生物技术手段提高观赏凤梨的开花质量,本研究在分析蜻蜓凤梨转录组数据的基础上,根据同源性比对发现了一个类TERMINAL FLOWER 1(TFL1)基因的c DNA片段,结合c DNA末端快速扩增(rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术获得了其937 bp的c DNA全长,并将其命名为Af TFL1。序列分析表明,该基因的开放阅读框为522 bp,编码173个氨基酸。蛋白质性质分析表明,其分子量为19.329 9 k D,等电点为8.39,为一类不稳定的碱性蛋白。结构域分析表明,此蛋白含有1个典型的PEBP结构域。系统进化树分析表明,Af TFL1与番红花的TFL1亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明,Af TFL1在蜻蜓凤梨各个部位的表达量不同,在营养器官中的表达量随株龄增长而降低,在生殖器官中表达量非常低甚至检测不到。研究结果可为进一步研究Af TFL1的功能以及深入探讨蜻蜓凤梨开花机理提供了一定的理论依据。 雷明 李志英 王之 徐立关键词:TERMINAL FLOWER 克隆 组织特异性表达 蜻蜓凤梨AfDREB2C基因的克隆及乙烯响应特性分析 被引量:2 2016年 以重要的热带花卉蜻蜓凤梨(Aechemia fasciata)为材料,基于转录组数据,利用c DNA末端快速扩增(rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术克隆了APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein(AP2/EREBP)家族的一个基因,并将其命名为Af DREB2C。Af DREB2C c DNA全长848 bp,有一个594 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码197个氨基酸残基。Af DREB2C蛋白分子量为21.498 8 k D,理论等电点为4.65,是一类酸性亲水蛋白,且预测定位于细胞核。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)结果表明,Af DREB2C在不同株龄的蜻蜓凤梨不同组织中均有表达,但在很多生殖器官中的表达量很低。此外,Af DREB2C响应了外源乙烯处理,但在成株的不同组织中响应模式不尽相同。本研究为解析Af DREB2C在蜻蜓凤梨生长发育中的机制、为通过基因工程手段调控凤梨科植物生长发育奠定了理论基础。 雷明 王加宾 丛汉卿 李志英 徐立关键词:乙烯 蜻蜓凤梨AfPIF4-1基因的克隆与遗传转化 被引量:6 2016年 为了解析蜻蜓凤梨(Aechmea fasciata)开花机理,本研究根据转录组中的片段信息,利用RACE技术从蜻蜓凤梨中获得一个光敏色素因子(PIFs)的c DNA全长序列,并将其命名为Af PIF4-1。Af PIF4-1基因c DNA全长1 343 bp,开放阅读框为1 296 bp,编码431个氨基酸。利用NCBI分析氨基酸序列结果显示:Af PIF4-1含有b HLH蛋白家族共有的功能结构域,与海枣(Phoenix dactylifera),大豆(Glycine max),玉米(Zea mays),番茄(Solanum lycopersicum)中的PIF同源性分别为52%、49%、42%、39%。进一步构建了35S::Af PIF4-1过表达载体,并获得转基因拟南芥植株,可为进一步探究凤梨科植物开花机理,进而调控市场应用前景奠定了基础。 石玲玲 王之 李志英 雷明 徐立关键词:RACE 蜻蜓凤梨AfWIN1基因的克隆及表达特性 被引量:1 2016年 为利用基因工程手段调控凤梨科植物生长发育奠定基础,基于转录组数据,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从蜻蜓凤梨中克隆APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein(AP2/EREBP)家族的1个转录因子编码序列AfWIN1,并通过在线软件预测其亚细胞定位,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析其转录本表达量,且利用染色体步移方法分离其启动子序列。结果表明:AfWIN1cDNA全长995bp,含有1个501bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码166个氨基酸残基;AfWIN1定位于细胞核的碱性亲水蛋白;AfWIN1的转录本表达量随着植株年龄的增长逐渐上调,但在花器官中表达量很低甚至检测不到;AfWIN1基因5′端上游的调控序列中包含较多响应激素的顺式元件;AfWIN1在幼株和成株心叶中对乙烯响应的方式不尽相同,可能参与蜻蜓凤梨营养生长过程,但不调控花器官发育。 雷明 王加宾 丛汉卿 李志英 徐立关键词:热带花卉 转录因子 乙烯 蜻蜓凤梨AfGAI基因的克隆、分析与表达载体构建 被引量:2 2017年 根据蜻蜓凤梨转录组信息,通过RACE技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得蜻蜓凤梨中一个DELLA蛋白的cDNA序列,并将其命名为AfGAI。AfGAI cDNA全长1 960 bp,开放阅读框为1 764 bp,编码587个氨基酸。氨基酸序列分析结果显示,AfGAI蛋白含有DELLA蛋白家族共有的功能结构域:DELLA结构域和GRAS结构域,与菠萝(Ananas comosus)、海枣(Phoenix dactylifera)、油棕(Elaeis guineensis)、巨桉(Eucalyptus grandis)、陆地棉(Gossypium hirsutum)中的GAI同源性分别为90%、73%、73%、65%、59%。进一步构建了35S:AfGAI过表达载体,为解析凤梨科植物开花机理提供理论依据。 敖梦飞 徐立 雷明 李志英关键词:AF GAI DELLA蛋白 菠萝叶刺形成相关基因AcSPL14克隆与载体构建 被引量:3 2019年 本研究以菠萝叶片为材料,从中克隆到一个可能与菠萝叶刺形成相关的基因AcSPL14 (Ananas comosus squamosa promoter-binding-like protein 14)。该基因cDNA全长为1 330 bp,开放阅读框为1 086 bp,编码362个氨基酸。结构域分析结果显示AcSPL14蛋白序列具有SPL蛋白家族共有的功能结构域——SBP(SQUAMOSA promoter binding protein-like)结构域,且与石刁柏(Asparagus officinalis)、铁皮石斛(Dendrobium catenatum)、月季(Rosa chinensis)和麻风树(Jatropha curcas)的SBP序列相似性分别为53%、51%、47%和46%。在此基础上,本研究进一步构建了p BI121-AcSPL14过表达载体,获得了工程菌。本研究为AcSPL14在菠萝中的生物学功能鉴定提供了理论依据,对深入研究菠萝叶刺发生的分子机理具有重要意义。 荆永琳 耿宏叶 徐立 李志英关键词:菠萝 基因克隆 蜻蜓凤梨AfERF109基因的克隆及响应乙烯的表达特性分析 被引量:2 2016年 以热带观赏花卉蜻蜓凤梨(Aechemia fasciata)为材料,在分析蜻蜓凤梨转录组数据的基础上,结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,简称RACE)技术克隆了APETALA2/乙烯反应元件结合蛋白(APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein,简称AP2/EREBP)家族的1个转录因子编码序列,并将其命名为AfERF109。AfERF109基因cDNA全长939 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长762 bp,编码的蛋白含253个氨基酸残基。AfERF109分子量为28.275 1 ku,理论等电点为5.24;AfERF109不含信号肽和跨膜域,预测其定位于细胞核;AfERF109含有1个典型的AP2结构域,该结构域的二、三级结构构象保守;系统进化分析该蛋白分属ERF亚族的B-4类。实时荧光定量PCR分析表明,AfERF109转录本的表达量随着植株年龄的增长上调,在开花后的花柄中表达量最高。此外,AfERF109转录本的表达量受外源乙烯处理呈现正调控趋势。研究结果初步证实AfERF109参与乙烯调控路径,可能参与蜻蜓凤梨营养生长到生殖生长的时期转换及花柄的发育,为进一步研究AfERF109基因功能、通过基因工程手段调控蜻蜓凤梨开花提供了理论依据。 雷明 王之 王加宾 李志英 徐立关键词:克隆 乙烯 粉菠萝组蛋白去乙酰化酶基因AfHD1的克隆及在乙烯处理下的表达分析 被引量:2 2013年 组蛋白修饰在植物发育和防御反应中发挥着重要的作用。为研究组蛋白去乙酰化酶基因HD1的基本特征及其在乙烯调控凤梨科植物开花过程中的生物学功能,通过筛选粉菠萝茎尖转录组测序数据并结合RACE技术分离得到AfHD1基因cDNA全长序列。该基因的开放阅读框长为1 548 bp,编码516个氨基酸,其理论分子量为58.28 kDa,等电点为5.23。由该基因编码的蛋白属于组蛋白去乙酰化酶RPD3/HDA1超家族成员,具有该家族特有的HDAC保守结构域,该蛋白与水稻和玉米中HD1蛋白的同源性均达到87%。实时荧光定量PCR分析表明,AfHD1基因的表达受乙烯诱导,处理后1 d的表达量与0 h相比,提高了4倍,推测组蛋白去乙酰化酶基因AfHD1可能与粉菠萝的乙烯信号反应有关。 李丽 罗轩 徐立 李新国关键词:乙烯处理 开花 蜻蜓凤梨叶片组织培养植株再生的研究 2014年 以蜻蜓凤梨试管苗叶片为外植体进行离体再生研究。结果表明,叶片诱导直接分化不定芽的最佳培养基是MS+BA 5.0 mg/L+IBA 1.5 mg/L,分化率高达80%。增殖培养基为MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L。壮苗培养基为MS+NAA 2.0 mg/L。生根培养基为MS+NAA 2.0 mg/L+AC 0.5 g/L,生根率达100%。 符运柳 徐立 李志英 黄碧兰 李克烈关键词:叶片 植株再生 蜻蜓凤梨中EIN3的克隆及其表达分析 被引量:4 2015年 乙烯诱导凤梨开花受植株年龄的影响。本研究根据从抑制差减杂交(SSH)文库中发现的c DNA片段,通过RACE技术得到EIN3(ethylene insensitive3)基因的全长c DNA序列。生物信息学分析表明,该基因与香蕉、水稻、玉米等多种植物中的EIN3同源,定名为Af EIN3。Af EIN3在凤梨植株各个部位的表达量不同,以叶片基部的表达量最高,花器官中最少;Af EIN3在不同年龄植株中的表达量不同,以成熟植株中表达量最高;乙烯处理后,在成株中,Af EIN3的表达量在1 h即达到峰值,然后逐渐下降;在幼株中,Af EIN3对乙烯的反应较迟缓,24 h时略有上升,2 d时达到一个峰值,然后下降,5 d时表达量最高。研究结果表明Af EIN3具有组织表达特异性,表达量与发育阶段有关,并受乙烯信号诱导,可能在乙烯诱导凤梨开花中起重要作用。 李志英 张学全 张鲲 徐立关键词:乙烯