广东省自然科学基金(8451503102001823)
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 相关作者：孙平楠周小玲谢庆东康祥锦张学成更多>>
- 相关机构：汕头大学中国海洋大学江南大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙肝表面S蛋白与人精子相互作用的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的:研究乙肝表面S蛋白(HBs)与人精子表面去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)的结合情况,探讨乙肝病毒(HBV)侵入人精子的早期机制。方法:HBs预先与人精子孵育一定时间后,采用异硫氰酸荧光素标记的ASGP-R单克隆抗体对人精子表面ASGP-R标记,通过流式细胞术考察HBs与该受体结合情况。结果:HBs在浓度25μg/mL时孵育1 h,ASGP-R单克隆抗体浓度10μg/mL时,观察到标记的人精子的平均荧光强度显著降低。结论:HBV可能通过HBs与人精子表面AS-GP-R受体结合而侵入精子,为进一步研究HBV侵入精子的早期机制提供了初步基础。
- 孙平楠康祥锦陈惠芳黄天华
- 关键词：去唾液酸糖蛋白受体人精子
- 载鲑鱼降钙素新型重组酿酒酵母的降血钙活性研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究表达鲑鱼降钙素(sCT)基因的表面展示型酿酒酵母经口服给药后对Wistar大鼠血清钙含量的影响。方法鲑鱼降钙素基因克隆到表面展示型载体pYD1,LiAC法转化酿酒酵母EBY100菌株后获得转化子yAGA2-sCT。在荧光显微镜下检测FITC标记的转基因酵母重组鲑鱼降钙素的表达情况。载鲑鱼降钙素重组酿酒酵母经冷冻干燥处理后分别以0.1、0.5g/kg和5g/kg浓度灌喂Wistar大鼠,分别列入低、中、高剂量实验组(n=6);另设阳性药物组(皮下注射200mU/kg的密钙息,n=6))和2个条件对照组(分别灌喂5g/kg冷冻干燥的yAGA2-V5菌株和30μg/kg的密钙息,n=6)。眼球丛静脉毛细采血管取血后测定血钙值。结果荧光显微镜下观察到重组酿酒酵母yAGA2-sCT成功表达了sCT蛋白。载鲑鱼降钙素重组酿酒酵母对大鼠的降血钙活性呈现剂量效应,实验组3个不同剂量的亚组中,高剂量组5g/kg载鲑鱼降钙素酵母yAGA2-sCT的降血钙活性最为显著(P<0.01),且在第2h时降血钙效应达到最大。口服5g/kg的yAGA2-sCT的高剂量组在2h之后,大鼠血钙值从2.685±0.023mmol/L降低到2.355±0.012mmol/L。结论5g/kg的载鲑鱼降钙素酵母yAGA2-sCT能明显降低血钙值,是实现鲑鱼降钙素口服的一种可能的新途径。
- 孙平楠周小玲张学成梁冰
- 关键词：降钙素酿酒酵母
- 酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:实现酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素。方法:人工合成鲑鱼降钙素(Salmoncacitonin,sCT)编码基因,克隆到表面展示载体M-pYD1上。用NocI酶切重组质粒M-pYD1-sCT和空白质粒M-pYD1,回收sCT和V5表达框片段后分别以LiAC法转化酿酒酵母EBY100菌株,分别得到重组酵母yAGA2-sCT和yAGA2-V5。两种重组酵母分别经半乳糖诱导表达后,采用FITC荧光标记酵母表面展示的sCT和V5多肽,分别用荧光显微镜和流式细胞仪进行定性和定量分析。结果:诱导12h后,荧光显微镜下清晰观测到了工程菌表面有重组sCT,流式细胞分析结果表明10000个细胞中65.2%的yAGA2-sCT菌株表达了外源sCT,52.4%的yAGA2-V5菌株表达V5。结论:利用酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽获得了成功,为口服型鲑鱼降钙素的研发奠定了基础。
- 孙平楠张学成陈云松臧晓南
- 关键词：酿酒酵母鲑鱼降钙素
- HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母的研究
- 2009年
- 目的:实现HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母。方法:分别将乙肝病毒前S1蛋白和绿色荧光蛋白克隆到表达载体pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-EGFP-preS1,SacI位点酶切线性化,采用醋酸锂(LiAc)和二硫苏糖醇(DDT)对巴斯德毕赤氏酵母Pichia Pastoris GS115预处理,在电压1.5kv、电容25F条件下进行电击转化。电击后立即迅速稀释在冰预冷的1M的山梨醇中,混匀后取100l的菌液均匀涂布YNBG平板,利用HIS4标记筛选转化子。结果:发现改进后的转化方法pPIC9K-EGFP-preS1的转化率提高到164×104个转化子/1μgpPIC9K-EGFP-preS1 DNA,是传统方法的6.6倍。结论:采用改进后的方法能有效的提高质粒pPIC9K-EGFP-preS1的转化率,为筛选高表达HBVPreS1-EGFP融合蛋白的转化子打下基础。
- 周小玲李子龙孙平楠
- 关键词：乙肝病毒前S1蛋白毕赤氏酵母
- 信号肽生物信息学分析在Neurospora crassa phyA基因鉴定中的应用被引量：9
- 2009年
- 目的对Neurospora crassa基因组中与黑曲霉phyA具有46.85%相似性的EAA33149.1蛋白基因进行鉴定并确定其功能。方法利用信号肽预测软件SignalP 3.0 Server,真核蛋白序列中精氨酸和赖氨酸前导肽切割位点以及信号肽切割位点预测软件ProP 1.0 server,跨膜结构域预测软件Tmpred和TMHMM Server v.2.0,GP I锚定位点预测软件big-P I Predictor以及亚细胞器中蛋白定位分布预测软件TargetP v1.01对EAA33149.1蛋白基因进行预测分析,根据分析结果将该基因克隆到酿酒酵母中表达。结果确定了该蛋白的信号肽、信号肽切割位点以及分泌途径。重组酿酒酵母表达的54000重组蛋白,显示了植酸酶活性。结论初步确定该蛋白基因为N.crassa phyA基因。
- 孙平楠周小玲王正祥
- 关键词：信号肽生物信息学分析基因鉴定
- FITC标记无唾液酸胎球蛋白对人精子去唾液酸糖蛋白受体的定位
- 2009年
- 背景与目的:采用FITC标记的无唾液酸胎球蛋白(FITC-ASF)对人精子去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)进行定位和监测。材料与方法:采用FITC标记ASGP-R天然配体无唾液酸胎球蛋白得到FITC-ASF,进一步使用FITC-ASF对人精子表面ASGP-R标记,通过免疫荧光和流式细胞术检测其应用于外源ASF蛋白与该受体结合情况。结果:FITC-ASF能够较好的标记人精子表面ASGP-R,并成功应用于外源蛋白与该受体的结合。结论:本研究为获得一种适合临床广泛应用的新的简便易行的ASGP-R监测方法提供了实验基础。
- 孙平楠周小玲黄天华谢庆东陈惠芳康祥锦
- 关键词：人精子去唾液酸糖蛋白受体
- 乙肝病毒表面蛋白及其抗体复合物对人精子功能的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:研究乙肝表面蛋白(HBs)与其单克隆抗体(MAb)复合物对人精子功能的影响,探讨乙肝病毒(HBV)损害人精子的可能机制。方法:对HBs-HBsMAb孵育后的精子活力进行分析,采用JC-1染料结合流式细胞术监测人精子线粒体膜电位(MMP)。结果:人精子在体外与25μg/mL的HBs和不同浓度(20、40、80μg/mL)HBsMAb共孵育后,活力好的精子百分比例显著下降(P<0.01),MMP也下降。结论:HBV可能通过HBs-HBsMAb对人精子功能产生负面影响。
- 周小玲孙平楠高郁森谢庆东
- 关键词：人精子线粒体膜电位
- 乙肝病毒表面蛋白对人精子活力及线粒体膜电位的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:乙肝患者的精子活力降低且有较高比例的凋亡和坏死,但其机制未明。本研究主要考察乙肝病毒表面蛋白(HBs)对人精子线粒体膜电位的影响。方法:对经不同浓度的HBs(0、25、50、100μg/ml)孵育4h后的人精子活力进行分析,并进一步采用JC_1染料结合流式细胞术监测人精子线粒体膜电位的变化。结果:与对照组比较,人精子在体外加入100μg/mlHBs孵育后,a+b级精子数比例显著下降(P<0.01),精子线粒体膜电位显著下降,25、50、100μg/mlHBs处理组丧失线粒体膜电位的精子百分率分别为24.83%、44.43%和92.22%。结论:乙肝病毒可能通过表面蛋白HBs对人精子活力和线粒体膜电位产生负面影响。
- 周小玲孙平楠康祥锦刘冬玲谢庆东
- 关键词：人精子线粒体膜电位
