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粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻免疫治疗小鼠过敏性哮喘的实验研究被引量：6: 2008年; 探讨粉尘螨壳聚糖疫苗经鼻粘膜免疫治疗过敏性哮喘的疗效。用粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Df)提取液致敏、激发BALB/c小鼠,复制哮喘模型,24只BALB/c小鼠随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、粉尘螨对照组(C组)粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组(D组)。检测各组气道高反应性;通过HE(haematoxylin and eosin)染色观察小鼠肺部炎症;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾细胞培养上清的细胞因子和血清中Df特异性的IgE、IgG2a抗体。粉尘螨和粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组肺部变态反应性炎症病理变化较模型组明显减轻,气道高反应性Penh值下降;BALF中的细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)计数、IL-4、血清抗原特异性IgE抗体和脾细胞分泌IL-4均明显低于模型组,而且总体作用粉尘螨壳聚糖疫苗治疗组要强于粉尘螨对照组。粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻腔免疫可以治疗小鼠过敏性哮喘,且作用强于单独应用粉尘螨的对照组。; 国华朱清仙刘志刚喻海琼李湘辉; 关键词：粉尘螨壳聚糖哮喘

重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究被引量：10: 2006年; 目的观察以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料为佐剂制备的重组屋尘螨2类变应原(rDerp2)纳米微粒疫苗(DEPN)对小鼠过敏性气道炎症的影响,并探讨其免疫治疗机制。方法制备PLGA-rDerp2纳米粒子并鉴定其特性。40只BALB/c小鼠随机分为5组,A组(对照组)均给予生理盐水(100μl)。B、C、D和E组腹部皮下注射屋尘螨粗浸液(10μg)免疫小鼠致敏,然后分别用PBS(100μl)、2mg空白PLGA粒子(emptyPLGA,EP)、100μgrDerp2、2mg的DEPN纳米疫苗(载有100μgrDerp2)皮下注射进行免疫治疗,连续免疫治疗3d,1次/d,各组用rDerp2(50μg)滴鼻激发,激发后第2天剖杀,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行总计数和分类计数;HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-SchiffStain)观察小鼠肺部组织炎症和支气管黏液分泌;用ELISA检测BALF和脾细胞培养上清的细胞因子(IL-4、IFN-γ)和血清中变应原特异性IgG2a和IgE抗体浓度。结果B、C组肺部呈明显的变态反应性炎症,D、E组变应原诱导的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比B、C组显著减轻。BALF中的细胞总数B组比A组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主,超过50%。rDerp2特异性IgE抗体水平,D组(0.93±0.04)和E组(0.77±0.10)均低于B组(1.14±0.10)(P<0.01);特异性IgG2a抗体水平,D组(1.02±0.01)和E组(1.17±0.46)均高于B组(0.14±0.01)(P<0.01)。在BALF中,D组[(55.60±3.79)pg/ml]和E组[(48.60±4.50)pg/ml]IL-4水平均低于B组[(78.90±6.07)pg/ml](P<0.01);IFN-γ水平E组[(68.50±2.87)pg/ml]显著高于B组[(27.30±3.51)pg/ml](P<0.01)。脾细胞上清的IL-4水平,D组[(56.3±4.85)pg/ml]和E组[(40.2±4.36)pg/ml]显著低于B组[(81.20±6.84)pg/ml](P<0.01);IFN-γ水平,E组[(70.20±3.85)pg/ml]显著高于B组[(34.60±2.25)pg/ml]。结论DEPN免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症,其机制可能与调节Th1/Th2平衡有关。; 喻海琼刘志刚于琨瑛许卓谦丘劲; 关键词：屋尘螨变应原过敏性气道炎症小鼠

肉桂提取物对粉尘螨杀灭的实验研究被引量：5: 2009年; 目的研究肉桂(Cinnamomum cassia Presl)不同溶剂提取组分对室内粉尘螨(Dermatophagoides farinae)的杀灭活性。方法肉桂粉碎后以石油醚、乙酸乙酯、甲醇为提取剂,分别用索氏提取法、浸渍法提取肉桂的不同有效组分;以作用浓度和作用时间为变量,分别用直接接触法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取组分对粉尘螨的杀灭活性,用熏蒸法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组份对粉尘螨的杀灭活性。结果直接接触法测试肉桂不同组分对粉尘螨杀灭活性的结果显示作用24h时肉桂石油醚提取组分和乙酸乙酯提取组分的LD50分别为4.64μg/cm2和1.44μg/cm2,甲醇提取组分对粉尘螨则不具有显著杀灭活性;从作用时间上看,石油醚组分作用时间最短,乙酸乙酯组分次之;熏蒸法测试结果显示肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组分使用剂量为6.09μg/cm2和9.75μg/cm2时作用24h后对粉尘螨的致死率即达到100%。结论本文研究结果表明肉桂的石油醚和乙酸乙酯提取组分对粉尘螨具有良好的杀灭活性,呈剂量、时间依赖性,且与作用方式直接相关。; 李静吴海强刘志刚张彩芬艾梅; 关键词：粉尘螨杀螨

热带无爪螨体内特异性变应原定位被引量：1: 2009年; 【目的】探讨热带无爪螨Blomia tropicalis特异性变应原在体内的定位。【方法】制作热带无爪螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构。选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其特异性抗原存在位置。【结果与结论】免疫组织化学染色可见热带无爪螨中肠、盲囊、结肠的肠壁和内容物及生殖腺等均有阳性反应。其中肠壁组织和肠腔内容物呈强阳性反应,提示肠为特异性抗原的主要存在部位。; 吴桂华刘志刚孙新杨峰巍; 关键词：变应原抗原定位免疫组织化学 HE染色

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2009年; 目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。方法利用重组Der f1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western-blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Der f1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Der f1检测及纯化方法奠定了基础。; 顾耀亮李佳娜陈家杰吉坤美刘志刚; 关键词：F1 粉尘螨主要变应原单克隆抗体

鸡蛋和牛奶粗提抗原与类风湿性关节炎的相关性分析研究被引量：3: 2014年; 目的通过建立类风湿性关节炎CIA模型,探讨食物抗原与类风湿性关节炎的相关性,为临床预防和治疗类风湿性关节炎提供理论依据。方法对Wistar大鼠尾根、足部和脊柱两侧注射牛Ⅱ型胶原免疫诱导建立CIA模型,通过组织病理学和免疫学对模型进行评价,检测TNF-α、IL-17和IL-1细胞因子的表达水平;通过酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫印迹法（Western blot）分析鸡蛋和牛奶粗提抗原与CIA模型的相关性。结果 45 d后成功建立CIA模型,ELISA检测发现鸡蛋和牛奶粗提抗原与CIA模型组免疫反应较高,Western blot检测到鸡蛋和牛奶与CIA模型组免疫反应存在特异性蛋白,蛋白相对分子质量分别在45 000-60 000和80 000-90 000之间。结论食物抗原与类风湿性关节炎存在一定的相关性,鸡蛋和牛奶中的特异蛋白的种类及作用需进一步研究。; 陈贺刘志刚胡川匡渤海; 关键词：类风湿性关节炎

屋尘螨变应原Der p 1基因原核表达产物的纯化及特性鉴定被引量：9: 2006年; 目的建立屋尘螨主要变应原Derp1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性。方法大量诱导表达含pET24a-Derp1质粒的BL21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Derp1纯化蛋白的抗原活性。结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Derp1蛋白。Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Derp1蛋白呈强阳性反应,最佳血清稀释度为1∶64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应。结论纯化后的融合蛋白Derp1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。; 刘志刚杨慧付颖媛高波朱健琦吉坤美; 关键词：屋尘螨变应原 P 复性纯化

口虾蛄主要过敏原TM的单抗制备和免疫学特性鉴定被引量：6: 2010年; 目的制备和鉴定鼠抗虾主要变应原TM的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组TM蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性,对常见食物的检测。结果获得4株可稳定分泌鼠抗虾主要变应原TM的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1。且4株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组TM蛋白和天然的虾提取物。结论成功制备了4株鼠抗虾主要变应原TM的单克隆抗体,为建立TM检测及纯化方法奠定了基础。; 陈贺匡渤海刘志刚黄钟吴序栎胡川邹菊; 关键词：口虾蛄单克隆抗体

粉尘螨生殖系统形态学研究被引量：4: 2008年; 粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细胞、精母细胞和精子依照精子发育的顺序有规则地分布在其内部。雌性生殖系统包括交配孔、囊导管、储精囊、囊导管、卵巢、输卵管、子宫、产卵管及产卵孔,其中卵巢由一个中央营养细胞和围绕其周围的卵母细胞组成。; 吴桂华刘志刚孙新; 关键词：粉尘螨生殖系统形态学扫描电镜

标准化粉尘螨疫苗鼻腔免疫治疗的疗效和机制初探被引量：1: 2008年; 变态反应疾病临床上常见的有哮喘和过敏性鼻炎等。哮喘是一种以肺部嗜酸粒细胞浸润和对各种激发因子产生气道高反应为特征的慢性气道炎性疾病，是一种常见病和多发病，尘螨是引发哮喘和变应性鼻炎最重要的致敏原之一，80％的哮喘患者对尘螨过敏，采用尘螨诱发的哮喘模型能够更好地反映人体的哮喘情况。本研究使用粉尘螨（Dermatophagoides farinae，Der f）提取液致敏和激发BALB／c小鼠，构建尘螨诱发的小鼠肺部变态反应性炎症的模型，观察标准化粉尘螨疫苗鼻腔免疫治疗小鼠的疗效及其机制。; 国华朱清仙刘志刚喻海琼; 关键词：免疫治疗粉尘螨 BALB/C小鼠疗效鼻腔变态反应性炎症

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广东省科技计划工业攻关项目(2003C104019)

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