江苏省社会发展科技计划(BS2004526)
- 作品数：28 被引量：48H指数：4
- 相关作者：程纯沈爱国陈梦玲严美娟邵晓轶更多>>
- 相关机构：南通大学复旦大学上海医学院苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目江苏省社会发展科技计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠发育过程中脊髓组织CAPON与Dexras1 mRNA表达的实验研究被引量：2
- 2007年
- 为探讨大鼠发育过程中神经型一氧化氮合酶羧基末端PSD-95/DLG/ZO-1（PDZ）结合配体（carboxy-terminal PDZ ligandof nNOS,CAPON）与Dexras1 mRNA的表达及二者的相关性,本实验采用大鼠发育模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime-PCR）及原位杂交组织化学（ISH）与免疫组织化学相结合的技术检测脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA的表达变化。结果表明：在胚胎14~18d的脊髓组织中,CAPON mRNA呈低水平表达,生后1d表达升高并达到高峰。从形态上看,表达于尚未分化成熟的前角,随后呈逐渐下降趋势。在生后12w,表达于脊髓后角。而Dexras1 mRNA在胚胎14d呈低水平表达,16~18d时表达升高,同样在生后1d出现表达高峰并定位于尚未分化成熟的前角,随后表达逐渐下降。生后12w,在后角有表达。根据Real-time PCR结果作直线相关分析,在生后脊髓发育过程中CAPON与Dexras1 mRNA表达呈高度相关,于生后1d共定位于脊髓前角。形态学结果显示CAPON与神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达于相同细胞,但亚细胞定位不同。本研究表明,大鼠发育过程中,脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA存在共表达,提示CAPON可能通过调节nNOS,进而激活Dexras1,在神经元的分化、突触的可塑性及突触发生过程中发挥一定的作用。
- 李欣程纯赵剑陈梦玲牛淑琼高尚峰沈爱国
- 关键词：神经型一氧化氮合酶实时荧光定量PCR原位杂交
- 神经型一氧化氮合酶相关分子NIDD mRNA在周围神经损伤后的表达变化
- 2007年
- 目的探讨正常及损伤的周围神经中神经型一氧化氮合酶(nNOS)相关分子(NIDD)的表达定位与变化。方法在利用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)研究大鼠坐骨神经损伤对nNOS及其相关分子NIDD mRNA表达变化的基础上,通过原位杂交与间接免疫荧光相结合的方法进一步研究其表达定位情况。结果nNOS及NIDD mRNA主要分布在正常和损伤坐骨神经的施万细胞(SCs)中,损伤后表达增多,分别在神经夹伤后2周以及切断后1周的近、远侧断端中出现表达高峰。原代培养的SCs中也检测到nNOS及NIDD,其mRNA分布在核周细胞质区域。结论周围神经损伤对nNOS相关分子NIDD的表达有影响,SCs表达NIDD可能参与神经损伤后再生修复机制。
- 陈梦玲程纯严美娟史淑贤沈爱国
- 关键词：一氧化氮合酶坐骨神经施万细胞原位杂交实时荧光定量聚合酶链反应
- 大鼠脑组织中SSeCKS基因克隆
- 2004年
- 目的 :克隆胚胎大鼠脑组织中SSeCKS基因。方法 :采用RT -PCR法 ,从胚胎大鼠脑组织mRNA中扩增SSeCKS基因部分CDS区片段 ,克隆入T载体 ,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定。结果 :RT -PCR法扩增出一特异产物与预期长度 44 6bp相符 ,DNA序列测序的结果与GenBank提供的已知序列 (U 2 3 14 6)比较 ,所克隆的SSeCKS基因片段与其中的 44 6bp完全相同 ,与SSeCKS基因 10 0 %同源。 结论 :采用RT
- 程纯严美娟邵晓轶胡文忠刘海欧
- 关键词：SSECKS基因克隆
- Cyclin D3正、反义表达质粒在淋巴瘤细胞系Raji中的转染与鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建人类cyclinD3正义和反义真核表达质粒 ,分别转染到淋巴瘤细胞系Raji细胞中 ,为探讨cyclinD3基因对淋巴瘤细胞生物学行为的影响提供研究基础。方法 :以Raji细胞总RNA为模板 ,通过RT -PCR获取cyclinD3全长cDNA ,克隆入 pGEM -T载体 ,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3 .1中 ,构成含cyclinD3的表达质粒 pcD NA3 -cyclinD3。再运用DNA重组技术将cyclinD3基因反向克隆到pcDNA3 .1中 ,构建成cyclinD3反义表达质粒pcDNA3 -ascyclinD3。用脂质体介导的基因转染方法 ,将cyclinD3正、反义表达质粒和空质粒分别导入Raji细胞 ,经G418筛选建立稳定转染细胞株 ,用WesternBlot方法鉴定cyclinD3基因的表达。结果 :酶切鉴定和测序分析证实 ,实验成功构建了cyclinD3正、反义表达质粒。与转染cyclinD3正义表达质粒和空质粒的细胞相比 ,转染cyclinD3反义表达质粒的Raji细胞中cyclinD3表达水平下降。 结论 :正、反义cyclinD3在淋巴瘤细胞中的转染和表达 ,为进一步研究cyclinD3在淋巴瘤细胞增殖。
- 邵晓轶程纯严美娟王夏强
- 关键词：CYCLIN表达质粒转染淋巴瘤细胞周期
- N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶在人星形胶质细胞瘤中的表达
- 2005年
- 目的分析与N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β1,4-galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤的表达变化。方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人星形胶质细胞瘤的表达存在。以扩增的3种同工酶cDNA片段作为探针进行标记,Northernblot分析其mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤中的表达变化。结果RT-PCR检测到β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人星形胶质细胞瘤中的表达存在。northernblot发现β-1,4-GalT-Ⅱ、Ⅴ在正常脑组织中有表达,但β-1,4-GalT-Ⅱ的表达较低,而β-1,4-GalT-Ⅰ在正常脑组织中表达极低。β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在星形胶质细胞瘤中的表达显著高于正常脑组织。其中,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ在各级胶质瘤中的表达没有明显差异。而β-1,4-GalT-Ⅴ的表达随胶质瘤分级的增高而增加。结论N-糖链合成相关的β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人脑星形胶质细胞瘤发生过程中的表达不同,尤其是β-1,4-GalT-Ⅴ的表达与人星型胶质瘤的恶性程度显著相关。
- 严美娟沈爱国邵晓轶李爱红王惠民顾建新程纯
- 关键词：半乳糖基转移酶N-糖链正常脑组织NORTHERNNORTHERN脑星形胶质细胞瘤
- p27^(kip1)和Skp2在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化被引量：3
- 2007年
- 为了探讨损伤后周围神经p27kip1和S期激酶相关蛋白2(Skp2)的定位表达和变化,本实验将成年SD大鼠随机分为正常对照组、夹伤组和切断组,运用Western blot结合免疫组织化学及免疫荧光双标,在大鼠坐骨神经损伤时,对p27kip1和Skp2表达的影响进行了研究。结果表明:(1)坐骨神经夹伤后,p27kip1蛋白表达先逐渐下降,后又逐渐上升;坐骨神经切断后,远侧段p27kip1蛋白表达持续下降,而近侧段p27kip1蛋白表达在切断后6h明显下降,后又逐渐升高至正常水平,而Skp2表达变化与之相反;(2)免疫组织化学染色结果显示,坐骨神经切断后1w,远侧段从断端到末端,p27kip1阳性信号逐渐增加,而Skp2阳性信号逐渐减弱;(3)免疫荧光双标显示,正常和损伤坐骨神经的雪旺氏细胞中都有p27kip1和Skp2表达。以上结果提示:周围神经损伤后影响雪旺氏细胞中p27kip1和Skp2的表达变化,为进一步研究它们在周围神经损伤和修复中的作用机制奠定基础。
- 史淑贤程纯陈梦玲秦婧高尚锋沈爱国
- 关键词：P27^KIP1SKP2雪旺氏细胞坐骨神经BLOT
- 鬼臼乙叉甙对星形胶质细胞瘤表达β1,4-半乳糖基转移酶的影响被引量：2
- 2005年
- 目的 研究鬼臼乙叉甙(Etoposide ,又称VP16)影响人星形胶质细胞瘤SHG 44细胞周期过程中,与N 糖链合成有关的β1,4 半乳糖基转移酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β- 1,4 -galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ,β- 1,4- GalT- Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)表达变化。方法 首先应用流式细胞仪技术分析VP16处理SHG 44细胞过程中细胞增殖情况的变化,再采用NorthernBlot方法分析处理过程中的SHG 44细胞中β- 1,4 -GalT- Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的表达变化。结果 流式细胞仪检测表明,细胞培养基加入12 0 μmol/LVP161～6h后能引起SHG 44细胞的S期阻滞。NorthernBlot显示,VP16作用1～6h过程中,β- 1,4 GalT -Ⅰ、Ⅴ表达无显著变化。而β- 1,4- GalT -Ⅱ表达在此过程中则有升高趋势。结论 VP16能够引起星形胶质细胞瘤细胞SHG 44细胞周期改变过程中,β- 1,4 -GalT- Ⅰ、Ⅴ的表达无变化,而β- 1,4 -GalT- Ⅱ的表达明显升高。提示VP16引起肿瘤细胞周期改变,可能通过影响β- 1,4- GalT- Ⅱ的表达,引起有关蛋白质的糖基修饰而实现的。
- 严美娟沈爱国程纯邵晓轶李爱红顾建新
- 关键词：星形胶质细胞瘤半乳糖基转移酶鬼臼乙叉甙流式细胞仪技术VP16细胞增殖情况
- 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11在大鼠脊髓横断性损伤后的表达变化被引量：2
- 2008年
- 目的探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11(CDK11)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化以及定位情况。方法将36只成年SD大鼠随机分为假手术组,T9横断伤1d、3d、5d、7d和14d组,每组6只。采用Western blotting测法损伤后各时间段CDK11蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫组织化学方法检测CDK11在假手术组以及损伤组脊髓中的分布和定位。结果Western blotting显示,CDK11蛋白水平在SCI后呈现先升高后下降的趋势,CDK11p58的表达于损伤后3d开始显著升高,一直持续到第7d,之后逐渐下降。而CDK11p110也在3d、5d时高于假手术组,伤后7d则明显降低,至14d时有所回升。免疫组织化学表明,CDK11在假手术组脊髓中均匀分布,损伤后3d,CDK11在脊髓灰质和白质中表达明显增加;免疫荧光双标记表明,CDK11与神经元的标记物神经元核抗原(NeuN)、少突胶质细胞标记物环核苷酸-3′磷酸水解酶(CNPase)有明显共定位,与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)也存在部分共定位。结论脊髓损伤后CDK11蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞存在共定位,提示CDK11参与了脊髓损伤后的病理生理过程。
- 肖锋季玉红孙琳琳秦婧杨君伶刘永华赵剑沈爱国
- 关键词：免疫组织化学免疫印迹法
- CDK11^(P58)和Cyclin D3在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化被引量：2
- 2007年
- 为了探讨大鼠坐骨神经损伤对CDK11P58和Cyclin D3表达的影响,本实验将成年SD大鼠随机分为假手术组和夹伤组,运用Western blot结合免疫荧光组织化学双标技术,观察了坐骨神经损伤后坐骨神经夹伤段、脊髓腰膨大前角和伤侧腓肠肌内CDK11P58和Cyclin D3的表达变化。结果显示:(1)坐骨神经夹伤后,坐骨神经夹伤段及脊髓腰膨大前角、伤侧腓肠肌中的CDK11P58蛋白的表达先逐渐下降,后又逐渐上升;而Cyclin D3的表达无明显变化;(2)在假手术组的坐骨神经、脊髓腰膨大前角和腓肠肌内都可观察到CDK11P58和Cyclin D3的表达;而坐骨神经夹伤后,在上述部位可检测到CDK11P58的表达强度明显减弱,但Cyclin D3无明显变化;(3)免疫荧光双标结果显示CDK11P58和Cyclin D3在假手术组的坐骨神经、脊髓腰膨大前角和伤侧腓肠肌内都有共存;而在坐骨神经损伤后这种共存强度明显降低。以上结果提示,坐骨神经损伤可影响坐骨神经及脊髓腰膨大、伤侧腓肠肌内CDK11P58的表达,但对Cyclin D3无明显影响,表明CDK11P58可能在周围神经损伤和修复中发挥重要作用。
- 王夏强程纯邵晓轶张冬梅刘海鸥沈爱国
- 关键词：CYCLIN坐骨神经WESTERNBLOT免疫荧光
- NIDD基因TaqMan探针的制备及其在实时荧光定量PCR方法中的应用被引量：2
- 2006年
- 目的:制备NIDD基因TaqM an探针建立检测NIDD基因荧光定量PCR(FQ-PCR),以进一步研究NIDD的表达情况。方法:采用RT-PCR法,从出生后一天的SD大鼠脑组织mRNA中扩增NIDD基因的部分编码序列区(CDS)片段,克隆入pGEM-T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定及序列测定。采用TaqM an探针,以重组质粒为模板绘制标准曲线。结果:RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度112 bp相符,DNA序列测序的结果与GeneBank提供的已知序列(AB098078)比较,所克隆的NIDD基因片段与其中的112 bp完全相同,与NIDD基因100%同源。以重组质粒为模板绘制标准曲线,相关系数r大于0.99,反应效率显示为1,各点变异系数小于10%。结论:采用RT-PCR和T载体技术成功制备出可应用于FQ-PCR的NIDD基因TaqM an探针。
- 沈勤陈梦玲沈爱国严美娟史淑贤程纯
- 关键词：实时荧光定量PCRTAQMAN探针
