国家自然科学基金(30771237)
- 作品数：12 被引量：97H指数：4
- 相关作者：柴友荣马丽娟冯瑜张迪申敏更多>>
- 相关机构：西南大学重庆市农业科学院中华人民共和国农业部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 原花青素的性质、功能、纯化和利用被引量：28
- 2009年
- 原花青素广泛分布于高等植物的多种器官和组织中,是黄烷-3-醇的游离、寡聚或多聚物,存在侧基修饰、异构性质、聚合方式、聚合度等的多样性,可采用多种色谱和质谱技术进行纯化和鉴定。原花青素对于植物具有抗紫外线、清除自由基、抗病驱虫、影响种子休眠等功能,影响作物品质等性状,对人体也具有多种生理功效,在药物、化妆品、食品等领域有良好的应用前景。
- 张迪赵文军马丽娟柴友荣
- 关键词：原花青素纯化
- 原花青素的生物合成途径、功能基因和代谢工程被引量：49
- 2009年
- 原花青素(PA)广泛分布于高等植物中,与农作物的多种品质性状密切相关。虽长期受到关注,但其生物合成途径和主要功能基因的解析则是近年来随着拟南芥等植物突变体研究的深入才取得突破的。PA经公共苯丙烷-核心类黄酮-原花青素复合途径而合成,先后涉及12个关键酶(PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3’H、DFR、LDOX/ANS、LAR、ANR、LAC)的催化反应和3种转运蛋白(GST、MATE、ATPase)的胞内转运,并有6种转录因子(WIP-ZF、MYB、bHLH、WD40、WRKY、MADS)参与调控PA的合成与积累。这些基因在拷贝数、表达特征、蛋白亚细胞定位、蛋白互作、突变体表型等方面具有显著特点。PA的代谢工程在牧草品质改良、农产品脱涩、油菜黄籽材料创新、葡萄和葡萄酒品质改良、茶多酚分子育种、作物抗病虫性提高、新型作物拓展等方向具有重要的应用前景,目前仅在少数方向有所启动,更待广泛关注和深入研究。
- 赵文军张迪马丽娟柴友荣
- 关键词：生物合成途径功能基因代谢工程原花青素
- 植物蛋白负调控因子被引量：3
- 2008年
- 介绍植物蛋白负调控因子的调控机制,它们在激素调节、生长发育尤其是花器官形成、抗病性和耐逆性中的作用,以及在激素信号、光敏色素信号、抗病信号、耐逆信号转导途径中的定位和作用的分子机制研究进展。
- 尹锐柴友荣
- 关键词：植物蛋白负调控因子信号途径生长发育抗病性耐逆性
- 基于RNA干扰抑制油菜种皮色素合成被引量：1
- 2023年
- 甘蓝型油菜是我国最重要的食用植物油来源。在相同遗传背景下黄籽油菜的种子具有种皮薄、含油量高和蛋白质含量高、纤维素和多酚含量低、油质透明等优点。前人研究表明,油菜的模式植物拟南芥TT2基因与种皮颜色有关,而目前油菜TT2基因研究较少。为明确甘蓝型油菜TT2基因功能,利用RNA干扰技术沉默甘蓝型TT2基因。首先构建TT2基因RNA干扰载体,通过农杆菌介导法获得转基因材料。对花后15 d的幼种进行TT2基因定量表达分析。考察转基因材料农艺性状,收获种子进行冷冻切片观察种皮厚度变化,测定种皮中木质素、原花青素含量变化。结果显示种皮结实率降低,种皮颜色变浅。细胞冷冻切片结果显示,种皮变薄、栅栏组织稀疏。生理指标测定木质素、原花青素含量均下降。定量PCR显示,RNA干扰技术抑制油菜中TT2基因的表达。研究结果说明,甘蓝型油菜TT2基因特异性在种子内种皮表达,与预测一致。TT2基因缺失导致种皮色素积累减少,种皮颜色变浅,种皮厚度变薄,栅栏组织稀疏。木质素含量降低表明木质素代谢途径作为苯丙烷通路的分支受到TT2基因缺失影响。原花青素含量降低表明类黄酮代谢途径受TT2基因缺失影响。这与黄籽与黑籽油菜区别相一致。本研究为甘蓝型黄籽油菜种皮色泽的遗传性提供依据,推动甘蓝型黄籽油菜的育种进程。
- 申敏申敏
- 关键词：RNA干扰甘蓝型油菜种皮木质素原花青素
- 芸薹属原花青素跨膜转运蛋白TT12、AHA10基因家族RNA干扰载体的构建
- 2010年
- 拟南芥TT12和AHA10基因分别编码MATE类型和H+泵类型的跨膜转运蛋白,介导原花青素单体向液泡的转运,对种皮色素的积累起重要作用。甘蓝型油菜是重要的油料作物,但缺乏黄籽基因型,现有黄籽材料表型不稳定,黄籽性状的分子机理不清,缺乏相关的分子育种。克隆了芸薹属TT12和AHA10基因家族的RNA干扰载体片段BTT12I和BA-HA10I,以基于pFGC5941而改造的植物RNA干扰基础载体pFGC5941M为骨架,构建了相应的RNAi载体pFGC5941M-BTT12I(简称pBTT12I)和pFGC5941M-BAHA10I(简称pBAHA10I),通过分子鉴定后转化农杆菌,获得工程菌株,有利于通过基因沉默技术研究TT12和AHA10基因在芸薹属种皮色素跨膜转运中的作用和机理,探索黄籽性状的分子育种。
- 冯瑜马丽娟闫楠何芳莹柴友荣
- 关键词：芸薹属黄籽RNAI载体
- 芸薹属ANR(BAN)基因家族RNA干扰载体的构建被引量：4
- 2010年
- 花青素还原酶(ANR)是原花青素生物合成的关键酶,对种皮色素的积累起重要作用。黄子是油菜的重要优质性状,但甘蓝型油菜中其基因型缺乏,表型不稳定,分子机理不清。该实验克隆了芸薹属ANR基因家族的RNA干扰片段BANRI,将其反义片段、正义片段采用NcoI+AatII、BamHI+XbaI分别插入到改进型植物RNA干扰基础载体pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成重组载体pFGC5941M-BANRI(简称为pBANRI),复合PCR鉴定表明载体构建成功,并转化根癌农杆菌菌株LBA4404,获得工程菌株。pBANRI的构建有助于揭示芸薹属物种种皮色素合成的机理,探索对油菜等植物种皮色素进行分子育种的可能性。
- 孟繁敏陈艳冯瑜柴友荣
- 关键词：芸薹属原花青素RNAI
- 芸薹属TT8基因家族RNA干扰载体的构建
- 2011年
- 类黄酮是植物的重要次生代谢物质,拟南芥透明种皮8(TT8)是调控花青素苷、原花青素、种皮黏液生物合成的1个转录因子,参与决定植株彩色、种皮色泽、种皮黏液分泌等性状。本研究采用PCR法从甘蓝型油菜中克隆了592 bp(不计人工酶切位点)的芸薹属TT8基因家族的RNA干扰片段,将其反义片段、正义片段采用NcoⅠ+SwaⅠ、BamHⅠ+XbaⅠ双酶切方式分别插入到改进型植物RNA干扰平台载体pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成了11 380 bp的重组载体pFGC5941M-BTT8Ⅰ(简称为pBTT8Ⅰ),多种PCR鉴定结果表明构建成功;然后转化根癌农杆菌,获得工程菌株,可用于芸薹属植物相关性状的分子机理研究和遗传修饰。
- 张瑞熙柴友荣殷家明
- 关键词：芸薹属甘蓝型油菜RNAI
- 芸薹属DFR基因家族RNA干扰载体的构建被引量：3
- 2011年
- 二氢黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)是类黄酮途径的一个关键酶,对种皮色泽和花色的形成具有重要作用。本研究从甘蓝型油菜克隆了600 bp(不计人工酶切位点)的芸薹属DFR基因家族的RNA干扰片段BDFRI,将其反义片段和正义片段分别插入到本课题组新近改造的植物RNAi平台载体pFGC5941M的启动子与间隔区之间、间隔区与终止子之间,构建了11 400 bp的RNAi干扰载体pFGC5941M-BDFRI,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,并转化到根癌农杆菌菌株LBA4404中形成了工程菌株。此载体的构建为进一步研究DFR基因参与决定芸薹属种皮色素和茎叶彩色性状的分子机理和代谢调控奠定了基础。
- 呼丽君柴友荣张建奎姚永宏
- 关键词：芸薹属甘蓝型油菜RNA干扰种皮颜色
- 农杆菌介导转化油菜中几种影响玻璃化频率的因素被引量：2
- 2012年
- 在用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的组织培养过程中,常会伴生着试管苗玻璃化现象的发生,此现象的发生会降低转基因的频率.本试验结果表明,影响玻璃化发生的因素较多,包括激素体积质量分数、蔗糖体积质量分数、琼脂体积质量分数和接种密度等.其中,激素6-BA和ZT体积质量分数对诱芽率和玻璃化率都有显著影响,随着体积质量分数的升高,玻璃化率升高,以6-BA体积质量分数为1mg/L,ZT体积质量分数为2mg/L时结果较为理想.蔗糖体积质量分数和琼脂体积质量分数对玻璃化率也有显著影响,当二者体积质量分数升高,玻璃化率降低,同时诱芽率也降低.综合分析,当蔗糖体积质量分数为50g/L,琼脂体积质量分数为10g/L时最适宜.接种密度对玻璃化的发生有显著影响,密度越高,玻璃化倾向越严重,而密度对诱芽率影响不明显.试验结果分析发现,接种密度为20～30个/皿最适宜.
- 张瑞熙申敏殷家明柴友荣
- 关键词：甘蓝型油菜农杆菌介导转化玻璃化
- 转基因甘蓝型油菜的小孢子培养及转基因的遗传分析被引量：1
- 2010年
- [目的]研究甘蓝型油菜转查尔酮异构酶反义基因T1代植株及其小孢子成苗的遗传表达,为甘蓝型油菜的转基因和种质资源创新研究提供参考。[方法]以甘蓝油菜转查尔酮异构酶反义基因T1代5个独立转基因植株为材料进行小孢子培养,通过GUS报告基因的组织化学染色鉴定对外源转基因在花粉植株中的遗传进行了分析。[结果]5个独立转基因植株均获得了胚状体和花粉植株;转基因在花粉培养后代和有性自交后代中遗传行为一致;在每个独立转基因植株的花粉植株中GUS阳性和阴性的分离比均为3∶1,符合孟德尔遗传规律,表明有2个转基因拷贝整合到受体2条非同源染色体上;3个独立转基因植株自交后代中GUS阳性和阴性的分离比符合15∶1,同样表明有2个转基因拷贝整合到受体2条非同源染色体上。[结论]通过转基因油菜的小孢子培养快速获得转基因纯系是可行的。
- 肖霞殷家明林呐柴友荣李加纳
- 关键词：小孢子培养
