重庆市教委科研基金(JK060306)
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
- 相关作者：张德纯贺松郭亚楠刘明方龚芳红更多>>
- 相关机构：重庆医科大学西安交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 不同幽门螺杆菌菌株ureB和hspA基因同源性分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究不同来源幽门螺杆菌菌株的ureB基因和hspA基因的同源性。方法在GenBank中调取全球来源于幽门螺杆菌不同菌株的ureB基因序列23个和中国境内来源于幽门螺杆菌不同菌株的hspA基因序列20个,利用ClustalW 2生物软件,分别对ureB基因和hspA基因序列进行同源性比较分析,并建立基因进化树,分析其特点。结果不同国家之间ureB基因序列并不一致,同一国家ureB基因序列相似性较高;中国境内hspA基因序列相似性程度很高。结论中国境内不同幽门螺杆菌菌株ureB基因序列和hspA基因序列的相似性程度都很高,都具有很高的同源性。
- 贺松张德纯
- 关键词：UREBHSPA基因序列同源性比较
- 嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因的克隆及其作为食品级筛选标记的研究被引量：4
- 2010年
- 为研究嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因(lacZ)作为食品级筛选标记的活性及筛选稳定性,作者从嗜酸乳杆菌基因组中克隆β-半乳糖苷酶基因并在乳酸乳球菌中表达,通过X-gal显色筛选阳性克隆;用X-gal显色筛选方法将重组乳酸乳球菌传60代,并测定β-半乳糖苷酶酶活和比活力。结果显示:通过表达有活性的β-半乳糖苷酶和X-gal显色可成功筛选出阳性克隆菌株;对借助X-gal传60代后的重组乳酸乳球菌进行β-半乳糖苷酶比活力检测,与X-gal筛选的第二代相比没有显著差异(P=0.592>0.05),与红霉素筛选比较也没有显著差异(P=0.882>0.05)。由此可见,β-半乳糖苷酶基因作为筛选标记具有较好的活性和稳定性,为以β-半乳糖苷酶基因作为筛选标记的食品级载体的研究奠定了基础。
- 贺松龚芳红张德纯刘明方程芳郭亚楠
- 关键词：Β-半乳糖苷酶嗜酸乳杆菌乳酸乳球菌
- 幽门螺杆菌热休克蛋白A在乳酸乳球菌中的表达及免疫学活性分析被引量：6
- 2010年
- 目的构建含幽门螺杆菌(H.pylori)热休克蛋白A编码基因的重组载体,并电转入乳酸乳球菌MG1363,表达目的蛋白并分析其免疫原性,为H.pylori基因工程口服疫苗的研究和开发奠定基础。方法以H.py-loriNCTC 11637株基因组DNA为模板,PCR扩增hspA基因,并克隆至乳酸乳球菌表达载体pMG36e中。将重组质粒转化E.coliDH5α,经鉴定的阳性重组质粒命名为pMG36e/hspA。以电穿孔法将pMG36e/hspA转化乳酸乳球菌MG1363并用Western blot检测HspA蛋白的表达。结果克隆重组后得到pMG36e/hspA。将pMG36e/hspA电转化MG1363后,收集菌体蛋白进行Western blot分析,在HspA的相对分子质量(Mr≈13 kDa)处出现特异性条带。结论首次成功构建了表达H.pyloriHspA的重组乳酸乳球菌MG1363,为进一步口服疫苗的相关研究奠定了基础。
- 龚芳红贺松贺松刘明方张德纯
- 关键词：幽门螺杆菌HSPA乳酸乳球菌
- H.pylori尿素酶B亚单位在保加利亚乳杆菌的表达与鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估。方法采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC11637中扩增ureB基因,插入乳酸菌表达质粒pMG36e,将重组质粒电转入保加利亚乳杆菌L6032中,获得表达ureB的基因工程乳杆菌。在含乳糖的MRS培养基诱导目的蛋白表达,Western blot鉴定其免疫原性。连续传代培养60代,检测基因工程乳杆菌的稳定性、形态学与生理生化特性以进行初步的安全性评估。结果特异PCR、酶切和测序鉴定均证实ureB基因克隆入表达载体pMG36e,SDS-PAGE结果显示,重组质粒pMG36e-ureB电转入保加利亚乳杆菌所构建的基因工程乳杆菌能表达约64KD的蛋白,Western blot证明该蛋白能与抗H.pyloriureB的兔血清反应。稳定性、形态学与生理生化特性检测结果表明,基因工程乳杆菌与原始菌株保加利亚乳杆菌完全一致。结论成功构建能表达H.pylo-riUreB的保加利亚乳杆菌L6032-UreB,该基因工程菌在形态与生理生化特性上未发生任何变异,从而为探索幽门螺杆菌感染的益生菌制剂调理疗法奠定了坚实的基础。
- 李月张德纯
- 关键词：幽门螺杆菌保加利亚乳杆菌益生菌制剂
