国家教育部博士点基金(20113321120003)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：陈钢余正平金炜东杨文军周蒙滔更多>>
- 相关机构：广州军区武汉总医院温州医学院附属第一医院温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家教育部博士点基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EphA1/EphrinA反馈环调控内皮祖细胞促肝细胞癌血管生成潜能被引量：1
- 2019年
- 目的:研究体内外调控内皮祖细胞系EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1/EphrinA1信号通路对其细胞生物学行为及活体内促肝细胞癌血管生成潜能的影响。方法:体内外用不同浓度强力霉素调控EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1基因的表达,分为调控组Dox(+)(培养液中分别含强力霉素1、10和100μg/mL)和非调控组Dox(-);用Western blot法检测对EphA1/EphrinA1信号通路的影响;CCK8法、细胞划痕实验及细胞侵袭实验检测对细胞增殖、运动及侵袭能力的影响;绘制肝癌裸鼠移植瘤生长曲线结合瘤体免疫组织化学染色分析调控EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1基因的表达对其促血管生成潜能的影响。结果:体外实验中用10μg/mL强力霉素能最大程度抑制EphA1/EphrinA1信号通路活性,EphA1及其配体EphrinA1蛋白表达分别为0.293±0.029、0.603±0.038,与Dox(-)组的0.943±0.041、0.960±0.062比,差异均有统计学意义(t=12.940,4.864;P<0.001,0.008)。细胞生物学行为分析显示调控EphA1基因表达对EPCsEphA1/SiRNA-Tet增殖能力并无影响;10μg/mL强力霉素调控时能最有效地抑制EPCsEphA1/SiRNA-Tet运动及侵袭能力,与Dox(-)组比差异均有统计学意义(t=4.435,2.467;P=0.002,0.039)。体外100μg/mL强力霉素可最大程度诱导活体内EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1基因表达下调,在第6周移植瘤体积为(543.8±24.6)mm3,比Dox(-)组体积(924.5±81.8)mm3明显减少(t=4.909,P=0.001)。免疫组织化学染色显示100μg/mL强力霉素调控组微血管为(21.6±3.6)个,明显少于Dox(-)组的(37.0±4.1)个(t=2.823,P=0.024)。结论:不同浓度强力霉素可在体内外精确调控内皮祖细胞中EphA1/EphrinA1信号轴的活性,进而达到调控内皮祖细胞促肝癌血管生成潜能的目的。
- 俞海涛郭鹏毅谢孝宰陈钢
- 关键词：肝细胞癌内皮祖细胞血管生成
- EphA1基因可控性双稳转内皮祖细胞系EPCs^(Tet-On-EphA1)SiRNA的建立被引量：2
- 2012年
- 目的建立可调控EphA1基因表达的内皮祖细胞系EPCsTet-On-EphA1SiRNA。方法将pWHE146质粒转染到内皮祖细胞系中,筛选出稳定表达的细胞克隆;扩增后瞬时转染pTRE-hyg-luc质粒,强力霉素诱导表达后,检测荧光素酶活性,挑选出高表达、低背景的受强力霉素调控的EPCsTet-On细胞株;再将重组质粒pTRE-EphA1SiRNA转染入EPCsTet-On细胞株,筛选出稳定表达细胞克隆EPCsTet-On-EphA1SiRNA;通过强力霉素诱导后,利用RT-PCR和Western blotting法检测EphA1基因mRNA与蛋白的表达。结果成功构建了受强力霉素调控的高表达低背景的EPCsTet-On-EphA1SiRNA细胞株;强力霉素可诱导EPCsTet-On-EphA1SiRNA细胞株中EphA1mRNA表达下调,较之未调控组其差异有统计学意义(P<0.05);强力霉素调控EphA1蛋白表达的能力在一定范围内呈剂量依赖性关系。结论成功建立强力霉素调控EphA1基因表达的大鼠双稳转内皮祖细胞系EPCsTet-On-EphA1SiRNA,为深入研究EphA1基因在内皮祖细胞参与肝癌血管生成过程中的作用提供了有效的实验手段。
- 陈钢金炜东王怡施红旗余正平周蒙滔杨文军
- 关键词：内皮祖细胞
