广东省医学科学技术研究基金(B2010190)
- 作品数：8 被引量：41H指数：5
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- CO_2气腹对结直肠癌细胞增殖及microRNA-221和CDKN1C/p57表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:通过检测不同压力CO2气腹环境下结直肠癌细胞周期和microRNA-221(miR-221)及CDKN1C/p57表达的变化,探讨CO2气腹对结直肠癌细胞增殖的影响。方法:将人结直肠癌CaCO2细胞系分别置于0、10、12和15mm Hg的CO2气腹环境下培养4h,应用实时荧光定量PCR检测CaCO2细胞中miR-221表达状况,运用Western-blot分析CDKN1C/p57蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪观察细胞的增殖状态和分析细胞周期。结果:与对照组相比,15mm Hg的CO2气腹组结直肠癌细胞中miR-221表达量下降[(1.212±0.159)vs.(1.937±0.208)],而CDKN1C/p57蛋白表达增高[(2.017±0.808)vs.(0.972±0.416)],同时细胞增殖抑制率[(32.7±5.1)%vs.(21.8±3.6)%]增加,且G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01);0、10、12mm Hg的CO2气腹组结直肠癌细胞增殖抑制率及miR-221、CDKN1C/p57表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:临床常用压力的CO2气腹对结直肠癌细胞增殖无明显影响;15mm Hg的CO2气腹可抑制癌细胞增殖,其原因可能与miR-221表达下降,继而CDKN1C/p57蛋白表达增高有关。
- 王剑平孙凯雷尚通吴承堂李国新
- 关键词：结直肠肿瘤细胞增殖CO2气腹
- 结直肠癌组织中miR-338-3p、SMO的表达变化及意义被引量：7
- 2012年
- 目的观察结直肠癌组织中微小RNA(miRNA)-338-3p(miR-338-3p)与Smoothened(SMO)的表达变化,并探讨其意义。方法 30例结直肠癌患者,手术时留取癌组织及癌旁组织,抽提其中的总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR检测标本中的miR-338-3p,用半定量RT-PCR检测SMO mRNA,Western blot检测SMO蛋白。结果结直肠癌组织中miR-338-3p的表达量(2-ΔΔCt)为0.153 7±0.126 4,SMO mRNA的相对表达量为0.371±0.116,SMO蛋白的灰度值为3.195±1.623,癌旁组织分别为0.901 5±0.426 3、0.366±0.117、0.733±0.305,两种组织中的miR-338-3p、SMO蛋白表达量相比,P均<0.01;miR-338-3p与SMO蛋白的表达呈负相关(r=-0.877,P<0.01)。结论结直肠癌组织中miR-338-3p表达明显下调,SMO蛋白表达明显上升;miR-338-3p可能通过转录后基因沉默机制使SMO蛋白表达下降,从而抑制结直肠癌的发生发展。
- 苏桂源孙凯李国新余江
- 关键词：结肠肿瘤直肠肿瘤微小RNA
- 结直肠癌与毗邻癌旁组织中microRNA-221与CDKN1C／p57的差异表达被引量：13
- 2011年
- 目的观察结直肠癌与毗邻癌旁组织中microRNA-221（miR-221）与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57（CDKN1C／p57）的差异表达。方法常规抽提结直肠癌及对照癌旁组织中总RNA及蛋白质，应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测标本中miR-221表达，以半定量逆转录（RT）-PCR和Westernblot分析CDKN1C／p57mRNA和蛋白表达。结果30例结直肠癌与癌旁组织相比，miR-221表达明显上调（2．041±1．401比0．806±0．341），差异有统计学意义（P〈0．01），半定量RT—PCR和Western blot分别证实其町能调节的靶目标CDKN1C／p57在mRNA水平结直肠癌和癌旁组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05），而蛋白质水平在结直肠癌中表达明显下降（3．019±1．708比0．972±0．316，P〈0．01）。结论miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C／p57蛋白表达下降，从而促进结直肠癌的发生发展。
- 曾俊杰孙凯吴承堂雷尚通王伟
- 关键词：结直肠癌实时荧光定量PCR
- MicroRNA-221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖被引量：11
- 2011年
- 目的探讨microRNA-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221特异性抑制剂(anti-MIR221)寡核苷酸,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测Caco2细胞中MIR221表达状况,运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mRNA及蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞的增殖状态;构建pGL3-p57荧光素酶报告载体并与pre-MIR221或anti-MIR221共转染Caco2细胞,检测转染细胞中荧光素酶活性变化。结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后,CDKN1C/p57蛋白表达水平下降,细胞增殖显著(P<0.01);而anti-MIR221可上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖,且此种抑制作用可被anti-p57-siRNA逆转,说明此种抑制效应确由CDKN1C/p57所介导;在转染重组有CDKN1C/p57基因3'-UTR片段的荧光素酶报告载体的Caco2细胞中,共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降,而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 MIR221可通过与CDKN1C/p57 mRNA 3'-UTR区域结合使结肠癌细胞中CDKN1C/p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖;anti-MIR221则可通过上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应。
- 孙凯王伟雷尚通吴承堂李国新
- 关键词：结肠癌增殖
- 微小RNA-221对结直肠癌中CDKN1C/P57表达调控的研究被引量：16
- 2011年
- 目的 观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221（miR-221）和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法 应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果 miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织（0.806±0.341,P＜0.01）;同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57 mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织（3.019±1.708比0.972±0.316,P＜0.01）.癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.
- 孙凯曾俊杰王伟吴承堂雷尚通李国新
- 关键词：结直肠肿瘤增殖细胞凋亡
- miR-221在结直肠癌中的表达及意义被引量：1
- 2011年
- 目的探讨micorRNA-221(miR-221)在结直肠癌与癌旁组织中差异表达状况及其与临床病理特征之间的关系。方法选取南方医院经手术切除的原发性结直肠癌标本30例,常规抽提肿瘤及对照癌旁组织中总RNA,应用Real-time RT-PCR检测标本中miR-221表达状况,并以Northern blot进行验证。结果 30例结直肠癌与癌旁组织相比,miR-221表达明显上调(2.041±1.401 vs.0.806±0.341),差异具有统计学意义(P<0.01),且Real-time RT-PCR与Northern blot检测结果具有高度相关性(r2=0.948,P<0.01);miR-221表达水平与肿瘤TNM分期(P=0.032)以及浸润深度(P=0.021)有关。结论 miR-221在结直肠癌中表达上调并可能参与了结直肠癌的发生发展,miR-221有望成为结直肠癌患者预后判断的潜在标志物;Real-time RT-PCR相比较Northern blot是一种较精确的miRNA定量检测方法,具有样本需求量小、操作流程简化、高效性等优点。
- 王剑平孙凯雷尚通吴承堂
- 关键词：结直肠癌REAL-TIMERT-PCRNORTHERNBLOT
- MicroRNAs在胃肠道恶性肿瘤发生发展中的作用
- 2013年
- MicroRNAs(miRNAs)是一种内源性小分子非编码RNA,在各类生物体中扮演着重要角色。越来越多的研究证实,miRNAs与肿瘤的发生、发展密切相关,可作为一类的癌基因或者抑癌基因调控肿瘤的发生发展。对miRNAs的更进一步研究,将会对胃肠道肿瘤中的发病机制、诊断、治疗方面带来突破,具有广阔的应用前景。
- 王伟董华英姚嘉张宇钟晓捷汤鹏孙凯吴承堂
- 关键词：MIRNAS胃肠道肿瘤基因调控
- 特异性miR-221抑制剂对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：9
- 2011年
- 目的探讨miR-221在结直肠癌细胞中的表达状况及特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测四种人结肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miRNA-221表达状况,并以人脐静脉内皮细胞HUVEC作为正常对照;设计并合成miR-221、anti-miR-221(微小RNA抑制剂)寡核苷酸,以脂质体转染Caco2细胞系,以Real-time Q-PCR再次检测转染后细胞中miR-221表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态。结果与正常细胞相比,4种人结肠癌细胞系中miR-221表达均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01);癌细胞转染anti-miR-221后,G0/G1期细胞比例明显增加,而S期细胞比例显著下降,并可见细胞凋亡的发生(P<0.01)。结论 miR-221特异性抑制剂可通过抑制细胞增殖同时诱导凋亡而抑制结直肠癌细胞生长,提示miR-221作为结直肠癌生物治疗有效靶点有进一步研究价值。
- 王伟孙凯吴承堂雷尚通曾俊杰伍颖君李国新
- 关键词：结直肠癌凋亡
