国家自然科学基金(30200103)
- 作品数：18 被引量：51H指数：4
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- 野生型p53基因导入对U937细胞分化和清道夫受体CD36表达的影响
- 2003年
- 杨向东唐蔚青李红霞王抒黎健
- 关键词：野生型P53基因基因导入细胞分化清道夫受体
- 泛素-蛋白酶体途径与受体胞吞被引量：4
- 2004年
- 泛素 蛋白酶体途径 (ubiquitin proteasomepathway ,UPP)是真核细胞内重要的蛋白质调控系统 ,可高度选择性地降解细胞内蛋白质 ,参与调节各种细胞生理过程。泛素化可能作为调节受体内化的一种修饰而介导受体胞吞 (receptorendocytosis) ,2
- 屈顺林杨向东
- 关键词：泛素蛋白酶体
- MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV -304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响。方法 采用两个浓度(2, 5μmol·L-1 )的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV -304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT -PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase -3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果 对照组ECV -304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11. 3%,MG132浓度升至5μmol·L-1,细胞凋亡率增致44 .5%,MG132诱导ECV 304细胞凋亡具有量-效关系;RT -PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase 3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase- 3蛋白表达水平升高。结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase- 3基因转录,使细胞内caspase -3增加而促进细胞凋亡。
- 郭芳汤劲松孙文清王蕾杨向东
- 关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白酶体抑制剂CASPASE-3
- 氯沙坦调节高血压大鼠血管重塑及其对p38MAPK信号蛋白表达的影响被引量：4
- 2004年
- 目的研究血管紧张素Ⅱ受体-1阻断剂氯沙坦对肾性高血压大鼠血管重塑及其分裂原激活的蛋白激酶p38MAPK表达的影响。方法两肾一夹法复制肾血管性高血压大鼠(2K1C-RHR)模型;采用尾动脉套管法和颈动脉插管法测量大鼠血压,大血管(胸主动脉)苏木素-伊红(HE)染色进行形态学观察;治疗组采用氯沙坦灌胃治疗;反转录-聚合酶链反应和免疫印迹方法检测主动脉血管p38MAPK的表达。结果实验组大鼠和对照组(假手术组)普通饲料饲养6周,模型组血压为(158±7)mmHg,对照组血压为(104±11)mmHg;两组间差异有显著性(P<0.05);模型组大鼠胸主动脉内径增大,中层厚度增大,细胞层数略微增加。经氯沙坦治疗后,血压降为(132±9)mmHg,血管重塑现象氯沙坦治疗组较实验组明显改善;免疫印迹方法检测,重塑血管主动脉血管p38MAPK的表达增高,氯沙坦干预可以抑制其表达。结论氯沙坦可明显改善肾血管性高血压大鼠血管重塑,这种调节可能是通过阻断血管紧张素Ⅱ受体信号途径或调节p38MAPK表达而发挥作用。
- 郭芳杨向东万载阳刘俊文屈顺林秦旭平徐立朋廖端芳
- 关键词：氯沙坦高血压血管重塑蛋白表达
- 新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位分析及抗体制备被引量：2
- 2005年
- 目的:分析一个新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位并制备其多克隆抗体。方法:从人胎肝文库PCR扩增获得FRG4基因全长cDNA序列;通过生物信息学分析,预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对;采用固相多肽合成法合成了FRG4抗原多肽,并免疫家兔;用免疫组化检测蛋白在人肝癌细胞HepG2细胞中的表达。结果:通过生物信息学分析选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,制备兔抗人FRG4多克隆抗体。高效液相色谱检测显示抗体纯度达82.79%,抗体滴度为1∶16000,Westernblot证实该抗体具有较好的反应性和特异性,免疫组化证实其主要在HepG2细胞胞浆中表达。结论:成功制备了新的人突触相关蛋白(FRG4)多克隆抗体。
- 王仁杨向东屈顺林刘俊文闾宏伟姬志娟盛树力
- 关键词：巨噬细胞动脉粥样硬化多肽合成抗体
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导人巨噬细胞THP-1凋亡被引量：4
- 2004年
- 泛素-蛋白酶体途径是生物体内进行蛋白质选择性降解的重要途径之一,广泛参与细胞周期调控、DNA修复、细胞信号转导、细胞凋亡等多种生理过程。为了研究调控泛素-蛋白酶体途径表达对巨噬细胞THP-1凋亡和细胞内载脂蛋白B的蓄积的影响,本实验采用蛋白酶体抑制剂MG132(5μmol/L)处理THP-1细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内载脂蛋白B含量,用半定量逆转录-聚合酶链反应检测细胞内UPP途径相关基因的表达。结果发现:MG132可以诱导THP-1细胞凋亡;实验组细胞内载脂蛋白B蓄积增加;实验组细胞内泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白连接酶mRNA表达均降低,而26S蛋白酶体mRNA无显著改变。结果提示,蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导THP-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径中泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白连接酶活性,使细胞内栽脂蛋白B经泛素-蛋白酶体途径降解减少,在细胞内蓄积而使细胞凋亡率增加。
- 刘俊文杨向东王仁屈顺林杨永宗
- 关键词：病理学与病理生理学蛋白酶体抑制剂巨噬细胞凋亡
- 泛素-蛋白酶体途径介导的细胞周期调节蛋白的水解被引量：3
- 2005年
- 泛素-蛋白酶体途径高选择性地降解细胞在应激和非应激条件下产生的异常蛋白质,对维持细胞正常生理功能具有十分重要的意义。在蛋白质降解过程中泛素的重要作用越来越得到研究者的重视。许多研究表明泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白水解在真核细胞 G_1→S期过程中起着至关重要的作用。本文就细胞周期 G_1、S 期中由泛素介导的几种重要的细胞周期调节蛋白的水解作一综述。
- 刘俊文杨向东
- 关键词：细胞周期调节蛋白泛素-蛋白酶体途径介导应激条件蛋白质降解蛋白水解
- 高水平NADPH氧化酶4表达对ECV304细胞凋亡的影响
- ＜正＞ 目的转染NADPH 氧化酶4（NOX4）质粒到人脐静脉内皮细胞（ECV304）中使NOX4高表达,观察NOX4表达水平的改变对ECV304细胞活性氧（ROS）生成和凋亡的影响。方法用脂质体试剂盒转染NOX4表达质...
- 屈顺林王抒王蕾满咏杨向东黎健
- 关键词：病理学与病理生理学人脐静脉内皮细胞活性氧细胞凋亡
- 文献传递
- 外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中载脂蛋白B的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:研究Rb基因在U937细胞泡沫化过程中对细胞内载脂蛋白B含量的影响,初步探讨Rb基因 在泡沫细胞形成过程中的作用。方法:采用氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)孵育U937细胞,以及Ox-LDL孵育同时 导入外源性Rb基因转染U937细胞,分别于处理0 h、12 h、24 h收集细胞,半定量RT-PER与流式细胞术检测Rb mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内载脂蛋白B的含量。平行实验重复3次,进行统计学方差分析。结果:氧 化型低密度脂蛋白孵育U937细胞泡沫化过程中,12 h、24 h Rb基因的表达显著低于对照组0 h(P<0．05);细胞内载 脂蛋白B含量则显著高于对照组0 h(P<0．05)。而U937细胞在导人外源性Rh基因后,12 h、24 h细胞内的Rb基因 的表达显著高于对照组0 h(P<0．05);细胞内载脂蛋白B含量则显著低于对照组0 h(P<0．05)。结论:外源性Rb 基因的导入可以下调细胞内载脂蛋白B的含量,表明Rb基因可能与单核细胞源性泡沫细胞形成有关,可能是影响 泡沫细胞形成的相关基因的敏感候选基因之一。
- 闾宏伟袁洪阳国平陈淑华杨向东
- 关键词：U937细胞载脂蛋白B类
- 人突触相关蛋白抗原表位分析、抗体制备及表达研究被引量：1
- 2004年
- 突触相关蛋白家族成员的功能与神经突触膜上的谷氨酸酯受体和钾离子通道的定位和功能有关 ,参与神经递质的释放、神经的生长、发育及修复 .为分析一个新的人突触相关蛋白基因 (FRG4 )的抗原表位和该蛋白质在血管细胞的表达 ,从人胎肝文库PCR扩增获得FRG4基因全长cDNA序列 .通过生物信息学分析 ,预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇和功能结构域 ;选取抗原 13肽PKLVKEEVFWRNY ,采用固相多肽合成法合成了FRG4抗原多肽 ,免疫新西兰白兔获得兔抗人FRG4多抗 ;免疫组化检测该蛋白质在人血管细胞中的表达 .高效液相色谱检测显示制备的兔抗人FRG4多克隆抗体纯度达 82 79% ,抗体滴度为 1∶16 0 0 0 ,蛋白质印迹证实该抗体具有较好的反应性和特异性 ,免疫组化证实 ,其主要在平滑肌细胞和内皮细胞的胞浆中表达 .结果表明 ,成功制备了兔抗人FRG4抗体 ,FRG4蛋白主要在细胞胞浆中表达 。
- 杨向东王仁刘俊文屈顺林郭芳王蕾盛树力
