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湖北省卫生厅青年科技人才基金(QJX2010-24)

作品数：2 被引量：2H指数：1
相关作者：李蓓江玲王发兴张波范金明更多>>
相关机构：湖北医药学院更多>>
发文基金：湖北省卫生厅青年科技人才基金教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇免疫
  • 2篇免疫原性
  • 1篇蛋白
  • 1篇毒力
  • 1篇疫苗
  • 1篇原性
  • 1篇转录
  • 1篇转录因子
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞免疫
  • 1篇细胞免疫原性
  • 1篇相关调控因子
  • 1篇分泌系统
  • 1篇杆菌
  • 1篇布鲁杆菌
  • 1篇布鲁氏菌

机构

  • 2篇湖北医药学院

作者

  • 2篇李蓓
  • 1篇李云静
  • 1篇谭华炳
  • 1篇李芳
  • 1篇雷飞飞
  • 1篇李金科
  • 1篇范金明
  • 1篇张波
  • 1篇王发兴
  • 1篇江玲

传媒

  • 1篇中国病原生物...
  • 1篇中华地方病学...

年份

  • 2篇2013
共 2 条 记 录，以下是 1-2
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排序方式：
布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9免疫原性检测被引量：1
2013年
目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，异丙基-13-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导重组VirB9蛋白在大肠埃希菌中的表达。利用重组VirB9蛋白所携带的His标签，通过Ni—NAT层析，纯化在大肠杆菌中重组表达的VirB9蛋白．再通过十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）电泳和二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒对纯化的蛋白进行纯度及浓度检测。用布鲁杆菌疫苗株S19株免疫BALB／c小鼠，并以磷酸盐缓冲液（PBS）为对照。在免疫4周后，鼠尾取血，血清虎红平板凝集试验、试管凝集试验检查小鼠血清抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测$19株免疫小鼠体内抗VirB9抗体滴度。在免疫后第35天，取小鼠脾脏，分离脾细胞，利用Elispot技术，检测VirB9蛋白体外再刺激后分泌细胞因子（干扰素-1，IFN-1）的脾细胞数，酶联斑点图像仪计数斑点，每个斑点代表1个抗原特异性T淋巴细胞，分析VirB9刺激机体产生细胞免疫反应的情况。结果通过酶切克隆的方法成功地将VirB9全长基因741bp克隆至pET32a载体上。SDS—PAGE显示，VirB9蛋白的相对分子质量约43×103，纯度超过97％；BCA法检测，蛋白浓度为1．6异／L。免疫组小鼠血清虎红平板凝集试验阳性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度〉1：800；对照组小鼠血清虎红平板凝集试验阴性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度阴性。免疫组检测到抗VirB9蛋白抗体，抗体滴度均〉1：3200，对照组小鼠体内未检测到抗VirB9蛋白抗体的存在。酶联斑点图像分析显示，用VirB9蛋白体外刺激，免疫组小鼠5×10s个脾细胞中有147个细胞可以分泌IFN-r�
范金明王发兴张波江玲李蓓
关键词：布鲁杆菌免疫原性疫苗
布鲁氏菌部分毒力相关调控因子免疫原性检测与保护性评价被引量：1
2013年
目的检测部分布鲁氏菌毒力相关调控因子刺激机体产生细胞免疫反应的能力,并对具有细胞免疫原性蛋白的免疫保护性进行初步评价。方法利用Gateway的方法将9个布鲁氏菌毒力相关转录调控因子克隆至表达载体pHXGWA上并利用Ni-NAT层析的方法纯化重组蛋白。构建布鲁氏菌疫苗株S19株免疫的BALB/c小鼠模型,免疫35d后分离小鼠脾细胞并用体外重组蛋白再刺激,ELISA方法检测蛋白体再刺激后小鼠脾细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平,了解毒力相关调控因子刺激机体产生细胞免疫反应情况。以CpG-ODN为免疫佐剂,用具有细胞免疫活性蛋白免疫小鼠,观察对布鲁氏菌强毒株544攻击感染的免疫保护作用。结果 7个布鲁氏菌毒力相关调控因子在大肠埃希菌中得以表达。其中BMEⅠ1573及BMEⅡ0475再刺激下S19免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ水平高于PBS对照小鼠。而在以CpG-ODN为免疫佐剂时,两者均不具有免疫保护性。结论布鲁氏菌LysR家族及GntR家族的转录因子BMEⅠ1573及BMEⅡ0475具有细胞免疫原性,初步检测无免疫保护作用。
雷飞飞李云静李金科李芳李蓓谭华炳
关键词：布鲁氏菌转录因子细胞免疫原性
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