四川省应用基础研究计划项目(2008JY0015)
- 作品数：15 被引量：38H指数：4
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- Ucf-101对窒息新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究Omi/HtrA2丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂Ucf-101对窒息新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法选择7～10日龄Wistar大鼠45只,其中30只置于容积为55mL缺氧瓶中(内装0.005kg钠石灰),待动物安静后,塞紧瓶塞,制作新生大鼠常压窒息模型。对照组模拟该过程,不塞瓶塞。造模后的大鼠随机分为窒息组(15只)、Ucf-101组(15只)、对照组(15只)。Ucf-101用量为1.5μmol.kg-1,在窒息前10min腹腔注射。窒息组及对照组在相同时间点注射等量9g.L-1盐水。窒息组及Ucf-101组密闭30min后复氧,在复氧2h、24h、48h时断颈处死后取左肾,制作石蜡切片,采用原位细胞凋亡TUNEL法检测窒息后2h、24h、48h新生大鼠左肾凋亡细胞的形态及数量变化。结果新生大鼠窒息后不同时间点肾脏皮质、髓质均有凋亡细胞分布,多数为肾小管上皮细胞,细胞核呈棕褐色,形态不一;窒息组复氧后2h,肾皮质开始出现大量的TUNEL染色阳性细胞,24h凋亡细胞数达高峰,48h凋亡细胞数有所下降;窒息组各时间点凋亡细胞数与对照组比较均显著增加(Pa<0.05)。对照组凋亡细胞数未见明显增加,各时间点无统计学差异。与窒息组比较,Ucf-101组各个时间点凋亡细胞数均明显减少(Pa<0.01)。结论窒息后新生大鼠肾细胞凋亡显著增高,且具有时间依赖性,同时凋亡参与肾损伤过程,Ucf-101能明显抑制凋亡发生。细胞凋亡是窒息后新生大鼠肾损伤的重要机制。
- 花兵董文斌李清平冯志强余鸿翟雪松雷小平
- 关键词：窒息肾损伤细胞凋亡
- 促红细胞生成素对窒息新生儿血清诱导人肾小管细胞TLR4/MyD88表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对新生儿窒息后血清诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)TLR4/MyD88(Toll-like receptors 4/myeloid differentiation factor 88)表达的影响。方法将HK-2分为对照组、窒息组、EPO组,每组12份,分别检测TLR4和MyD88表达情况。对照组加入DMEM/F12培养液,窒息组加入含200 ml/L新生儿窒息后血清的DMEM/F12培养液,EPO组加入含50 IU/ml的EPO培养液预处理后再加入含200 ml/L新生儿窒息后血清的DMEM/F12培养液。其余培养条件3个实验组完全相同,即在37℃、50 ml/L CO2培养箱中培养24 h后,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测各组细胞TLR4特异性荧光抗体阳性结合率;免疫组织化学法(SP法)检测各组细胞MyD88表达情况。结果与对照组比较,窒息组细胞形态变化显著,TLR4特异性荧光抗体阳性结合率和MyD88的表达明显增加;与窒息组比较,EPO组细胞形态明显改善,TLR4特异性荧光抗体阳性结合率和MyD88的表达明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 EPO可减少新生儿窒息后血清诱导的人肾小管上皮细胞TLR4/MyD88的表达。
- 孙凤杰董文斌李清平翟雪松雷小平熊涛陈枫
- 关键词：促红细胞生成素新生儿窒息肾损伤
- 复方丹参注射液对缺氧/复氧HK-2细胞损伤保护机制的研究被引量：7
- 2013年
- 目的探讨复方丹参注射液对缺氧复氧(H/R)所致人近曲肾小管上皮细胞损伤的保护作用及相关机制。方法将体外培养的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为对照组﹑H/R组及丹参干预组,然后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测细胞内Cytc蛋白表达变化。结果①倒置相差显微镜下对照组细胞形态正常;H/R组细胞形态出现凋亡相关改变;而丹参干预组细胞形态变化较H/R组减轻,但仍未恢复至对照组水平。②与对照组比较,H/R组细胞凋亡率显著增加,而丹参干预组细胞凋亡率较H/R组下降,但仍较对照组增加,其差异均有显著性(P均<0.05)。③与对照组比较,H/R组和丹参干预组细胞内Cytc表达均显著升高(P<0.05),而丹参干预组Cytc表达水平又显著低于H/R组(P<0.05)。结论丹参对缺氧复氧损伤肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能与降低Cytc表达从而抑制细胞凋亡相关。
- 邹礼乐王巧稚彭柯雷小平董文斌
- 关键词：丹参缺氧复氧细胞色素C肾小管上皮细胞
- 新生儿窒息后血清对人肾近曲小管上皮细胞线粒体膜通透性的影响
- 2015年
- 目的研究新生儿窒息后血清对人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)线粒体膜通透性的影响。方法以人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,实验共分为:正常对照组、窒息组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。以20%窒息后24小时血清作为攻击浓度。用四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)检测HK-2细胞线粒体膜电位变化;Western blot测HK-2细胞内线粒体中CytC的释放情况。结果 1经窒息血清攻击后HK-2细胞线粒体膜红/绿荧光强度比值(590/530nm)明显降低(P<0.01),但有了PDTC干预,HK-2细胞线粒体膜红/绿荧光强度比值明显升高(P<0.01)。2正常组HK-2细胞的胞浆中不含细胞色素C,主要存在于线粒体内,窒息组胞浆中细胞色素C从线粒体漏出较对照组明显增加,相应的在线粒体内表达减少,差异有统计学意义(P<0.05);PDTC干预组胞浆中细胞色素C表达也有所增加,但大部分仍位于线粒体内,与窒息组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿窒息后血清可影响人HK-2细胞线粒体膜通透性,使线粒体膜电位下降,膜间隙蛋白如细胞色素C等漏出。其胞内信号机制涉及到NF-κB活化。
- 赵婧董文斌李鹏云王明勇邓存良许开桂
- 关键词：窒息线粒体肾损伤核因子-ΚB
- 二氮嗪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤时线粒体凋亡途径的影响被引量：13
- 2010年
- 目的研究二氮嗪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤时线粒体凋亡途径的影响。方法取培养好的HK-2细胞，接种于6孔板中，分为对照组、窒息组、二氮嗪组。以体积分数为20％的新生儿窒息后24h血清作为攻击血清；以终浓度100mol／L的二氮嗪进行干预。采用免疫组化法检测细胞内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达；激光共聚焦显微镜下观察间接免疫荧光双染色Omi／HtrA2在细胞内的转位和线粒体膜电位的变化。结果与对照组相比，窒息组HK-2细胞内caspase-3表达的吸光度（A）值明显增加（25．19±3．33比13．63±1．89，P〈0．01），Omi／HtrA2转位率明显升高[（56．01±5．30）％比（37．59±5．60）％，P〈o．01]，线粒体膜红／绿荧光强度比值明显降低（o．79士1．42比1．82±0．23，P〈0．01）；与窒息组相比，二氮嗪组HK-2细胞caspase-3表达的4值（20．17±2．19）明显降低，Omi／HtrA2转位率（（46．91±2．70）％]明显降低，线粒体膜红／绿荧光强度比值（1．47±0．14）明显增加，但均未恢复至对照组水平（均P〈0．01）。结论二氮嗪通过减少Omi／HtrA2在胞内转位、减少caspase-3表达、稳定线粒体膜电位，从而明显减轻新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞损伤。
- 刘喜娟董文斌李清平雷小平翟雪松熊涛邓存良陈枫
- 关键词：窒息血清二氮嗪OMI/HTRA2
- Omi/HtrA2在缺氧复氧后人近曲肾小管上皮细胞中的表达及促红细胞生成素对其表达的影响
- 2012年
- 目的探讨缺氧复氧(H/R)后人近曲肾小管上皮细胞内Omi/HtrA2的表达变化及促红细胞生成素(EPO)干预的影响。方法以人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)为研究对象,将其分为对照组、H/R组及EPO干预组。对照组常规培养;H/R组缺氧24 h后复氧6 h;EPO干预组在H/R前加入5 000 U.L-1EPO预处理。倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学检测细胞内Omi/HtrA2表达变化。结果与对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞形态发生改变,细胞活力下降,细胞凋亡率显著增加,细胞内Omi/HtrA2表达增强,差异均有统计学意义(Pa<0.05);而与H/R组相比,EPO干预组细胞数量增多,细胞形态明显改善,细胞活力增加,细胞凋亡率下降,Omi/HtrA2表达减弱,差异均有统计学意义(Pa<0.05),但各指标均未恢复至对照组水平。结论 H/R可通过上调Omi/HtrA2表达而促进肾小管上皮细胞凋亡,EPO对H/R肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能与抑制Omi/HtrA2表达、减少细胞凋亡有关。
- 邹礼乐徐富翠梅欣明雷小平董文斌
- 关键词：缺氧复氧OMI/HTRA2促红细胞生成素肾小管上皮细胞凋亡
- Na^+/H^+交换器-1在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤中的作用被引量：1
- 2008年
- 目的探讨Na+/H+交换器-1(NHE1)在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的作用。方法以HK-2为研究对象,以200 mL/L新生儿窒息后血清作为攻击因素处理HK-2细胞。首先将实验分为2组:对照组和窒息组,通过免疫组织化学方法检测其HK-2细胞在损伤前后胞内NHE1的表达;再分为3组:对照组、窒息组和5-N-乙基-N-异丙基-阿米洛利(EIPA)干预组(每组8个复孔)。倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HK-2细胞活力,生物化学法检测细胞培养液中LDH漏出率变化。结果与对照组比较,窒息组细胞内和细胞膜上NHE1表达明显增加;与对照组比较,窒息组细胞形态发生改变;窒息组细胞的活细胞数量较对照组明显降低;LDH漏出率明显升高,差异具有显著性意义(Pa=0);与窒息组细胞比较,EIPA干预组细胞形态明显得到改善,活细胞数量明显增加,LDH漏出率降低,差异具有显著性意义(Pa=0)。结论新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞NHE1的表达增强可能是导致HK-2损伤的重要机制之一,通过抑制NHE1活性可使细胞损伤减轻,活性增强。
- 陈亮董文斌李清平邓存良陈枫雷小平熊涛
- 关键词：窒息血清肾小管上皮细胞肾损伤
- Omi／HtrA2在窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞凋亡中的作用被引量：2
- 2009年
- 目的研究Omi／HtrA2在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡时的作用机制。方法以HK-2细胞为研究对象，实验分为空白对照组、窒息组、Ucf-101（Omi／HtrA2的特异性阻断剂）干预组。以体积分数为20％的窒息后24h血清作为攻击血清，以终浓度为10μmol／L的Ucf-101对窒息组进行干预。用激光共聚焦显微镜观测Omi／HtrA2在胞内的转位状况，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果窒息血清攻击后，Omi／HtrA2由线粒体转位到胞质中，阳性转位细胞率较空白对照组明显增加[（28．1±3．6）％比（9．4±2．1）％，P〈0．01]。与空白对照组比较，窒息组细胞凋亡率明显增加（（36．3±4．4）％比（12．4±2．9）％，P〈0．01]。与窒息组比较，干预组细胞凋亡率明显减少[（27．0±3．9）%比（36．3±4．4）％，P〈0．01]。结论窒息后新生儿血清诱导HK-2细胞凋亡，Omi／HtrA2由线粒体转位到线粒体外，在其胞内凋亡信号转导过程中占有重要作用。
- 张勇董文斌李清平邓存良熊涛雷小平郭琳
- 关键词：窒息血清OMI/HTRA2转位
- 新生大鼠窒息后肾组织Omi/HtrA2表达及Ucf-101干预效果被引量：5
- 2010年
- 目的探讨Omi/HtrA2在新生鼠窒息后肾组织的变化及Ucf-101的干预作用。方法将72只7～10dWistar大鼠随机分为对照组、窒息组和Ucf-101组。窒息组和Ucf-101组大鼠制成常压窒息模型。在窒息30min后复氧2、24、48h时采用免疫组化法检测各组肾组织中Omi/HtrA2的表达。采用TUNEL法检测肾凋亡细胞的形态及数量变化。结果窒息复氧后2hOmi/HtrA2表达开始增强,于24h达最高峰,随后有所下降。与窒息组相比,Ucf-101组各个时相点Omi/HtrA2的表达阳性率明显降低(P<0.01)。窒息复氧后2h,肾组织开始出现肾小管上皮细胞凋亡,24h凋亡细胞数达到高峰,而Ucf-101组各个时相点凋亡指数较窒息组均有明显减少。结论新生大鼠窒息后肾组织Omi/HtrA2表达增强,参与肾损伤;Ucf-101可使Omi/HtrA2的表达下降,从而抑制肾小管上皮细胞凋亡。
- 花兵董文斌李清平冯志强余鸿翟雪松雷小平
- 关键词：窒息肾损伤OMI/HTRA2新生大鼠
- 黄芪减轻窒息后血清诱导HK-2细胞黏附中性粒细胞的作用及机制被引量：2
- 2009年
- 目的研究黄芪减轻新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞黏附中性粒细胞的作用及信号转导机制。方法以HK-2细胞为研究对象,实验细胞分为对照、窒息和黄芪干预组3组,用含20%(体积比)窒息后血清作为攻击因素。采用倒置相差显微镜下观察HK-2细胞损伤及黏附中性粒细胞的情况,用生化法检测细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性;采用流式细胞术检测细胞间黏附因子-1(ICAM-l)的表达情况。结果与对照组比较,窒息组HK-2细胞黏附较多中性粒细胞(MPO活性增加),ICAM-1表达增加,差异有统计学意义(P均<0.05);与窒息组比较,黄芪干预组HK-2细胞黏附中性粒细胞较少(MPO活性下降),ICAM-1表达减少,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论黄芪具有减轻窒息后血清诱导HK-2细胞黏附中性粒细胞的作用,其机制可能与抑制HK-2细胞表面ICAM-1表达有关。
- 杨洪宇董文斌李清平雷小平熊涛邓存良陈枫
- 关键词：窒息肾小管上皮细胞髓过氧化物酶细胞间黏附因子-1
