国家自然科学基金(30970626)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 小鼠DHRS4基因原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 目的:构建小鼠pDESTTM17/DHRS4重组载体,制备小鼠抗DHRS4多克隆抗体。方法:应用RT-PCR从小鼠肝组织扩增DHRS4的开放阅读框序列,测序确认后将其编码区构建到载体pDONRTM201上,再通过LR置换反应再将其置换到载体pDESTTM17上,测序后转化到E.coliBL21-AI工程菌中,并经阿拉伯糖诱导表达出抗DHRS4融合蛋白。以小鼠融合蛋白作为免疫原免疫大白兔,制备小鼠抗DHRS4多克隆抗体。结果:成功构建小鼠DHRS4重组载体;转化重组质粒的E.coliBL21-AI经阿拉伯糖诱导4 h后高效表达DHRS4融合蛋白;Western bolt实验结果显示制备的多克隆抗体可特异性检测小鼠肝组织DHRS4相应蛋白的表达。结论:成功构建小鼠pDESTTM17/DHRS4原核表达载体和获得小鼠抗DHRS4多克隆抗体。
- 张廷银闫银侠黄东阳
- 关键词：基因克隆蛋白表达多克隆抗体
- 人肝癌细胞辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的鉴定和分析
- 2010年
- 目的:鉴定人肝癌细胞HepG2中辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)的选择性剪接新亚型DHRS4L1A1,并检测其在不同细胞中的表达情况。方法:采用快速cDNA末端扩增方法,从HepG2中克隆选择性剪接亚型的cDNA序列;通过查找开放阅读框架,预测并分析剪接新亚型的蛋白质序列和功能;用半定量RT-PCR法检测8种不同细胞株中新剪接亚型的相对表达量。结果:DHRS4L1A1全长1 117 bp,为NRDR选择性剪接新亚型;该亚型在卵巢癌细胞SKOV3中的表达量显著高于其他细胞。结论:DHRS4L1A1表达的蛋白属于SDR家族,该亚型可能参与生殖系统相关酶类的代谢。
- 钱程刘婷闫银侠宋旭红黄东阳
- 关键词：选择性剪接HEPG2细胞
- DHRS4基因簇缺失型神经母细胞瘤细胞株的克隆和鉴定
- 2011年
- 目的单克隆培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y-细胞株,并鉴定其在基因水平缺失DHRS4基因簇,包括DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1的基因序列。方法有限稀释法培养实验室偶得的低表达DHRS4基因的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,相差显微镜观察细胞的生长和增殖,PCR、RT-PCR检测DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1基因的DNA和RNA含量,Westernblotting检测DHRS4蛋白的表达。结果筛选得到单克隆神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,在DNA、RNA和蛋白水平均未检测到DHRS4基因簇的DNA序列及表达产物。结论经过克隆低表达DHRS4基因簇的SH-SY5Y细胞,得到纯系的DHRS4基因簇缺失的SH-SY5Y-细胞株,该细胞对于进一步研究DHRS4基因簇的功能和表达调控都是难得的细胞模型。
- 苏中静刘戈飞宋旭红陈海滨常晓兰黄东阳
- 关键词：基因缺失
- DHRS4L1基因选择性剪接亚型的克隆及分析被引量：2
- 2011年
- 目的检测分析DHRS4基因簇新命名基因DHRS4L1的RNA选择性剪接亚型和转录特点,并预测其功能。方法 cDNA末端快速扩增克隆DHRS4L1转录本剪接亚型的全长序列,Jellyfish软件比对RNA亚型的外显子组成,RNAStructure和在线开放读码框预测其二级结构和蛋白编码功能,定量PCR检测DHRS4L1剪接亚型在不同细胞系中的表达水平。结果在人神经母细胞瘤细胞克隆得到3个DHRS4L1RNA剪接亚型的全长序列,它们具有相对稳定的二级结构,开放读码框短并且缺乏真核生物的翻译起始位点。定量PCR检测显示DHRS4L1在肝细胞表达高,在神经母细胞瘤和睾丸细胞中表达较低。结论 DHRS4L1转录产物存在不同长度的剪接亚型,它们可能不是蛋白的编码序列,而是作为非编码RNA参与其它基因的表达调控。
- 苏中静陈海滨宋旭红刘戈飞李奇王瑞俭黄东阳
- 关键词：选择性剪接转录人神经母细胞瘤
