国家自然科学基金(31372199)
- 作品数：14 被引量：27H指数：3
- 相关作者：梁爱华李峰胡风云付月君王软林更多>>
- 相关机构：山西大学山西省人民医院中国医学科学院基础医学研究所更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 八肋游仆虫组织蛋白酶B基因家族的分子克隆及序列分析
- 2019年
- 组织蛋白酶B (cathepsin B, CTSB)是一种主要存在于溶酶体中的半胱氨酸蛋白水解酶,广泛存在于各种生物中。为了研究八肋游仆虫组织蛋白酶B (Euplotes octocarinatus Cathepsin B, EoCTSB)基因的序列、结构和功能,本研究利用生物信息学方法,对八肋游仆虫组织蛋白酶B基因进行了系统分析。利用相似性搜索及系统进化分析,共鉴定得到6个EoCTSBs基因。转录组数据及3′RACE分析结果表明这6个基因均具有转录活性。通过与其他真核生物的组织蛋白酶B比较,结果显示,6种EoCTSBs均含有保守的肽链内切酶催化活性位点,但都缺失封闭环结构,因此推测它们都没有外肽酶活性;仅EoCTSB-6的S2亚位为酸性氨基酸残基,暗示其具有催化特异性底物Z-Arg-Arg-AMC水解的活性。本研究为后续深入探讨EoCTSB的生物学功能提供理论依据。
- 刘婧妮宋建英王软林梁爱华
- 关键词：八肋游仆虫组织蛋白酶B
- 八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白P1有2个亚型被引量：3
- 2015年
- 真核生物酸性核糖体磷酸化蛋白(P0、P1、P2)位于核糖体60S大亚基上,它们在核糖体上共同组成一个向外侧凸出的五聚体的柄状复合物[P0·(P1·P2)2],该复合物在蛋白质合成延伸过程中起着重要作用.为了探讨单细胞真核生物核糖体柄状复合物的组成形式及在蛋白质合成中的作用,对八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)的P1进行了研究.通过生物信息学方法,分析八肋游仆虫基因组及转录组数据,找到2个酸性核糖体蛋白P1基因,从DNA和c DNA中都扩增到这2个P1基因,表明八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白P1确实存在2个亚型.将2个基因克隆后分别构建重组表达质粒p ET28a-P1A和p GEX-6P-1-P1B,在大肠杆菌BL21中获得高效表达.经镍柱和GST柱亲和层析后,获得较高纯度的八肋游仆虫酸性核糖体蛋白Eo P1A和Eo P1B,表达产物经Western印迹检测为阳性.Pull-down分析了Eo P1A和Eo P1B之间的相互作用.结果表明,游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白P1的2个亚型Eo P1A和Eo P1B之间存在相互作用.
- 佘梅王软林张志云梁爱华
- 关键词：八肋游仆虫基因克隆表达纯化
- 杆状病毒AcMNPV介导BmK IT的表达促进草地夜蛾卵巢Sf9细胞凋亡及病毒在细胞内的复制(英文)被引量：4
- 2015年
- 昆虫杆状病毒是一类寄生于节肢动物的囊膜包裹的双链环状DNA,杆状病毒作为新型生物杀虫剂逐渐应用于害虫防治。BmK IT是一种从东亚钳蝎分离出来的昆虫毒素,可以与昆虫细胞膜的钠离子通道相互作用,引起钠离子通道动作电位重复发放,并增强钠电流峰值,延缓钠传导关闭,使昆虫产生兴奋性麻痹。为了提高杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)杀虫活性,本研究将BmK IT基因插入到AcMNPV基因组中,形成重组杆状病毒AcMNPV-BmK IT。采用MTT法、TUNEL试剂、Western blot、real-time PCR及病毒滴度测定来检测AcMNPVBmK IT对草地夜蛾卵巢细胞Sf9发生凋亡及病毒在Sf9细胞内的复制情况。结果显示AcMNPV介导BmK IT的表达促进了Sf9细胞凋亡及病毒复制。此结果为揭示重组病毒AcMNPV-BmK IT的抗虫机制提供了实验依据。
- 付月君赵洁梁爱华胡风云
- 关键词：ACMNPVBMKSF9细胞
- 八肋游仆虫氨酰-tRNA合成酶基因序列分析
- 2017年
- 氨酰-tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetase,aaRS)是蛋白质生物合成中的关键酶,能够催化特定的氨基酸和相应tRNA结合。为了研究八肋游仆虫氨酰-tRNA合成酶(Euplotes octocarinatus aminoacyl-tRNA synthetase,EoaaRS)基因的种类、数目、结构及起源,本研究利用生物信息学方法,对八肋游仆虫大核基因组编码的aaRS进行了系统分析。结果表明,八肋游仆虫大核基因组共包含45个aaRS基因,可编码20种不同的aaRS蛋白。其中,Eo GlnRS和Eo AlaRS仅由1个基因编码,其余EoaaRS均由多个基因编码。亚细胞定位分析显示,仅8个EoaaRS具有线粒体导肽,对应于6种EoaaRS。此外,基于核酸序列分析显示,多个EoaaRS在翻译过程中需要发生编程性核糖体移码,才能形成结构完整的蛋白质产物。结构域分析表明,部分EoaaRS存在特殊结构域,暗示其可能具有氨酰化以外的新功能。进化分析揭示,2个Eo GlyRS起源于古菌,而2个Eo LysRS起源于细菌。本研究为后续探讨低等真核生物aaRS的结构与功能奠定了基础。
- 宋建英王软林梁爱华
- 关键词：八肋游仆虫氨酰-TRNA合成酶
- 八肋游仆虫微管蛋白基因家族的鉴定及进化分析被引量：1
- 2021年
- 为了系统分析八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)微管蛋白基因家族,从八肋游仆虫大核基因组中共鉴定得到20个微管蛋白基因,基于同源比对及系统进化分析,将其归入α、β、γ、δ、ε及η六个微管蛋白亚家族;多序列比对及Western blot结果显示八肋游仆虫η微管蛋白基因在翻译过程中需发生一次+1位编程性核糖体移码,其移码位点为AAA-TAA;所有自由生纤毛虫都含有多个α和β微管蛋白基因亚型,可能用于组成不同的微管结构。研究为后续深入探讨八肋游仆虫微管蛋白的生物学功能及微管多样性奠定了基础。
- 王软林肖羽李佳梁爱华
- 关键词：八肋游仆虫微管蛋白系统进化分析
- 八肋游仆虫胞质核糖体蛋白基因序列特征分析
- 2017年
- 为了探讨八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)核糖体蛋白基因的数目及其结构的特殊性,研究通过生物信息学方法,对八肋游仆虫胞质核糖体蛋白进行了系统的分析。共鉴定得到98个基因编码78种不同的胞质核糖体蛋白。其中19种胞质核糖体蛋白基因发生了复制,尽管都是有功能的,但其中一个基因的表达受到限制。通过与高等真核生物比较,我们发现:八肋游仆虫核糖体蛋白eS30缺失了N端的类泛素结构域,eL6缺失了N端的Ribosomal_L6e_N结构域。另外,不同于其他高等真核生物,八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白uL 10为碱性蛋白。研究为进一步探讨低等真核生物核糖体的组装及功能奠定了基础。
- 王软林赵雪梅张志云梁爱华
- 关键词：八肋游仆虫核糖体蛋白
- miR-760对胃癌细胞系MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响被引量：6
- 2016年
- 目的探讨miR-760对胃癌细胞系MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响。方法 Real-time PCR分析50例胃癌组织(C)及其癌旁(N)中miR-760的表达水平;用pc DNA3.1载体构建过表达miR-760的重组质粒(pc DNA-miR-760),实现miR-760在MGC-803细胞中的过表达;分别用CCK-8法、Transwell和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果与癌旁对照组相比,36例(72%)胃癌组织中出现miR-760的表达下调;过表达miR-760能显著抑制MGC-803细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),但对其增殖影响不大。结论 miR-760的表达下调可能与胃癌的进展有关,过表达miR-760可以抑制胃癌MGC-803细胞的迁移和侵袭。
- 李峰王芳梁爱华
- 关键词：胃癌增殖迁移
- 沉默ABCE1对神经胶质瘤细胞U251增殖、迁移和凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 三磷酸腺苷结合盒蛋白E1(ABCE1)是ATP结合盒蛋白亚家族成员之一,在病毒感染、细胞增殖、抗凋亡、翻译起始和核糖体生物发生等过程中发挥重要作用。为了探讨ABCE1对神经胶质瘤细胞U251增殖、迁移和凋亡的作用,本研究通过实时荧光定量PCR和免疫印迹实验,检测ABCE1在神经胶质瘤细胞和正常胶质细胞中的mRNA和蛋白质表达水平。结果显示,ABCE1在神经胶质瘤细胞U251中的表达高于在正常胶质细胞中的表达。利用siRNA靶向沉默ABCE1后,在神经胶质瘤细胞U251中,ABCE1 mRNA和蛋白质的表达水平均显著减少,细胞的凋亡率显著提高,细胞增殖和迁移明显受到抑制,而且细胞对化疗药物替莫唑胺的敏感性增强。此外,沉默ABCE1后使Bcl-2的mRNA和蛋白质表达水平显著下调,而Bax的mRNA和蛋白质表达水平显著上调。以上结果表明,ABCE1与神经胶质瘤细胞的增殖和迁移密切相关,通过siRNA靶向沉默ABCE1基因,可显著降低U251细胞的增殖和迁移能力。
- 薛欢鸽张志云付月君杜军梁爱华
- 关键词：神经胶质瘤增殖凋亡替莫唑胺
- 芽孢杆菌植酸酶phy(ycD)基因在大肠杆菌中的异源表达与纯化被引量：4
- 2014年
- 为研究中性植酸酶的性质,将芽孢杆菌来源植酸酶基因phy(ycD)构建到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上,进行诱导表达,利用Ni-NAT和Superdex-75纯化后,对重组植酸酶r-phy(ycD)的性质进行分析.结果显示,该酶是Ca2+依赖性酶,Ca2+最适浓度为1 mmol/L,酶比活为4.7 U/mg,酶促反应的最适pH为6.5,在中性条件下稳定,最适反应温度为45℃,K m值和V max值分别为0.213 mmol/L和5.55 U/mg.Zn2+、Ni2+、Ba2+和Ag2+对酶促反应均有显著抑制作用.本研究表明,Ca2+对该类酶的活性和热稳定性起着关键性作用,因此在表达和纯化过程中需要在培养基和纯化所需的各类缓冲液中添加Ca2+.
- 王茜卢文亮姚明泽胡风云付月君梁爱华
- 关键词：中性植酸酶酶学性质
- 滑动序列对游仆虫中识别+1位和+2位编程性核糖体移码具有关键作用被引量：1
- 2020年
- 编程性核糖体移码(programmed ribosomal frameshifting,PRF)广泛存在于生命进化谱系的各个分支,是一种翻译水平上的基因表达调控方式。单细胞真核生物游仆虫(Euplotes)中不仅PRF基因比例高,而且移码类型有+1和+2位两种。本研究从基因组水平对八肋游仆虫(E.octocarinatus)中的+2 PRF基因进行了鉴定,比较分析+1及+2 PRF基因中可能的调控元件。为了探讨游仆虫中滑动序列对移码类型的影响,克隆了八肋游仆虫的+1 PRF基因——η微管蛋白基因,将其构建到含绿色荧光蛋白报告基因的游仆虫大核人工染色体中,转染游仆虫细胞,通过检测GFP的表达来确定不同滑动序列突变体对应的移码类型。结果表明,滑动序列的改变能使游仆虫+1 PRF转变为+2 PRF,且这种移码类型的改变与滑动序列第1个密码子编码何种氨基酸无关。本研究揭示了滑动序列对游仆虫中识别+1和+2位的编程性核糖体移码具有关键作用。
- 肖羽王软林杜军张志云柴宝峰梁爱华
- 关键词：游仆虫
