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hdll1^(ext)-Fc融合蛋白真核表达载体的构建及表达被引量：3: 2004年; 目的 :构建人dll1ext(humandelta like1extracellularregion) Fc融合蛋白的真核表达载体pEF BOSneo hdll1ext Fc,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :从人脑cDNA文库中PCR扩增人delta like1胞外段 ,通过DNA重组构建真核表达载体 pEF BOSneo hdll1ext Fc。瞬时转染COS 7细胞 ,应用RT PCR、细胞免疫荧光技术和双抗体夹心ELISA ,检测融合蛋白的表达。结果 :成功地构建了真核表达载体 pEF BOSneo hdll1ext Fc。以重组载体转染COS 7细胞后 ,RT PCR结果显示delta like1胞外段与IgG1Fc在mRNA水平正确拼接 ;细胞免疫荧光染色呈阳性反应 ;夹心ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论 :成功地扩增了人delta like1胞外段 ,构建了 pEF BOSneo hdll1ext Fc真核表达载体 ,并在COS 7细胞中获得表达。; 张萍贾洪霞周鹏韩骅; 关键词：融合蛋白基因克隆真核表达

MINT蛋白(1-365氨基酸)相互作用分子的筛选被引量：1: 2003年; 目的 :用酵母双杂交技术筛选与MINT(Msx2 in teractingnucleartargetprotein) F1片段相互作用的分子 ,对MINT转录抑制的机制进行探讨 .方法 :以Mint F1片段 (1～ 36 5氨基酸残基 )连入载体pGBKT7构建的质粒为诱饵 ,利用酵母双杂交技术对人淋巴结cDNA文库进行筛选 ,并分析所获得的阳性克隆 .结果 :从 6× 1 0 7个克隆中共获得 1 2个不重复的阳性克隆 .经序列分析 ,得到 3个有意义的基因 ,分别为人小核RNA 蛋白复合体多肽G(SNRPG)、癌基因Vav和人微球蛋白 1 (MCRS1 ) .结论 :从筛选到的这 3个分子的定位与功能来看 ,MINT分子的N端片段可以与小核RNA 蛋白复合体 (snRNPs) ,Vav,MCRS1和RBP Jκ等相互作用 ,参与细胞内的信号传递 ,调控细胞周期。; 周鹏李军锋秦红韩骅; 关键词：MINT 酵母双杂交

小鼠EVL基因的克隆和真核表达载体的构建: 2012年; 目的:构建小鼠EVL(Ena/VASP like)基因的真核表达载体,为深入研究EVL的功能奠定基础。方法:采用PCR方法,从小鼠cDNA文库中,扩增出1245bp的EVL编码区片段,经电泳、胶回收后连接入pMD-18T载体中,测序鉴定正确。用BamH I和HincII双酶切,定向克隆EVL编码区片段到真核表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒正确后。将重组质粒转染入HELA细胞中,以RT-PCR检测EVL的mRNA的表达,以Western Blot检测EVL蛋白的表达。结果:酶切鉴定结果显示小鼠EVL编码区基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1中;RT-PCR和Western Blot结果以及免疫荧光染色显示Hela细胞中有EVL的mRNA和蛋白的表达。结论:成功获得pcDNA3.1-EVL的真核表达载体,为进一步深入研究EVL蛋白的功能奠定了基础。; 邹海韩骅高方曹秀丽徐骁; 关键词：基因克隆真核表达

核基质MINT N端片段(365～1084aa)相互作用蛋白的筛选及鉴定: 2004年; 目的 :确定核蛋白MINT(Msx2 interactingnucleartargetProtein)的功能及作用机制 .方法 :利用酵母双杂交的方法 ,以MINTN端第 36 5～ 1 0 84位氨基酸 (MINT F2 )为诱饵用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9日的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 1 .0× 1 0 8个酵母克隆进行营养筛选和 β 半乳糖苷酶筛选 ,获得 1 2 8个阳性克隆 .并提取质粒进行酶切鉴定 ,将获得的 4个非重复克隆并进行序列分析 .结果 :筛选出 4个与MINT F2相互作用的蛋白 ,它们分别是 :6 7ku层黏连蛋白受体 ,,2个 1 6S核糖体RNA ,精氨酰 tRNA合成酶 .结论 :成功筛选出与MINT F2相互作用的蛋白。; 秦红孙强周鹏李军锋韩骅罗晓星; 关键词：NOTCH信号途径

PTD-Cyclin D1融合蛋白的原核表达及纯化: 2004年; 目的 :构建融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白 .方法 :通过PCR方法扩增出CyclinD1基因 ,克隆入 pMD 18T载体 ,进行测序分析 ,将该基因亚克隆入原核表达载体pET 16b中PTD的下游构建重组质粒pET16b PTD CCND1,转化感受态细胞BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,对表达产物进行SDS PAGE电泳和Westernblot检测分析 .结果 :构建了重组融合表达质粒 pET16b PTD CCND1,表达的融合蛋白经SDS PAGE分析 ,在约Mr38× 10 3 处出现了一条新生的蛋白条带 ,经灰度扫描检测 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 2 % ,纯化后得到了目的蛋白 .结论 :成功地克隆了小鼠的CyclinD1基因并纯化了融合基因PTD CCND1的原核表达产物 .; 祝仰廷邹练梁英民韩骅; 关键词：细胞周期蛋白D1 基因克隆蛋白纯化

hJagged1^(ext)-Fc融合蛋白真核表达载体的构建和表达被引量：2: 2004年; 目的 :构建含人Jagged1胞外段 IgFc融合基因片段的质粒 ,并在真核细胞中表达。方法 :从人骨髓细胞中用RT PCR扩增hJagged1基因的胞外段。经DNA测序后 ,将hJagged1基因的胞外段插入改造过的质粒pBluescriptskⅡ中 ,获得hJagged1ext Fc融合基因。将融合基因插入真核表达载体pEF BOSneo ,构建真核表达载体pEF BOSneo hJagged1ext Fc。以其瞬时转染COS7细胞 ,应用RT PCR、细胞免疫荧光技术 ,及夹心ELISA检测融合蛋白的表达。结果 :hJagged1基因的胞外段被有效地扩增。DNA序列分析表明 ,所构建的含hJagged1ext Fc融合基因的质粒与设计相同 ,hJagged1ext Fc融合蛋白得到正确表达。结论 :成功地构建了hJagged1ext Fc融合基因的真核表达载体 ,并在真核细胞中正确表达 ,为进一步研究Jagged1在造血干 /祖细胞的体外扩增奠定了基础。; 贾洪霞张萍周鹏李军锋韩骅梁英民; 关键词：NOTCH JAGGED1 融合蛋白

HPC2基因与宫颈癌关系的研究被引量：3: 2004年; 目的 :研究宫颈癌的发生与HPC2基因的关系 .方法 :利用PCR方法 ,以宫颈癌组织和Hela细胞基因组DNA为模板扩增人HPC2基因片段 ,将此基因片段插入pGEM Teasy载体 ,限制性内切酶酶切鉴定 ,测定序列 .结果 :从宫颈癌组织和Hela细胞中成功扩增了HPC2基因 ,Blast分析发现其C端一段保守序列具有多态性 .结论; 秦鸿雁王林杨红韩骅; 关键词：克隆分子宫颈肿瘤

核基质MINTC端片段(2226-2959)相互作用分子的筛选与鉴定被引量：2: 2003年; 目的 :为了研究MINT的功能及其转录抑制的机制 ,筛选与MINT相互作用的蛋白 .方法 :以MINT第 2 2 2 6 2 95 9氨基酸 (F5 )为诱饵 ,用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9d的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 4 .5× 1 0 6个酵母克隆进行了营养筛选和α 半乳糖苷酶筛选 ,获得 5 1个阳性克隆 .从中提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 1 0个非重复克隆 ,对此 1 0个克隆进行序列分析 .结果 :筛选到的 3个基因分别为MINT ,α 晶状体蛋白结合蛋白 1 (AlphaA CRYBP1 )和核受体辅抑制因子 1 (N CoR1 ) .在酵母中分析了N CoR1与MINT的作用区段 ,N CoR1与MINT的 2 2 2 6 2 95 9和 2 96 0 35 76两个片段均有相互作用 .结论 :①MINT在细胞内可能形成二聚或多聚体 ;②除了RBP J和MSX2外 ,MINT还可能调节AlphaA CRYBP1的活性 ;③MINT可能通过N CoR1募集组蛋白去乙酰化酶 (HDAC); 李军锋周鹏秦红韩骅; 关键词：MINT

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国家自然科学基金(30200148)