江苏省自然科学基金(2007709)
- 作品数：8 被引量：22H指数：2
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- 整合素连接激酶与肾脏病变研究进展被引量：1
- 2009年
- 戴厚永刘必成
- 关键词：整合素连接激酶足细胞系膜细胞肾间质纤维化
- 糖尿病肾病诊断生物标志物研究新进展被引量：11
- 2010年
- 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病主要的微血管并发症。长期以来,DN早期诊断临床上主要依赖微量白蛋白尿(microalbuminuria,Malb)的测定,但作为DN诊断生物标志物(biomarker)其特异性和对疾病严重程度的预测价值受到质疑。所以人们不断寻求DN诊断的新标志物,包括尿IgG和IgM、nephrin mRNA、Smad1及尿液炎症标志物。尽管目前已经发现许多具有潜在价值的DN诊断生物标志物,但其对DN进展的预测价值尚未经过循证医学实验验证。
- 杨莉亚刘必成
- 关键词：糖尿病肾病生物标志物蛋白质组学
- 慢性肾脏病生物标志物及其检测研究进展被引量：2
- 2009年
- 一、生物标志物的定义
生物标志物首先是在1989年作为医学主题词被提出来的，当时定义为“可测量和定量的生物学参数”。2001年，美国国立卫生研究院（NIH）对生物标志物的定义进行了规范，定义为通过客观检测和评价能够预示正常生理、病理过程或机体对药物治疗反应的所有生物学特性川。能够从患者身上检测到的任何参数都可以成为生物标志物，比如mRNA表达谱、各种蛋白质、蛋白质组、脂类、影像学检查或者电信号。
- 王丽梅吕林莉刘必成
- 关键词：生物标志物慢性肾脏病药物治疗反应蛋白质组生物学参数生物学特性
- 基于直接标记法尿微量白蛋白检测抗体微阵列的构建
- 2009年
- 目的探讨基于直接标记法的尿微量白蛋白检测抗体微阵列（也称抗体芯片）构建方法，并评价其技术可行性。方法通过玻片处理、活化、固定等程序构建白蛋白抗体芯片。摸索用生物素标记标准品白蛋白及尿液样本的最佳条件。经封闭后加入生物素标记的标准品白蛋白，孵育，洗涤后加入链酶亲和素-Cy3，再经过孵育、洗涤后，用共聚焦激光扫描仪获取荧光强度值。根据不同浓度标准品白蛋白的荧光信号强度值做出浓度-信号强度曲线，并评价其检测灵敏度、特异性、重复性。收集临床糖尿病患者尿液标本，对尿液样本同时行免疫比浊法和抗体芯片法检测白蛋白值。结果生物素标记标准品白蛋白和样本的最佳总蛋白／生物素质量比为2：1。根据标准品白蛋白所做出的标准曲线其R^2〉0．99；捕获抗体浓度为1g／L时，最低白蛋白检测浓度为0．0617mg／L。阵列内变异系数为3．35％～7．59％；阵列间变异系数为6．78％～9．22％。抗体芯片检测值与免疫比浊法检测值呈正相关（R^2=0．9199，P〈0．01）。结论成功构建基于直接标记法的抗体芯片，其具有简单、快速、高效、高灵敏度和重复性好等特点；具有开发应用于微量白蛋白尿大规模人群筛查的潜力。
- 王丽梅刘必成吕林莉朱颖蔡珂丹郑敏
- 关键词：白蛋白尿芯片分析技术抗体免疫比浊法
- 基于直接标记法抗体微阵列的初步构建被引量：1
- 2009年
- 目的:初步构建基于直接标记法的抗体微阵列,并评价其应用于临床的可能性。方法:选择白蛋白作为目标蛋白,通过琼脂糖铺片、玻片活化、机器点样、点样后固定等步骤构建抗体微阵列,经封闭非特异位点、标记抗原、加样后对白蛋白进行检测,对关键步骤——抗原标记进行最佳条件摸索,通过对临床标本的检测评价其潜在应用价值。结果:应用BCA蛋白定量试剂盒测定尿液样本总蛋白浓度做出的标准曲线,其R2均大于0.99;温度为37℃时抗原标记效果最佳;标记后抗原存放1周对信号的影响无统计学意义(P<0.01);本方法能够检测出临床检测为阴性的尿微量白蛋白浓度。结论:本研究构建了基于直接标记法的抗体微阵列,并对关键的抗原标记环节进行了最佳工作条件优化,有应用于临床检测的潜力。
- 王丽梅刘必成吕林莉郑敏
- 2型糖尿病肾病患者血清脂联素水平的变化被引量：6
- 2009年
- 目的:观察2型糖尿病肾病(DN)患者血清脂联素(adiponectin,ADPN)水平变化及其临床意义。方法:正常对照组(NC)10例;2型糖尿病患者53例,根据尿白蛋白排泄率(UAER)及血清肌酐(SCr)水平分成糖尿病组(DM,UAER<30mg/g,SCr<132.6μmol/L)、糖尿病肾病组(DN1,≥30mg/g,SCr<132.6μmol/L)和晚期糖尿病肾病组(DN2,UAER≥300mg/g,SCr>132.6μmol/L);应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组血清中的ADPN、可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)水平。结果:DN2组的血清ADPN水平高于NC组、DM组和DN1组(P<0.05);DN1组的ADPN高于NC组和DM组,但无统计学差异;DM组的ADPN水平低于NC组,但无统计学差异。sVCAM-1在NC组、DM组、DN1组和DN2组依次逐渐增高。相关分析显示ADPN与尿酸(UA)、SCr、肾小球滤过率(eGFR)呈显著相关关系(P<0.05),多元逐步回归分析显示SCr是ADPN的独立相关因素(决定系数为r2=0.265,β=3.130,P<0.01)。无论在研究对象总体还是糖尿病患者中,ADPN与sVCAM-1均呈正相关性(相关系数分别为0.331,P<0.01;0.316,P<0.05)结论:2型糖尿病肾病患者血清ADPN水平升高可能与肾功能减退有关,血清ADPN升高可能参与了糖尿病肾病患者的内皮功能损害机制。
- 蔡珂丹闫蕾孙子林李玲张晓良刘必成
- 关键词：糖尿病肾病脂联素
- 血管紧张素Ⅱ介导高糖诱导的人主动脉内皮细胞转分化被引量：1
- 2011年
- 目的探讨高糖对内皮细胞转分化的影响及其与血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)的关系。方法将人主动脉内皮细胞分成正常浓度葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组和厄贝沙坦干预(HG+Irb)组。放射免疫法检测细胞上清液中ATⅡ的浓度。共聚焦显微镜观察CD31和成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)的双染色结果。Western blot检测FSP1蛋白水平的表达。结果与NG组比,高糖刺激的内皮细胞导致ATⅡ和FSP1表达增加(P<0.05),呈浓度和时间依赖性。共聚焦显微镜可见CD31和FSP1表达重叠,且一些细胞获得纺锤样的改变并失去CD31染色。厄贝沙坦可抑制高糖引起的上述改变(P<0.05)。结论高糖可能通过ATⅡ介导的内皮细胞转分化导致内皮细胞损伤,而厄贝沙坦抑制内皮细胞转分化。
- 汤日宁戴厚永李青吕林莉张建东马坤岭刘必成
- 关键词：高糖厄贝沙坦
- 尿液mRNA检测在肾脏病中的应用
- 2010年
- 郑敏刘必成
- 关键词：肾脏疾病MRNA尿液
