国家自然科学基金(30400374)
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 相关作者：黄爱龙唐霓张君赖梅梅陈维贤更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院重庆医科大学第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒受体的研究进展被引量：4
- 2006年
- 乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus,HBV)感染是当前严重的全球健康问题之一,对慢性乙型肝炎至今仍缺乏有效的控制手段和彻底的解决方案,HBV与肝细胞之间相互作用分子机制的研究进展相对滞后是严重影响新型治疗方法和药物研发的重要原因之一。病毒与细胞受体的结合是病毒感染宿主细胞的第一步,它决定病毒能否成功感染细胞,具有特别重要的意义。病毒表面具有“细胞识别蛋白”,在宿主细胞表面则有相应的靶细胞受体。病毒侵入特定细胞的首要步骤是病毒颗粒与其宿主细胞表面受体特异性相互作用。已有的研究表明,HBV具有严格的宿主易感性和嗜肝细胞性,感染早期存在于HBV外膜的抗原特定肽段与肝细胞上特异受体识别并结合,介导病毒进入细胞,启动HBV的复制周期。因此病毒的受体是HBV进入肝细胞的门户,阻断HBV与其受体的结合是治疗乙型肝炎的重要途径之一。迄今为止,多数病毒与其细胞受体的关系得到了鉴定,对HBV虽然报道了很多可能起作用的受体,但至今仍无法确定到底是什么受体起关键作用。本文就HBV的受体研究进展作一综述。
- 张君唐霓黄爱龙
- 关键词：乙型肝炎病毒受体
- HBV前S2蛋白的研究进展被引量：5
- 2008年
- 随着现代分子生物学和病毒基因工程技术的广泛应用,有关乙型肝炎病毒颗粒表面的preS2蛋白的研究己取得了较大进展。本文综述了近年来有关研究的成果,重点对preS2的基因结构、生物学功能及临床诊断意义等方面的进展进行讨论。
- 赖梅梅郑建
- 关键词：乙型肝炎病毒前S2
- 乙型肝炎病毒PreS1基因的原核表达及免疫学性质鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体,获得高纯度、有生物活性的PreS1重组蛋白。方法采用PCR法扩增PreS1及其N末端和C末端部分基因序列,克隆入原核表达载体pGST-MOLUC。重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测。用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶亲和层析纯化的重组融合蛋白免疫新西兰家兔,制备GST-PreS1融合蛋白的抗血清。进一步用ELISA分析融合蛋白特异抑制HBV病毒与抗体结合的能力。结果重组质粒转化宿主菌后成功诱导出Mr39000、31000和32000的GST-PreS1、GST-PreS1N及GST-PreS1C融合蛋白,均与预期相对分子质量相符。Western blot检测获得特异的杂交条带。采用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶纯化的融合蛋白纯度约为90%左右。融合蛋白免疫家兔后抗体滴度达到10-7。病毒捕获ELISA实验表明,融合蛋白能特异抑制病毒与家兔免疫血清结合。结论GST-PreS1融合蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,其纯化产物是研究PreS1基因在HBV感染过程中作用的有用工具。
- 张君慕生枝陈维贤黄英黄爱龙唐霓
- 关键词：乙型肝炎病毒原核表达
- 重组抗原CP_4-EPSPS的表达及免疫学活性研究被引量：4
- 2006年
- 目的:表达并纯化重组CP4-EPSP合成酶(CP4-EPSPS),研究重组CP4-EPSPS的免疫学活性;为进一步制备单克隆抗体和开发检测CP4-EPSPS的快速诊断试剂奠定基础。方法:诱导表达含转基因大豆CP4-EPSPS的重组载体pET-EPSPS,经Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化,以ELISA、胶体金试条、W estern杂交鉴定其免疫活性。结果:重组CP4-EPSPS以包涵体表达为主,上清表达量极低,但胶体金试纸条检测发现上清中CP4-EPSPS抗原活性强;复性包涵体的抗原性与上清的抗原性明显不同。采用扩大培养量、缩小超声破碎重悬体积的方法,从上清中纯化CP4-EPSPS获得成功,ELISA检测此重组抗原免疫小鼠血清抗体滴度可达到1:625,000;W estern杂交证实重组抗原免疫血清与CP4-EPSPS标准品有较好的免疫反应性。结论:包涵体的简单复性方法难以恢复其关键的抗原决定簇的免疫原性;运用胶体金试纸条检测重组CP4-EPSPS活性,灵敏度高,简单快捷,对CP4-EPSPS特异检测相关的关键性抗原决定簇的甄别有重要作用,可指导重组抗原的纯化和在免疫学研究、特别是在单克隆抗体开发中的应用。
- 唐霓Yu XiangHelen KeZhihui Yao敬凌霞黄爱龙郑建
- 关键词：纯化
- HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上。Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白。结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb。
- 赖梅梅王雪梅张君蔡雪飞郑健黄爱龙
- 关键词：乙肝病毒前S2蛋白单克隆抗体生物学特性
- 抗HBsAg单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定
- 2008年
- 目的：制备分泌抗HBVS蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定其特性，为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础。方法：以重组乙肝疫苗免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株，利用间接ELISA技术和Western blot进行单抗特异性的鉴定，同时采用间接ELISA方法鉴定mAb的Ig亚类，检测mAb的效价及相对亲和力。结果：获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞4D2，其抗体亚类为IgG1型，腹水效价为1：106，相对亲和力在10^5以上。结论：成功地制备出抗HBVS蛋白的单克隆抗体，为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具。
- 王雪梅赖梅梅张晓丽张祯祯陈婧张君黄爱龙
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- TLM细胞渗透性的研究进展
- 2007年
- 近年来，一些具有细胞膜穿透能力的多肽相继被发现，如HIV—I的转录活化因子（Trans—activating transcriptional activator，Tat），transportan，VP-22等。它们可穿过细胞膜进入细胞质，而细胞膜却完好无损。在乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvirus，HBV）表面蛋白前S区发现的TLM是一种新的具有细胞渗透性的肽序列，能携带外源性生物学分子如多肽、寡核苷酸、
- 王雪梅黄爱龙
- 关键词：ACTIVATOR转录活化因子细胞膜表面蛋白寡核苷酸
- RNA干扰技术抑制内源性绿色荧光蛋白的表达
- 2005年
- 目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞株;构建短发夹RNA(shRNA)表达质粒并观察其对内源性GFP的抑制作用。方法转染pEGFP-N1至HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定表达GFP的细胞株(HepG2.GFP);设计合成针对GFP基因的siRNA对应的DNA片段,插入转录载体pTZU6+1,构建shRNA表达载体pSHGFP,转染HepG2.GFP,荧光显微镜观察细胞荧光强度,以western blot检测GFP蛋白水平,以RT-PCR检测mRNA水平。结果利用PCR方法从HepG2.GFP细胞基因组DNA中检测到GFP基因;pSHGFP能够显著抑制该细胞中GFP的表达。结论GFP基因成功整合至HepG2细胞基因组中,pSHGFP能够显著抑制内源性GFP的表达,该系统能够用于RNA干扰机制等研究中。
- 陈维贤黄爱龙闫歌唐霓张娟陈娟
- 关键词：RNA干扰绿色荧光蛋白短发夹状RNA
- HCV 5′UTR调控GFP真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建丙型肝炎病毒5′非翻译区（HCV 5′UTR）调控绿色荧光蛋白真核表达质粒，并在HepG2细胞中表达。方法通过PCR扩增，获得HCV基因组HCV 5′UTR完整序列及C区序列的部分基因片断。将此片断插入pEGFP-NI载体多克隆位点区，构建受HCV 5′UTR调控的绿色荧光蛋白真核表达质粒．应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察荧光。结果成功构建受HCV 5′UTR调控的绿色荧光蛋白真核表达质粒，并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。结论该载体的成功构建，可以用于直观地评价针对HCV 5′UTR的基因药物的效果。
- 陈维贤张娟张君黄英唐霓黄爱龙
- 关键词：绿色荧光蛋白HEPG2细胞
