广东省自然科学基金(10151051501000038)
- 作品数：12 被引量：20H指数：3
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- JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD-L1表达的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨脂多糖(LPS)刺激脐静脉内皮细胞表达程序性死亡因子配体1(PD-L1)与C-JUN氨基末端激酶(JNK)信号通路的关系。方法体外培养脐静脉内皮细胞,按2×107/ml种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分成阴性对照组、LPS组及SP600125+LPS组,其中阴性对照组不加干预因素;LPS组先用DMSO(0.1%V/V)作用1h,再用LPS(1.0μg/ml)刺激24h;SP600125+LPS组先用SP600125(20μmol/L)作用1h后再用LPS刺激24h,Western-blot测定各组PD-L1及P-JNK蛋白表达。结果 SP600125+LPS组PD-L1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);而SP600125+LPS组和对照组PD-L1蛋白表达与LPS组比较均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。SP600125+LPS组细胞P-JNK蛋白表达与对照组和LPS组比较均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS可能通过JNK信号通路调控脐静脉内皮细胞表达PD-L1。
- 龙日刘映峰严全能吕自明缪绯梁欣伟
- 关键词：JNK信号通路SP600125脐静脉内皮细胞
- TNF-α对人脐静脉内皮细胞活性及PD-L1蛋白表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究外源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性及程序性死亡因子配体PD-L1蛋白表达的影响,探讨动脉粥样硬化的免疫机制。方法体外培养HUVECs,加入不同浓度TNF-α持续刺激48h,CCK-8法检测450nm波长处吸光度值(OD值),计算细胞生长存活率。选同代细胞重复培养并干预,Westernblot方法检测细胞PD-L1蛋白表达。使用SB203580阻断p38MAPK通路后再用TNF-α干预HUVECs,比较各组细胞PD-L1蛋白表达。结果实验组HUVECs在450nm波长处的吸光度值较空白对照组明显降低(P<0.05),细胞存活率依次下降。实验组细胞PD-L1蛋白表达随TNF-α浓度增高逐渐降低(P<0.05)。TNF-α单独刺激组PD-L1蛋白表达较TNF-α与SB203580共刺激组明显降低(P<0.05),SB203580阻断效应明显。结论 TNF-α可明显抑制HUVECs细胞活性,并降低PD-L1蛋白表达,p38MAPK通路可能参与了这一过程。
- 吕自明刘映峰缪绯龙日刘芃刘磊
- 关键词：肿瘤坏死因子ΑPD-L1P38MAPK脐静脉内皮细胞
- p38MAPK通路调控树突状细胞表达PD-L1的实验研究
- 2012年
- 目的探讨脂多糖刺激单核细胞源树突状细胞表达程序性死亡因子配体1(PD-L1)与p38MAPK信号通路的关系。方法体外培养树突状细胞,用p38抑制剂SB203580阻断p38MAPK通路后再用LPS刺激树突状细胞。光学显微镜观察各组细胞的形态变化;流式细胞术测定CD86和PD-L1表达的平均荧光强度;Western blot测定PD-L1蛋白表达。结果光镜下观察LPS刺激组细胞先经历梭型贴壁后逐渐恢复圆形,树突较多;SB203580和LPS共同刺激组细胞树突退化,未刺激组细胞成团悬浮,树突较多。SB203580和LPS共同刺激组细胞CD86、PD-L1较LPS刺激组的明显降低(P<0.05或P<0.01),与未刺激组的相比CD86差异无统计学意义,但PD-L1降低(P<0.05)。SB203580和LPS共同刺激组细胞PD-L1的蛋白表达量较其它两组的均明显减少(P<0.01或P<0.01)。结论 LPS通过p38MAPK信号通路调控树突状细胞表达PD-L1。
- 何阳胜申健刘芃缪绯吴志坚刘映峰
- 关键词：P38信号通路树突状细胞
- 冠心病患者外周血调节性T细胞及程序性死亡受体-1表达的意义
- 2012年
- 目的:通过观察冠心病患者调节性T细胞(Tregs)和树突状细胞(DCs)数量和程序性死亡受体-1(PD-1)及其配体(PD-L1)的表达变化,探讨其功能状态,为动脉粥样硬化及不稳定斑块形成的病因及免疫疗法提供思路。方法:入选冠心病患者39例,其中稳定型心绞痛(SA)23例、急性冠状动脉综合征(ACS)16例;20例非冠心病患者为对照组。采用流式细胞术测定各组外周血CD4+CD25hi CD127low PD-1+Treg数量和CD11c+PD-L1+DC数量;用ELISA法测定血清IL-2水平。结果:外周血Treg数量在ACS组、SA组和对照组间差异无统计学意义;ACS组Treg PD-1表达率和DC、PD-L1表达率与SA组和对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PD-1/PD-L1表达下调提示Treg和DC免疫抑制功能缺陷,可能是促进动脉粥样硬化病变进展及不稳定斑块形成的因素。
- 申健何阳胜张瑞环张魏巍刘芃缪绯刘映峰
- 关键词：急性冠状动脉综合征程序性死亡受体-1共刺激分子调节性T细胞
- 促红细胞生成素对缺氧复氧心肌细胞caspase-3表达及Omi/HtrA2转位变化和Omi/HtrA2沉默时对其的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察促红细胞生成素(EPO)及/或进一步沉默Omi/HtrA2表达时对缺氧复氧(H/R)心肌细胞的影响,探索相关抗细胞凋亡机制。方法培养乳鼠心肌细胞株(H9C2细胞),分组(对照组、H/R组及各浓度的EPO干预组)处理后,酶标仪检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率,Western blot检测细胞内cleaved caspase-3、Omi/HtrA2蛋白表达变化;并观察Omi/HtrA2在胞质和线粒体的表达变化(转位情况)。再经脂质体法将Omi/HtrA2特异性siRNA干扰片段转染至H9C2细胞中,RT-PCR和Western blot验证siRNA对Omi/HtrA2表达的沉默效应后,分组同前干预,分别检测各组细胞LDH释放率及cleaved caspase-3表达变化。结果与H/R组相比,EPO干预组细胞上清液LDH释放减少,cleaved caspase-3表达减弱;H/R组Omi/HtrA2蛋白表达在胞质中表达较对照组增多(向胞质发生转位),而EPO(20IU/mL)组其胞质转位减少。经siRNA干扰后,与H/R组相比,LDH释放降低,cleaved caspase-3表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EPO可能通过减少Omi/HtrA2蛋白的转位,抑制caspases-3通路激活,而发挥细胞保护作用。
- 张杰波刘映峰缪绯刘芃
- 关键词：缺氧复氧OMI/HTRA2
- 缺氧后适应与心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及机制探讨被引量：4
- 2013年
- 目的探讨缺血后适应与心肌营养素-1(CT-1)对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及其机制。方法将体外培养的H9C2细胞株分为正常对照组(a组)、缺氧复氧组(b组)、缺氧复氧+缺氧后适应组(c组)、缺氧复氧+缺氧后适应+CT-1组(d组)、缺氧复氧+缺氧后适应+CT-1+ERK抑制剂组(e组)、缺氧复氧+缺氧后适应+CT-1+二甲基亚砜组(f组),MTS法检测各组细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测细胞外调节激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达、Q-PCR检测Bad mRNA的表达。结果与a组比较,其他各组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA和p-ERK1/2(除外e组)表达量增加,P均<0.05;与b组比较,c组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,Bad mRNA表达、凋亡率下降,P均<0.05;与c组比较,d组细胞存活率、pERK1/2表达量均增加,细胞Bad mRNA表达、凋亡率下降(P均<0.05);与d组比较,e组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA表达量增加,p-ERK1/2表达量下降;d、e组各项指标指标比较差异无统计学意义。结论缺氧后适应可减少心肌细胞缺氧复氧损伤,联合CT-1后保护作用明显加强,而ERK1/2抑制剂可阻断这种保护作用;该保护机制可能与CT-1激活ERK1/2信号通路,下调Bad mRNA的表达有关。
- 周贻军赵亚男赵鑫缪绯王先宝颜竞张秀丽刘映峰杨平珍
- 关键词：心肌缺血再灌注损伤心肌营养素-1细胞外信号调节激酶BAD
- PD-1/PD-L信号通路:研究现况与展望被引量：4
- 2011年
- 程序性死亡受体-1(programmed cell death-1,PD-1)及其配体(PD-L1,PD-L2)是CD28/B7超家族成员,广泛表达于各种组织。PD-1/PD-L共刺激信号视机体的炎症程度、免疫状态和遗传背景不同而激活或抑制,主要参与T细胞的中枢及外周免疫耐受。与其他CD28超家族成员相比,PD-1信号通路发挥着更广泛和复杂的免疫调节作用,与自身免疫病、肿瘤、慢性感染及炎症密切相关。因此,能否通过PD-1/PD-L信号通路来调节自身免疫状态,从而治疗相关疾病,成为人们研究的热点。本文将对近年来的研究做一总结。
- 申健刘芃刘映峰马骊
- 关键词：PD-1共刺激分子信号转导T细胞免疫调节
- 心肌营养素-1预处理减轻缺氧复氧对心肌细胞损伤的机制研究
- 2014年
- 目的观察心肌营养素-1(CT-1)预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型细胞损伤、凋亡及血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响,进一步探讨其心肌保护机制。方法选择H9C2大鼠心肌细胞株,实验分为对照组、缺氧复氧组(H2/R24组)、各浓度CT-1预处理组,酶标仪检测细胞上清中LDH释放率,RT-qPCR检测HO-1 mRNA,Western Bolt检测活Cleaved Caspase3及HO-1蛋白。设计合成靶向HO-1的特异性siRNA片段,通过脂质体转染至H9C2细胞中,48 h后给予CT-1预处理及缺氧复氧(si-HO-1组)并重复检查HO-1 mRNA及蛋白的表达、LDH释放率、Cleaved Caspase3表达验证干扰效果。结果与H2/R24组相比,各浓度CT-1预处理组细胞上清LDH释放率下降,Cleaved Caspase3表达减少,而HO-1 mRNA及蛋白表达水平与H2/R24相比均明显增加。经siRNA干扰后,si-HO-1组HO-1表达水平与对照组相当,较H2/R24组、CT-1组则明显减少;而LDH释放率、Cleaved Caspase3蛋白表达较H2/R24组下降,而较CT-1组升高。结论 CT-1能通过上调HO-1表达,减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。
- 李志聪游伟缪绯杨天潇刘映峰
- 关键词：心肌细胞缺氧复氧损伤心肌营养素-1血红素加氧酶-1
- 缺血后适应中心肌营养素1对心肌细胞的保护作用研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨心肌营养素1(CT-1)在缺血后适应中对心肌细胞的保护作用机制及参与的信号通路。方法选择H9C2乳鼠心肌细胞株,实验分为对照组、缺氧复氧组、缺氧后适应组、缺氧后适应+CT-1组、缺氧后适应+CT-1+Akt阻断剂组、缺氧后适应+CT-1+二甲基亚砜组,MTS法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western-blot检测Akt蛋白表达,Q-PCR检测BadmRNA的表达。结果缺氧复氧组较对照组细胞凋亡率明显增加,存活率降低,缺氧后适应组细胞比缺氧复氧组凋亡率低,存活率增加,缺氧后适应+CT-1组细胞比缺氧后适应组凋亡率进一步降低,存活率进一步增加,Akt磷酸化蛋白水平明显升高,BadmRNA表达下调,加入Akt阻滞剂(A6730)后,这种保护作用被抑制。结论心肌营养素1参与激活Akt信号通路协同缺氧后适应减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤,对心肌细胞起保护作用。
- 赵鑫缪绯周贻军刘映峰
- 关键词：心肌细胞缺血后适应心肌营养素1AKT信号通路
- 细菌脂多糖对人树突状细胞分化成熟及表达PD-L1的影响及意义被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对树突状细胞分化、成熟及表达PD-L1的影响。方法:获取人外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC),加入不同浓度LPS,流式细胞仪分析CD11c、CD80、CD86及PD-L1表达变化,MTT法测定其刺激T细胞增殖能力,ELISA测定培养上清液IL-12的水平。结果:DC表达CD80/CD86在刺激浓度为10μg/mL时达高峰,后逐渐下降;PD-L1的表达与CD80/CD86一致;而在持续刺激组CD11c、CD80、CD86和PD-L1均呈低水平表达。短期刺激浓度为1.0μg/mL时,DC刺激T细胞增殖能力最强,高于或低于此浓度刺激能力均下降。持续刺激组刺激T细胞增殖的能力最弱。培养上清液中IL-12的水平与T细胞增殖能力一致。结论:高浓度LPS可抑制DC成熟,一定浓度持续刺激可抑制单核细胞向DC分化;PD-L1分子随着DC成熟表达增高,提示PD-L1表达有助于维持适度而有效的免疫应答。
- 申健何阳胜张魏巍张瑞环刘芃缪绯刘映峰
- 关键词：树突状细胞共刺激分子脂多糖PD-L1
