浙江省自然科学基金(LY13H260003)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
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- 亚慢性苯吸入小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与甲基化状态分析被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨亚慢性苯暴露小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与启动子甲基化状态。方法:C57BL/6J雄性小鼠亚慢性动式吸入苯,暴露浓度分别为0 ppm(对照组)、1 ppm(低浓度组)和100 ppm(高浓度组)。收集骨髓细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Survivin、Bcl2L13基因的表达,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术(MALDI-TOF)测定基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果:与对照组比较,苯暴露组的细胞凋亡比例明显增大(P<0.01),低浓度组S期细胞比例增加,高浓度组S期和G2/M期细胞的比例均显著降低。低浓度组Survivin mRNA表达下降,高浓度组Survivin、Bcl2L13 mRNA表达均显著降低。两基因启动子区CpG岛均呈低甲基化状态,其甲基化水平未受苯暴露影响。结论:亚慢性苯吸入染毒影响小鼠骨髓细胞周期,增加细胞凋亡,降低Survivin、Bcl2L13 mRNA的表达,但不影响其基因启动子的甲基化状态。
- 林冲刘政于秀远彭春华张亚亚覃琼玉朱华杨新军闫洪涛
- 关键词：苯骨髓细胞小鼠
- 活性氧在1,4-苯醌诱导的线粒体自噬中的作用被引量：2
- 2018年
- 目的探讨苯的代谢产物1,4-苯醌(1,4-BQ)能否活化PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,以及活性氧(ROS)在线粒体自噬发生中的作用。方法以人早幼粒白血病细胞HL60为受试细胞,将其分为对照组、1,4-BQ组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组和1,4-BQ+NAC组。采用透射电镜观察细胞超微结构,采用蛋白免疫印迹法检测自噬蛋白LC3、PINK1和Parkin表达,采用DCFH-DA染色法测定胞内ROS含量。结果对照组细胞线粒体呈正常杆状结构,嵴线分明;1,4-BQ组可见呈椭圆肿胀变形的线粒体和包含双层膜性结构的线粒体自噬体。与对照组比较,1,4-BQ组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、PINK1、Parkin蛋白表达和ROS含量均增加(P<0.05);1,4-BQ+NAC组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、PINK1、Parkin蛋白表达和ROS含量均低于1,4-BQ组(P<0.05)。结论 1,4-BQ可诱导PINK1/Parkin途径的线粒体自噬,且ROS在诱导的线粒体自噬中起重要作用。
- 张春晓高家昊张倩倩覃琼玉杨新军闫洪涛
- 关键词：苯线粒体自噬活性氧
- 亚慢性苯吸入染毒致小鼠骨髓细胞全基因组甲基化差异基因的筛查
- 目的 目前已有苯暴露导致一些特定基因甲基化变异的研究报道,但对全基因组启动子区甲基化的变化模式缺乏全面了解.本研究应用高通量甲基化芯片技术,比较不同浓度苯暴露下小鼠骨髓细胞全基因组启动子区甲基化状态,筛查甲基化差异基因,...
- 林冲纪思思刘子巍张积太杨新军闫洪涛
- 1，4-苯醌诱导HL60细胞自噬及活性氧在自噬发生中的作用被引量：7
- 2016年
- 目的研究1，4苯醌（1，4-BQ）能否诱导HL60细胞发生自噬以及活性氧（ROS）在自噬发生中的作用。方法CCK8法检测不同浓度1，4-BQ对HL60细胞的毒性作用，并据此选择观察细胞自噬效应的适宜染毒浓度。将对数生长期细胞分为对照组、1，4-BQ染毒组（10μmol／L1，4-BQ染毒24h）、N．乙酰半胱氨酸（NAC）组（5mmol／LNAC处理24h）和1，4-BQ＋NAC干预组（5mmol／LNAC干预1h后加10μmol／L1，4-BQ处理24h）。吖啶橙染色检测自噬酸性囊泡，免疫荧光染色法定性检测自噬蛋白LC3的表达定位，蛋白免疫印迹法定量检测LC3和Beclin1的蛋白表达。结果HL60细胞活力随着1，4-BQ浓度增加而逐渐下降，呈剂量一反应关系，与对照组比较，20．0、40．0μmol／L染毒组HL60细胞存活率明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，1，4-BQ染毒组自噬酸性囊泡增多；免疫荧光定性检测结果显示，膜型LC3II蛋白表达增加。蛋白免疫印迹结果显示，1，4-BQ染毒组LC3和Beclin1蛋白表达增加，分别比对照组增加了12．4％和27％，差异有统计学意义（P〈0．05）。与1，4-BQ染毒组比较，1，4-BQ＋NAC干预组自噬酸性囊泡明显减少，LC3和Beclin1蛋白表达下降，分别比1，4-BQ组下降了12．6％和22．6％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论1，4-BQ可诱导HL60细胞发生自噬，其诱导的自噬至少部分来源于ROS途径，抗氧化剂可有效抑制自噬的发生。
- 覃琼玉张亚亚孙书强朱华杨新军闫洪涛
- 关键词：苯醌自噬
- 亚慢性低浓度苯暴露对小鼠精子活力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨亚慢性低浓度苯暴露对小鼠精子活力的影响。方法 C57BL/6J雄性小鼠随机分成对照组(0 mg/m3)、低剂量组(3 mg/m3)和高剂量组(300 mg/m3),每组12只,实施亚慢性动式吸入染毒,IVOS精子动力分析仪测定精子活力。结果与对照组比较,高剂量组小鼠体重和睾丸重量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),睾丸脏器系数未见明显改变;低剂量组体重、睾丸重量和睾丸脏器系数等方面,差异无统计学意义(P>0.05)。但低剂量组小鼠精子直线运动速度(VSL)、前向性(STR)、直线性(LIN)和鞭打频率(BCF)均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组精子密度、活动率、平均路径速度(VAP)、曲线运动速度(VCL)、VSL、LIN及STR均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组精子活动率(P<0.05);精子头长比(Elon)和侧摆幅度(ALH)在各组中,差异无统计学意义(P>0.05)。结论即使是在3 mg/m3的低浓度苯暴露下仍能导致小鼠精子活力下降。
- 刘政刘子巍林冲于秀远彭春华胥新芸朱华杨新军闫洪涛
- 关键词：苯精子小鼠
- 外泌体分泌在1,4-苯醌诱导的HL-60细胞凋亡中起保护作用被引量：1
- 2020年
- 慢性苯暴露损害造血系统,可引起再生障碍性贫血,甚至白血病。外泌体(exosomes)是细胞分泌的纳米级膜泡,在许多生理和病理过程中发挥重要作用。然而,苯及其代谢产物对外泌体分泌的影响仍不清楚。本研究旨在观察苯的活性代谢产物1,4-苯醌(1,4-benzoquinone,1,4-BQ)能否引起人早幼粒白血病细胞HL-60外泌体分泌量的变化以及外泌体释放在1,4-BQ诱导的细胞凋亡中的作用。应用不同浓度1,4-BQ处理细胞24 h,超高速离心法提取细胞培养基中的外泌体,结果发现1,4-BQ能促进外泌体分泌,呈剂量反应关系。进一步应用外泌体抑制剂GW4869抑制外泌体分泌,流式细胞仪检测细胞凋亡率、蛋白质免疫印迹法检测抑凋亡蛋白质Bcl-2、凋亡通路关键蛋白质cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达,探讨外泌体分泌对1,4-BQ所致细胞凋亡的影响。结果显示:与对照组相比,1,4-BQ单独处理组的凋亡率、Bcl-2、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达均显著增高(P<0.05),而1,4-BQ+GW4869组的凋亡率及凋亡相关蛋白质的表达均显著高于1,4-BQ单独处理组(P<0.05),表明抑制外泌体分泌可增加1,4-BQ诱导的细胞凋亡。综上表明,1,4-BQ能促进外泌体分泌,并在1,4-BQ诱导的细胞凋亡中起保护作用。本研究为了解苯的毒性效应和毒性机制提供了新的实验证据。
- 张倩倩张梦妍陆方方高家昊杨新军闫洪涛
- 关键词：苯外泌体细胞凋亡HL-60细胞
- 亚慢性苯吸入暴露抑制小鼠单倍体精子核蛋白基因的表达被引量：2
- 2016年
- 目的：探讨苯对小鼠精子生成损伤的主要阶段。方法：6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠,按体质量随机分为3组,对照组、1 ppm和100 ppm苯暴露组,模拟职业暴露情况,实施每天8 h,每周5 d,共13周的亚慢性动式吸入染毒。HE染色观察睾丸组织病理学改变。选取精子发生中阶段特异性表达基因作为不同阶段精子的marker,选定的marker基因有代表未分化型精原细胞的Plzf,分化型精原细胞的Stra8,初级精母细胞的Sycp3,圆形精子的过渡蛋白Tnp1、Tnp2,长形精子的Akap4,以及鱼精蛋白Prm1、Prm2,采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测marker基因m RNA表达。结果：苯暴露组小鼠睾丸组织呈现嗜酸性染色增强,1 ppm组出现少量核溶解、细胞脱落等改变;100 ppm组小鼠睾丸生殖细胞变性、坏死明显增多,管腔中心无（或少）细胞的曲细精管数量明显增多,表明亚慢性苯暴露可引起小鼠睾丸的病理改变。苯暴露组Plzf、Stra8、Sycp3、Akap4的m RNA表达均未显示统计学差别,而1 ppm组鱼精蛋白Prm2的m RNA表达显著降低（P〈0.01）;100 ppm组过渡蛋白Tnp1、Tnp2,鱼精蛋白Prm1、Prm2的m RNA表达均显著降低（P〈0.05）。结论：亚慢性苯吸入暴露可导致小鼠睾丸组织的病理改变,下调Tnps和Prms m RNA表达,主要影响单倍体精子细胞核内组蛋白被鱼精蛋白取代的过程。
- 张亚亚覃琼玉林冲孙书强朱华杨新军闫洪涛
- 关键词：苯精子精子生成鱼精蛋白小鼠
