中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金(2012A0505)
- 作品数：3 被引量：31H指数：2
- 相关作者：曾令兵张辉肖艺周勇高正勇更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院长江水产研究所华中农业大学中国水产科学研究院淡水渔业研究中心更多>>
- 发文基金：中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金公益性行业(农业)科研专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：28
- 2012年
- 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T-MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
- 周勇曾令兵孟彦周群兰张辉高正勇肖艺孙建滨
- 关键词：虹彩病毒
- 大鲵虹彩病毒流行株的分离及其主衣壳蛋白编码基因序列比较分析被引量：5
- 2014年
- 大鲵虹彩病毒（giant salamander iridovirus, GSIV）是近年中国大陆新发现的引起人工养殖大鲵（Andrias david-ianus）大规模死亡的病毒病原。为了揭示大鲵虹彩病毒流行株的基因型差异,本研究对2010-2012年采集自全国不同大鲵养殖区域的患虹彩病毒病的大鲵样本进行了分子检测、病毒分离培养以及病毒主衣壳蛋白（major capsid protein, MCP）基因测序与比对分析。结果显示,采自陕西、湖北、湖南、浙江、江西、福建等省的10个样本检测为阳性,通过细胞培养获得10株病毒流行株。对该10株流行株MCP基因的测序与比对分析发现,核苷酸序列相似性达到99.7%~100%,其推测的氨基酸序列无明显差异,证实中国大鲵虹彩病毒流行株属同一基因型。系统进化树分析结果表明,所选大鲵虹彩病毒与蛙病毒分别聚为一枝,但其亲缘关系较近。本研究结果旨为大鲵虹彩病毒病的疫苗研制及其免疫防控技术研究奠定基础。
- 徐进张辉肖汉兵曾令兵
- 关键词：流行株基因序列
- 大鲵虹彩病毒TaqManreal·timePCR检测方法的建立
- 2013年
- 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒（Giantsalamanderiridovirus，GSIV）主要衣壳蛋白（MCP）编码区长度为1392bp的片段，克隆到pMD19-T载体上，构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后，以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒，作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增，制作标准曲线，建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系，且线性范围宽，相关系数为0．99019。组内重复试验的Ct值标准偏差为0．52％。检测结果显示，该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性，与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤鱼上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应，特异性好，检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数，约1．1×10^-3g／μL病毒核酸，较之常规PCR的敏感度高出约1000倍。本研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强，对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
- 周勇曾令兵孟彦周群兰张辉高正勇肖艺孙建滨
- 关键词：虹彩病毒
