上海市卫生局科研基金(2009075)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值。方法通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值。结果成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95%以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合。酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5%(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0%(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P<0.0001)。结论成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一。
- 王庆杨华金瑞良胡忠义刘忠华
- 关键词：重组蛋白质类细菌蛋白质类酶联免疫吸附测定
- 结核分枝杆菌CFP10和MPT48及TB8．4融合蛋白的表达与临床应用被引量：3
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8．4融合蛋白，评价其用于结核病血清学检测的价值。方法选取2008年上海市肺科医院肺结核患者150例，非结核肺部疾病患者70例，健康体检者103名，采集血清标本共323份。构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8．4融合表达载体。融合蛋白经免疫印迹分析后，采用酶联免疫吸附试验检测血清标本，运用Medcalc11．5对结果进行统计学分析。结果成功构建重组质粒pET21a—cfp10—mpt48-tb8．4，获得95％以上纯度的融合蛋白。免疫印迹法发现融合蛋白与血清抗体发生免疫反应。融合蛋白检测血清抗体敏感度56．7％（85／150），特异度90．8％（157／173），其中非结核病患者特异度为85．7％（60／70），健康体检者特异度为94．2％（97／103）。结论CFP10-MPT48-TB8．4融合蛋白所具有的免疫反应性，有可能成为结核病血清学诊断的候选抗原。
- 刘忠华杨华秦莲花金瑞良崔振玲郑瑞娟毕爱笑胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核细菌蛋白质类重组融合蛋白质类
