国家重点实验室开放基金(SKLVEB2011KFKT008)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：石河子大学新疆农垦科学院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家绒毛用羊产业技术体系建设专项国家重点基础研究发展计划更多>>
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- 扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的原核表达及抗原性鉴定被引量：3
- 2012年
- 为表达扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)的烯醇化酶(Enolase),本研究采用RT-PCR方法以M.expansa组织总RNA为模板扩增enolase基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a中,并转化BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示表达的重组Enolase约为47 ku。Western blot分析表明,天然蛋白能够被重组表达产物免疫小鼠的血清识别,出现两条免疫印记条带,即天然蛋白以两种形式(约47 ku和40 ku)存在,并具有抗原性,为该蛋白功能研究奠定了基础。
- 夏党荣陈南颖马勋薄新文何延华康立超
- 关键词：扩展莫尼茨绦虫原核表达抗原性
- 扩展莫尼茨绦虫DAZ基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 为了克隆和表达编码扩展莫尼茨绦虫无精症缺失(DAZ)基因,试验根据GenBank中扩展莫尼茨绦虫DAZ基因cDNA序列(登录号为GH291478)设计1对特异性引物,以扩展莫尼茨绦虫组织总RNA为模板,RT-PCR扩增DAZ基因,并克隆到pMD19-T载体中进行序列测定,构建重组质粒pET28a-DAZ,转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达;利用非变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析表达产物,通过螯合琼脂糖凝胶FF亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果表明:重组DAZ基因在大肠杆菌中高效表达,表达的融合蛋白分子量约为14 ku。
- 王涛夏党荣马勋薄新文王静梅
- 关键词：原核表达
- 绦虫石蜡切片的制作方法被引量：1
- 2012年
- [目的]制作形态完整、结构清晰的绦虫成虫石蜡切片,详细观察其组织结构。[方法]选取扩展莫尼茨绦虫和贝氏莫尼茨绦虫2种绦虫成虫体节,用常规石蜡切片法和改进石蜡切片法分别进行制作。[结果]2种方法均可获得完整性的切片,而改进石蜡切片法制备理想切片的成功率是常规石蜡切片法的5倍。[结论]结果为关于绦虫的教学和科研提供了资料。
- 夏党荣薄新文马勋王涛康立超
- 关键词：绦虫石蜡切片
- 扩展莫尼茨绦虫β微管蛋白基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 【目的】从扩展莫尼茨绦虫中克隆β微管蛋白基因,进行序列测定和生物信息学分析,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获得其全长cDNA序列;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较以及蛋白二级结构的初步预测。【结果】获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因——β微管蛋白基因,全长1 571 bp,编码444个氨基酸,与日本血吸虫的β微管蛋白氨基酸序列具有78.6%的同源性。编码蛋白的理论分子量为49.6 ku,等电点为4.96;1～4位氨基酸MREI为β微管蛋白转录后调控信号,140～146位GGGTGAG存在一个微管蛋白标志信号片段,在99～106位和391～410位存在两个典型的β微管蛋白保守区;亚细胞定位分析其为细胞的骨架蛋白。【结论】获得了扩展莫尼茨绦虫β微管蛋白基因的全长cDNA序列,为该基因功能的实验性鉴定工作奠定基础。
- 夏党荣王涛薄新文马勋何延华康立超王新华
- 关键词：扩展莫尼茨绦虫克隆
