江苏省高校自然科学研究项目(04KJB310020) 作品数:4 被引量:15 H指数:2 相关作者: 龚爱华 张志坚 孙湘兰 钱雷敏 秦茹娟 更多>> 相关机构: 江苏大学 江苏大学附属医院 更多>> 发文基金: 江苏省高校自然科学研究项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
人血清及神经生长因子对成人鼻黏膜嗅鞘细胞体外增殖的影响 被引量:8 2007年 目的:观察人血清及神经生长因子对成人鼻黏膜嗅鞘细胞体外增殖的影响。方法:取成人(自愿者)鼻腔嗅黏膜,制成细胞悬液,分别用DF12培养基(对照组)、10 ng/m l NGF+DF12培养基、10%胎牛血清的DF12培养基、10 ng/m l NGF+10%胎牛血清的DF12培养基、10%人血清的DF12培养基和10 ng/m lNGF+10%人血清的DF12培养基培养细胞,并用差时贴壁法纯化嗅鞘细胞。采用MTT法观察上述各种培养液对嗅鞘细胞增殖的影响。结果:加入与不加入NGF培养液组之间的光密度无统计学意义(P>0.05);胎牛血清组、人血清组与对照组之间的光密度有显著统计学意义(P<0.01);胎牛血清组和人血清组之间的光密度无统计学意义(P>0.05)。结论:人嗅鞘细胞的体外培养对血清具有依赖性,人自体血清培养可替代胎牛血清用于嗅鞘细胞的体外培养、扩增。本研究结果为人嗅鞘细胞的自体移植治疗脊髓损伤提供了可行性基础。 张志强 沈铁城 黄永辉 黄秋生 杨勇 龚爱华 张志坚关键词:MTT法 嗅黏膜 大鼠蛛网膜下腔注射脂多糖后脊髓神经细胞内肿瘤坏死因子的表达及其动态变化 2007年 目的:探讨蛛网膜下腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,肿瘤坏死因子(TNF-α)在脊髓组织内表达水平的动态变化及其在神经细胞内的定位。方法:SD大鼠蛛网膜下腔注射LPS后,采用ELISA法检测大鼠脊髓组织匀浆内TNF-α含量;脊髓组织切片经神经丝(NF)和TNF-α免疫荧光双染色后,在荧光显微镜下观察TNF-α在脊髓神经细胞内的定位。结果:脊髓组织内的TNF-α于蛛网膜下腔注射LPS后1 h开始升高,6 h达到第一个高峰,随后下降,至24 h降至最低但仍高于正常水平,而后又开始上升,在第5天时达到第二个高峰后再逐渐下降,到第14天仍略高于正常水平。结论:脊髓组织内的细胞受LPS刺激后,可产生大量的TNF-α,介导神经组织的炎症反应;脊髓灰质内的神经细胞是LPS的主要靶细胞,可能具有调节脊髓损伤局部炎症反应的生物学功能。 许燕 苏一星 孙湘兰 龚爱华 张志坚 许化溪关键词:脊髓神经细胞 脂多糖 肿瘤坏死因子 嗅鞘细胞/细胞外基质夹层支架的制备和形态学观察 被引量:9 2007年 目的研究嗅粘膜嗅鞘细胞在细胞外基质夹层支架内的生长特性,为治疗神经系统损伤寻找新的移植供体。方法嗅鞘细胞/细胞外基质夹层支架由四层毯状细胞外基质支架和三层嗅粘膜嗅鞘细胞相间叠加构成。纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建单层毯状细胞外基质支架,在支架表面种植嗅粘膜来源的嗅鞘细胞。于倒置显微镜下观察嗅鞘细胞在支架上/内的生长过程,培养3d后,在细胞表面再次滴加上述细胞外基质混合胶以构建第二层毯状支架,依次重复两次。夹层支架制成组织切片和超薄切片后,用光镜和电镜观察和分析夹层支架的内部结构以及嗅鞘细胞在支架内的生长情况。结果由顶层至底层,支架内的嗅鞘细胞数量逐渐增多,细胞突起逐渐延长,细胞内分泌颗粒逐渐增多及其电子密度逐渐增高;细胞可在支架之间迁移,其水平排列方向具有一致性;嗅鞘细胞的细胞膜可与支架紧密粘附,支架内局部区域出现组织间隙。结论嗅粘膜嗅鞘细胞可在细胞外基质夹层支架内正常增殖和分化,细胞与支架具有良好的组织相容性。该夹层支架可作为嗅鞘细胞三维生长的载体,用于移植治疗神经损伤。 钱雷敏 张志坚 龚爱华 秦茹娟 孙湘兰 步雪峰 姜平关键词:细胞外基质 嗅鞘细胞 大鼠脊髓损伤后HIF-1α和VEGF表达的上调及其在血管新生中的意义 被引量:1 2007年 目的:探讨脊髓损伤后神经细胞内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化在血管新生中的意义。方法:应用改良Allen重击法损伤大鼠T12脊髓,按伤后存活时间再分为脊髓损伤1 d,3d,7 d,14 d和30 d组。各组动物的脊髓切片经免疫荧光染色后,用荧光显微镜观察HIF-1α,VEGF的表达和分布,对Laminin免疫反应阳性的血管基膜进行图像分析,比较上述各组的血管密度。结果:HIF-1α和VEGF共定位于脊髓前角运动神经元,脊髓损伤局部的免疫荧光强度高于正常脊髓内的荧光强度,在脊髓损伤后第3天,其荧光强度达到高峰。脊髓损伤后Laminin阳性血管主要分布于损伤坏死组织周围并逐渐向坏死组织内生长,血管密度经历由低到高的过程。结论:脊髓损伤后损伤部位残存神经元可能通过表达高HIF-1α诱导VEGF表达增加,后者通过旁分泌模式作用于周围血管内皮细胞以促进内皮细胞增殖和血管再生。 钱雷敏 许燕 孙湘兰 张志坚 龚爱华 秦茹娟 温泽锋 姜平关键词:脊髓损伤 缺氧诱导因子-1Α 血管新生 免疫荧光