国际科技合作与交流专项项目(2011DFR31210) 作品数:20 被引量:34 H指数:3 相关作者: 罗素兰 长孙东亭 朱晓鹏 吴勇 胡远艳 更多>> 相关机构: 海南大学 更多>> 发文基金: 国际科技合作与交流专项项目 长江学者和创新团队发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体的活性研究 被引量:2 2014年 分析和检测了ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体(nAChR)的结合活性,并用重组表达在非洲爪蟾卵母细胞膜上的大鼠α9α10 nAChR受体,分别评价了2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在常规的ND96灌流液和不含钙离子的钡离子ND96灌流液(Ba2+ND96)中对该受体的阻断活性.研究表明,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在Ba2+ND96灌流液中对α9α10 nAChR没有抑制作用,而它们在常规的ND96灌流液中却表现出微弱的抑制活性,这应是受钙离子激活产生的氯离子电流影响的结果.因此,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC并不是α9α10 nAChR的有效阻断剂,其作用机理与α-芋螺毒素Vc1.1和Rg IA完全不同.本研究阐明了芋螺毒素抑制α9α10 nAChR和钙离子通道的机理,这对研发新型的芋螺毒素镇痛药和更好地治疗顽固性疼痛具有很重要的科学意义. 长孙东亭 朱晓鹏 吴勇 胡远艳 罗素兰关键词:神经痛 A-超家族芋螺毒素研究进展 2015年 芋螺毒素是一类芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌的活性多肽,能特异地作用于电压门控离子通道(Na+、K+、Ca2+)、配体门控离子通道(nAChRs、5-HT3R、NMDAR)、G蛋白偶联受体(神经降压素和血管加压素)和神经递质转运蛋白,已在神经科学领域和新药研制方面受到广泛关注。目前据其信号肽的保守性,将芋螺毒素分为26个超家族。其中A-超家族是研究较多的超家族之一,其作用靶标主要是乙酰胆碱受体,对疼痛、成瘾、抑郁症、帕金森综合症、老年痴呆症、多发性硬化症、癫痫、中风、肌无力等具有潜在的药用价值。本文就A-超家族芋螺毒素的基因结构、蛋白特征、功能等方面的研究进展进行综述。 孟海玲 屈静 庞静 邴晖 吴勇 朱晓鹏 罗素兰 长孙东亭关键词:基因结构 乙酰胆碱受体 A-超家族芋螺毒素基因的克隆及内含子遗传进化分析 2015年 目的从中国南海独特芋螺中克隆新的A-超家族芋螺毒素基因,并分析其内含子的遗传进化关系。方法以独特芋螺基因组DNA为模板,根据A-超家族芋螺毒素基因的信号肽保守序列和3'-非翻译区(3'-UTR)保守序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增出目的基因片段,并将其连接到pMDTM19-T载体,转化到DH5α感受态细胞并测序,同时对新的A-超家族芋螺毒素基因内含子进行遗传进化分析。结果从海南产独特芋螺基因组DNA中克隆到4条新的完整A-超家族芋螺毒素基因。CaI-M1a,CaI-M1b,CaI-M1c是编码同一种芋螺毒素CaI-M1的3个基因,它们的内含子序列存在较大的差异,特别是其中的GT重复不同。CaXXVII-M2编码产生的成熟肽含有5个半胱氨酸,与传统的属于A-超家族的α-芋螺毒素含有4个半胱氨酸的模式不同。结论首次在独特芋螺中克隆到4个新的含有完整内含子的A-超家族芋螺毒素基因,并表明其内含子的多样性与物种进化和捕食习性有一定的联系。 孟海玲 庞静 林波 李庆 李明祥 马艺珍 罗素兰 长孙东亭关键词:基因克隆 内含子 遗传进化树 重组芋螺毒素GeXIVAWT的表达、纯化和鉴定 被引量:5 2012年 芋螺毒素GeXIVAWT是来自食虫将军芋螺(Conus generalis Lonnaeus)毒管中,具有两对二硫键的28肽。通过化学合成这种芋螺毒素产量低、成本高、难以纯化。利用简单快速的重组表达来生产富含二硫键的芋螺毒素有可能成为有效的新途径。通过对芋螺毒素GeXIVAWT的基因进行密码子优化,人工合成引物来构建表达载体pET22b(+)/pelB-GeXIVAWT。融合了信号肽的重组芋螺毒素以包涵体的形式在大肠杆菌中获得了高效表达。利用低浓度尿素洗涤和超滤管进行纯化无组氨酸标签的重组芋螺毒素pelB-GeXIVAWT,再利用稀释复性的方法将无活性的包涵体转变成具有活性的重组芋螺毒素。复性后的重组蛋白采用反相高效液相色谱进一步纯化后进行了质谱鉴定。活性实验表明重组芋螺毒素pelB-GeXIVAWT具有抑制昆虫细胞Sf-9的生长,为研究芋螺毒素作为生物杀虫剂奠定基础。 高炳淼 李宝珠 吴勇 林波 朱晓鹏 长孙东亭 罗素兰关键词:芋螺毒素 大肠杆菌 分离纯化 生物杀虫剂 乙酰胆碱结合蛋白的特点及应用 2013年 乙酰胆碱结合蛋白(acetylcholine-binding proteins,AChBPs)的基本特征、结构特点和激活机制与烟碱型乙酰胆碱受体(the nicotinic acetylcholine recepror,nAChRs)相似.通过对AChBPs晶体结构与功能的研究,能准确阐明nAChRs结构与功能的关系.通过对配体和AChBPs的复合物的晶体结构解析,有助于我们理解配体与nAChRs相互作用的机理,为开发治疗疼痛、成瘾、帕金森症、阿尔茨海默氏症和癫痫等疾病的新药提供理论基础. 林波 高炳淼 孟海玲 邴晖 吴勇 长孙东亭 罗素兰关键词:烟碱型乙酰胆碱受体 晶体结构 受体在非洲爪蟾卵母细胞上表达方法的优化 被引量:6 2013年 通过改变非洲爪蟾卵母细胞的消化时间、消化次数、消化用酶量等,优化乙酰胆碱受体的表达条件。结果显示,采用两步消化法,在经过0.5 mg/mL的胶原酶消化50-70 min之后得到的非洲爪蟾卵母细胞的状态较好,利于受体的表达;同时优化了受体在非洲爪蟾卵母细胞上的表达条件。试验所获得的优化表达条件对建立非洲爪蟾卵母细胞受体表达体系具有重要意义。 房立丛 沈立姿 于津鹏 朱晓鹏 胡远艳 张本 罗素兰 长孙东亭关键词:非洲爪蟾卵母细胞 乙酰胆碱受体 丝线、羊肠线及结扎道数对大鼠CCI疼痛模型的影响 被引量:2 2013年 通过比较丝线、羊肠线2种不同材料和不同结扎道数对大鼠CCI疼痛模型痛阈值的影响,优化筛选出更易在实验过程中普及的技术方法 .将42只SD雄性大鼠随机分成7组,包括结扎丝线4道、3道与2道3个组;结扎羊肠线4道、3道与2道3个组和1个假手术组,每组6只大鼠.铬制羊肠线和丝线分别结扎大鼠左侧坐骨神经2道、3道、4道;假手术组只暴露左侧坐骨神经,不进行结扎处理.建模成功后测量各组大鼠的机械性缩足反应阈值(MWT),发现丝线3道、4道组和羊肠线2道、3道、4道组与假手术组和自身基础的MWT有极显著差异(P<0.01);假手术对照组、丝线2道组与各组自身基础的MWT之间没有差异(P>0.05),结扎手术前后的MWT之间差异显著,结扎后第7天、14天和21天的MWT之间没有差异.羊肠线3组之间没有显著性差异(P>0.05).由此可得出结论:羊肠线2道、3道、4道组,以及丝线3道、4道组均能产生稳定的神经痛,根据MWT的数值大小和是否出现自噬现象可认为,以羊肠线结扎2道组最好,不但MWT的数值小,且操作简便又节省时间,可作为大鼠CCI建模的首选方法 . 沈立姿 房立丛 于津鹏 胡远艳 朱晓鹏 高炳淼 罗素兰 长孙东亭关键词:丝线 两种给药途径注射吗啡对大鼠CCI模型的影响 被引量:2 2013年 通过建立坐骨神经慢性挤压伤模型(Chronic Constriction Injury model,CCI模型),运用鞘内和腹腔给药技术,对比了2种给药途径单次注射不同剂量的吗啡对CCI大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)的影响.结果显示,单次鞘内注射吗啡1μg·kg-1,给药后1 h和3 h,在大鼠CCI模型上的镇痛作用与单次腹腔注射吗啡1 mg·kg-1的镇痛作用相当,与单次腹腔注射吗啡0.5 mg·kg-1和0.1 mg·kg-1的镇痛作用具有显著性差异(P<0.05).这表明鞘内注射吗啡在大鼠CCI镇痛模型上具有用量小、效果好等优点,对于筛选产量小、难提取,但作用效果明显的镇痛药物具有明显的优越性. 房立丛 沈立姿 于津鹏 朱晓鹏 胡远艳 张本 罗素兰 长孙东亭关键词:鞘内置管 给药途径 作用于电压门控钠离子通道的芋螺毒素研究进展 被引量:2 2013年 电压门控钠离子(Na+)通道(VGSCs)对兴奋细胞动作电位具有调节作用,许多生物毒素能与VGSCs相互作用。近年来研究发现,热带海洋肉食性软体动物芋螺中含有多种多肽类毒素(芋螺毒素或芋螺肽),其中一大类芋螺毒素能与Na+通道各种亚型特异结合,改变Na+通道的功能,对于研究Na+通道的结构和功能以及研发作用于Na+通道的相关药物或其先导化合物具有重要作用。本文就近年来发现的作用于Na+通道的芋螺毒素的研究进展进行综述。 于津鹏 沈立姿 房立丛 朱晓鹏 长孙东亭 罗素兰关键词:芋螺毒素 特异性 转染乙酰胆碱结合蛋白基因到昆虫细胞的研究 被引量:1 2014年 海兔(Aplysia californica)乙酰胆碱结合蛋白(Ac-AChBP)是研究烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)的结构模板之一,它的高效表达对研究神经性相关疾病具有重要的意义。高效表达关键是要有高的转染效率,通过构建含(Ac-AChBP)基因的昆虫杆状病毒表达载体Bcmid,对脂质体转染Bcmid的多个条件进行探索,研究发现,当采用对数生长中期的细胞、细胞密度为2.5×106cells/mL,质粒DNA浓度为4.5×10-2g/mL和脂质体浓度为0.8 mL/L时,转染效率达到较高值,滴度为2×107±10%pfu/mL,同时证明高滴度病毒具有高的表达效率,而且表达蛋白具有生物活性。 林波 孟海玲 吴勇 邴晖 长孙东亭 罗素兰关键词:脂质体转染 转染效率