国家自然科学基金(30400413)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备被引量：1
- 2006年
- 目的原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清。方法参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrpcDNA序列。用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体。以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用West-ernblot鉴定抗体的特异性。结果预测的mlrpcDNA的长度为1905bp。将克隆获得的1554bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mL-RP融合蛋白。以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清。结论mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础。
- 代忠明陈苏民杜可军陈南春宋庆贺骆文静陈景元
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 小鼠脂多糖应答蛋白mlrpS的载体构建及融合蛋白表达被引量：1
- 2006年
- 为构建小鼠mlrpS-cDNA基因原核、真核表达载体,大肠杆菌表达其融合蛋白。采用反转录-聚合酶链反应从经脂多糖刺激的鼠NIH3T3细胞cDNA中,扩增出编码mlrpS的cDNA。用限制性内切酶KpnⅠandXhoⅠ消化后,插入原核表达载体pTAT中,经酶切鉴定与测序证实后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生融合蛋白。经KpnⅠ和XhoⅠ酶切回收mlrpS-cDNA,插入pcDNA3.1载体中;pcDNA3.1-mlrpS再经KpnⅠ和ApaⅠ酶切后,插入到pEGFP-c1载体上,构建pEGFP-mlrpS融合的真核表达载体。构建mlrpS表达载体经测序证实,与GenBank登录的序列完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入载体pEGFP及pTAT;SDS-PAGE证实融合蛋白表达成功。说明:成功地构建了mlrpS原核、真核表达载体,成功正确表达了6His/mlrpS融合蛋白。
- 代忠明陈苏民陈南春杜可军骆文静陈景元
