国家自然科学基金(30400447)
- 作品数：15 被引量：43H指数：3
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- 外源性人胰岛素样生长因子-1基因在关节软骨细胞中的表达被引量：12
- 2005年
- 目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性,建立IGF1基因工程化的关节软骨细胞。方法利用基因重组技术,将GFPcDNA片段插入pcDNA3.1hIGF1载体中,构建重组载体pcGI。然后采用脂质体方法,转染原代关节软骨细胞,经G418筛选后,继续体外单层培养4周。原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF1的表达,荧光显微镜观察GFP的表达,Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测软骨细胞表型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞增殖能力。结果根据重组载体pcGI内的酶切位点,设计采用BamHI酶切显示为线性化,XbaI酶切显示为512bp、1768bp、5915bp三个片段,HindⅢ则酶切下3023bp、5172bp二个片段,证明所构建的质粒方向及大小正确,含有GFP和hIGF1cDNA片段。稳定转染pcGI的软骨细胞原位杂交、免疫细胞化学和荧光显微镜证实了hIGF1和GFP的表达,同时MTT显示转染后的软骨细胞增殖能力增强,并能维持Ⅱ型胶原的表达。结论外源性hIGF1和GFP基因在关节软骨细胞内获得稳定表达,体外单层培养的转染关节软骨细胞增殖能力增强,同时维持软骨细胞表型。
- 张绍昆刘一吴宏单玉兴徐莘香
- 关键词：关节软骨细胞外源性免疫细胞化学酶切位点GFP基因
- 新生大鼠脊髓源性神经干细胞的分离培养及分化鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨分离、培养新生大鼠脊髓源性神经干细胞的方法并对其进行分化鉴定,为临床应用脊髓神经干细胞进行周围神经系统疾病的替代治疗奠定细胞学基础。方法:首次采用注射器灌注法分离新生24hWistar大鼠脊髓源性神经干细胞,神经细胞培养液调节细胞终浓度并进行培养,形成克隆后,传代。将传至第1代培养细胞加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导其分化。形态学方法观察细胞的生长状态,利用鼠抗Nestin抗体、鼠抗GFAP抗体、鼠抗MAP-2抗体进行分化的神经干细胞免疫组织化学鉴定。结果:新生大鼠脊髓源性神经干细胞可在体外培养条件下贴壁生长,在血清的作用下可分化为具有典型神经细胞形态、表达特异性组织蛋白Nestin、GFAP、MAP-2的神经细胞。结论:大鼠脊髓内可分离出脊髓源性神经干细胞,呈贴壁增殖状态,并有分化能力。
- 张殿君刘一付长峰宿晓云王芳李相军
- 关键词：脊髓源性神经干细胞细胞培养细胞分化
- 体感诱发电位在脊柱侧凸手术中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的探讨脊柱侧凸矫形术中体感诱发电位的监测意义。方法用体感诱发电位仪对2002-07／2005-03吉林大学第一医院骨科收治的脊柱侧凸患者51例行体感诱发电位监测。观察手术、麻醉事件对体感诱发电位潜伏期及波幅的影响。结果51例患者均进入结果分析。51例中,43例术中体感诱发电位出现波形改变,其中33例潜伏期延长小于10％,波幅下降小于60％;9 例潜伏期延长大于10％,波幅下降大于60％。主要是因麻醉、手术操作等引起。术后均无运动障碍。结论体感诱发电位术中监测具有简便、灵敏度高和及时监测等特点,有助于防止发生术后神经系统并发症。
- 张琪高萍张绍昆刘一
- 关键词：脊柱侧凸
- GFP标记的IGF-1基因表达载体转染成纤维细胞的研究
- 2008年
- 目的构建和鉴定含有标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因真核表达载体,为基因治疗关节软骨缺损奠定基础。方法利用基因重组技术将GFP cDNA连接至pcDNA3.1-IGF-1中,构建真核表达载体pcGI,然后限制性内切酶酶切鉴定。将pcGI转染成纤维细胞,经G418筛选,荧光显微镜、原位杂交和免疫细胞化学检测GFP和hIGF-1的表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果酶切分析证明重组的pcGI质粒含有GFP cDNA和hIGF-1 cDNA碱基片段,方向及大小正确。转染后的成纤维细胞,荧光显微镜观察可激发出绿色荧光,原位杂交和免疫细胞化学检测有hIGF-1的表达。流式细胞仪分析显示转染后成纤维细胞S期细胞增加,G1期细胞减少(P<0.01)。结论含有GFP和hIGF-1基因的真核表达载体pcGI其可以在成纤维细胞内获得稳定表达,并有效的促进成纤维细胞的增殖,这为进一步开展IGF-1基因治疗软骨损伤修复的研究奠定了基础。
- 张绍昆刘一孙绍华付长峰赵松闫明
- 关键词：绿色荧光蛋白人胰岛素样生长因子-1成纤维细胞
- 脂质体介导的rhIGF-1基因对成骨细胞增殖分化的影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨重组人胰岛素生长因子(rhIGF-1)基因对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化的影响。方法采用酶消化法获取大鼠乳鼠颅骨成骨细胞,传至第3代进行成骨细胞鉴定,钙化结节用茜素红(ARS)染色,钙钴法显示成骨细胞中碱性磷酸酶(ALP)的表达。用脂质体法将pcDNA3.1-rhIGF-1质粒转染成骨细胞。倒置显微镜下观察细胞的生长形态,MTT法检测成骨细胞增殖情况,碱性磷酸酶及骨钙素(OCN)测定成骨细胞活性。结果建立了稳定的大鼠成骨细胞模型;pcDNA3.1-rhIGF-1质粒转染组与对照组及空质粒pcDNA3.1组比较成骨细胞增殖旺盛、ALP和OGN的分泌增加,有显著性差异(P<0.01)。结论外源性rhIGF-1基因能够刺激大鼠成骨细胞增殖、分化,促进骨形成。
- 李辉南高凤彤李剑威王华
- 关键词：胰岛素生长因子成骨细胞增殖分化
- IGF-1抑制SCI大鼠脊髓前角神经元凋亡的体内实验被引量：6
- 2006年
- 目的:研究脂质体介导的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)体内转基因对急性脊髓损伤神经细胞凋亡的干预作用。方法:雄性Wistar大鼠36只,使用半横断法制造脊髓损伤模型,随机分为IGF-1治疗组、模型组、空白对照组。将阳性脂质体LipofectAmine同重组质粒pcDNA-hIGF-1混合注入治疗组大鼠脊髓病灶,模型组大鼠在损伤区域注射pcDNA3.1、LipfectAmine和生理盐水混合液。利用免疫组化方法观察IGF-1蛋白表达,通过TUNEL染色进行凋亡细胞组织定量分析。BBB法进行动物肢体功能评分。结果:同模型组和空白对照组比较,治疗组神经细胞中IGF-1在伤后1和4周蛋白表达明显增加(P<0.05);TUNEL染色结果显示,治疗组神经细胞凋亡数目明显减少(P<0.05)。BBB评分结果显示,肢体功能BBB评分伤后1和4周时,治疗组(7.00±0.53、11.20±0.56)恢复明显优于对照组(4.40±0.49、8.70±0.44)(P<0.05)。结论:IGF-1体内转基因可减少急性脊髓损伤大鼠的神经细胞凋亡,对急性损伤后的脊髓具有保护作用。
- 付长峰刘一李相军沈波张绍昆宋之明张新
- 关键词：胰岛素样生长因子I
- hIGF-1基因转染对成纤维细胞增殖的影响
- 2006年
- 目的:探讨人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因转染对成纤维细胞增殖的影响。方法:用脂质体转染法将pcDNA3.1-hIGF-1质粒转染鼠成纤维细胞NIH3T3,经G418筛选抗性NIH3T3细胞并继续培养4周,进行原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF-1的表达,MTT方法和流式细胞仪检测NIH3T3细胞增殖能力。结果:转染pcDNA3.1-hIGF-1后的NIH3T3细胞内有大量hIGF-1 mRNA和蛋白质的表达;MTT检测显示转染pcDNA3.1-hIGF-1的NIH3T3细胞光吸收值增大,与未转染的NIH3T3细胞组比较,差异具有显著性(P<0.01);流式细胞仪检测显示转染组细胞,S期比例增加(59.3%),G1期比例减少(27.2%)。结论:pcDNA3.1-hIGF-1质粒转染成纤维细胞后,可以获得稳定表达,并能明显促进成纤维细胞的增殖。
- 张绍昆谭岩单玉兴宋之明徐莘香
- 关键词：胰岛素样生长因子1成纤维细胞3T3细胞
- 不同浓度脂多糖对J774A.1细胞CD14表达的影响被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨不同时间和不同浓度脂多糖(LPS)对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞CD14表达的影响。方法:用不同浓度LPS刺激J774A.1细胞后,FITC-CD14单克隆抗体染色45 min,用流式细胞术检测J774A.1细胞CD14的表达,观察用LPS刺激不同时间(1、2、4、8及16 h)后J774A.1细胞CD14表达的变化;选择最佳时间后,观察不同浓度(1、10、50、100、500及1 000μg.L-1)LPS对J774A.1细胞CD14表达的变化。结果:在时间-效应关系上,当LPS浓度为1μg.L-1时,刺激1、2及4 h后CD14表达增强(分别为23.80±5.07、23.04±2.88、28.22±1.54),与对照组(12.50±3.71)比较差异有显著性(P<0.01),LPS浓度为10μg.L-1时,刺激1和2 h后CD14表达增强(分别为40.85±6.05、26.63±6.17),与对照组(12.50±3.71)比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01),而LPS浓度为50μg.L-1时,刺激1 h后CD14表达增强(47.40±2.85),与对照组(12.50±3.71)比较差异有显著性(P<0.01)。在剂量-效应关系上,刺激4 h时LPS浓度为小于10μg.L-1时CD14表达蛋白明显高于对照组(P<0.01)。结论:用LPS刺激J774A.1细胞表达CD14时,LPS刺激时间最好是在4 h以内,刺激浓度最好不要超过50μg.L-1。
- 张海玉单玉兴武宁陈光伟
- 关键词：巨噬细胞脂多糖类
- 胸椎旁路法植入椎弓根螺钉的力学实验研究被引量：11
- 2006年
- 目的:研究在胸椎节段应用椎弓根旁路法植入椎弓根螺钉的力学可行性。方法:5副成人新鲜尸体胸椎(T1-8),分解为40个单一椎体标本,每一标本左右两侧分别使用经椎弓根入路法(n=40)和旁路法(n=40)植入螺钉,并进行螺钉沿椎体矢状轴拔出强度的力学测量,比较两种方法的拔出强度。结果:旁路法植入螺钉后出现两种情况A和B,A:19个椎体(47.5%),为螺钉经横突后沿椎弓根外壁固定至椎体;B:21个椎体(52.5%),为螺钉经椎弓根外侧皮质至椎体。旁路法中A植入螺钉的拔出强度为(827.01±260.00)N,旁路法中B植入螺钉的拔出强度为(954.25±254.00)N。结合A、B两种情况,旁路法中植入螺钉的平均拔出强度为(890.63±342.00)N,胸椎经椎弓根入路螺钉的拔出强度为(1 001.23±220.00)N,二者比较,旁路法螺钉的平均拔出强度较经椎弓根入路法螺钉的拔出强度降低11.04%,但差异无显著性(P>0.05)。结论:胸椎椎弓根旁路法植入椎弓根螺钉在力学上是可行的。
- 付长峰刘一张绍昆宋之明
- 关键词：胸椎椎弓根螺钉
- 人胰岛素样生长因子1真核细胞表达质粒的构建及其稳定表达细胞株的建立
- 2005年
- 目的构建胰岛素样生长因子1(insulin growth factor1,IGF-1)的真核细胞表达质粒,转染神经胶质瘤细胞(C6细胞),建立hIGF-1稳定表达细胞株,为进一步观察胰岛素样生长因子1基因体内转染后对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响打下基础。方法实验于2004-05/09在吉林大学公共卫生学院放射生物实验室进行。用聚合酶链反应方法从人的肝细胞cDNA文库中克隆出IGF-1cDNA,然后定向插入真核细胞表达载体pcDNA3.1中,酶切电泳和基因测序鉴定插入质粒的hIGF-1基因序列;使用C6细胞株,用脂质体方法转染C6细胞。经G418筛选,形成阳性细胞克隆。继续培养4周,进行W estern blot检测。结果重组的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-hIGF-1所含的IGF-1cDNA序列和插入方向均正确。W estern blot检测结果证实转染的hIGF-1基因在C6细胞内成功表达。结论实验所构建的重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-hIGF-1能够稳定表达有活性的hIGF-1,实验结果对进一步观察脊髓损伤后胰岛素样生长因子1抑制神经细胞凋亡的作用有一定意义。
- 付长峰刘一张绍坤付士波
- 关键词：脊髓损伤细胞凋亡胰岛素样生长因子1转染
