广东省教育部产学研结合项目(2012B091100113)
- 作品数：3 被引量：16H指数：1
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- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省教育部产学研结合项目国家自然科学基金更多>>
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- 高分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶血性弧菌
- 2013年
- 为建立一种快速鉴定副溶血性弧菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,以tox R为靶基因,结合特异性引物,通过优化反应体系及条件,进行特异性、敏感性及重复性评价,并初步应用于90份送检的鲜活海产品样本的检测。特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧菌,Tm值为76.64±0.57℃;而与创伤弧菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等多种海产品中常见的食源性病原菌没有交叉反应。灵敏度试验表明,该方法最少可检测tox R重组质粒的浓度为3.50×102copies/mL。重复性试验表明,同一样品于试验内及试验间的平均Tm值分别为76.53±0.35℃和76.74±0.52℃,变异系数分别为0.56±0.42%和1.11±0.73%。对90份鲜活海产品样本的检测证实该法可使阳性检出率从国标法的14.44%提高至18.89%。本研究所建立的副溶血性弧菌HRM real-time PCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能应用于食品样本的检测,具有很好的研究价值和应用前景。
- 章丽余以刚赖富饶吴晖杨锡洪肖性龙
- 关键词：副溶血性弧菌高分辨率熔解曲线实时PCR荧光
- 猪瘟病毒野生株和疫苗株荧光RT-PCR鉴别方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为了建立猪瘟病毒野生株和疫苗株荧光RT-PCR鉴别方法,设计了1对通用引物和2条特异性MGB探针。此外,为防止假阴性结果出现,制备了假病毒用于全程检测监控。测试了本方法的特异性,灵敏度,重复性等技术指标。结果显示,在选定的猪病相关病毒组内特异性符合率达100%;对野毒株和疫苗株的检测灵敏度分别达到1TCID50/mL和0.1 TCID50/mL;重复性实验表明组内和组间变异系数均在0.7-2.2%之间。临床比对试验结果显示,荧光RT-PCR对猪肉、脾脏和血液病料进行猪瘟野毒检测的阳性率分别为66.7%、60.0%、77.8%,而传统方法的阳性率分别为52.4%、40.0%、50.0%;检出率比传统方法要高。此外,临床试验样本中,PCR抑制物在猪肉、脾脏和血液病料中存在的比例分别为9.5%、10.0%和5.6%,显示了假病毒作为内标对PCR检测监控的重要作用。
- 余以刚黄韵陶文扬章丽吴晖肖性龙赖富饶杨锡洪
- 关键词：猪瘟病毒荧光RT-PCR假病毒
- 金黄色葡萄球菌活的非可培养状态复苏及PMA-qPCR检测被引量：15
- 2013年
- 为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养(VBNC)状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和PMA-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明:8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌48 h后复苏,同时PMA-qPCR能够有效检出VBNC状态金黄色葡萄球菌,克服传统平板计数法对于VBNC菌的漏检。
- 田聪余以刚肖性龙吴晖赖富饶杨锡洪
- 关键词：金黄色葡萄球菌PMA荧光定量PCR
