国家自然科学基金(81202162)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：徐洪徐丁洁杨方邓海静孙月更多>>
- 相关机构：河北联合大学华北理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金唐山市科技计划项目河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ac-SDKP调节乙酰化微管蛋白α抑制矽肺肌成纤维细胞转化的研究被引量：8
- 2015年
- 目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）通过对乙酰化微管蛋白α（Ac-Tub α）的调控,抑制矽肺肌成纤维细胞转化的作用及机制.方法 构建矽肺大鼠模型,分为对照组（4、8周）、矽肺模型组（4、8周）、Ac-SDKP抗纤维化治疗组和预防治疗组;原代肺成纤维细胞分为对照组、血管紧张素（Ang）Ⅱ诱导组、Ac-SDKP预处理组、血管紧张素Ⅱ受体1（AT1）阻滞剂（缬沙坦）预处理组、组蛋白去乙酰化酶（HDAC）6选择性抑制剂（TCS HDAC6 20b）预处理组.免疫组化及免疫荧光染色法观察Ac-Tub α、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织或细胞中的表达与定位.免疫印迹法检测肺组织或细胞中Ⅰ型胶原、α-SMA、Ac-Tubα、HDAC6蛋白的表达.结果 免疫组化结果显示,矽肺模型组矽结节和间质纤维化区域Ac-Tubα表达缺如,α-SMA阳性表达.Ac-SDKP能够抑制Ⅰ型胶原、α-SMA、HDAC6蛋白的表达,其中抗纤维化治疗组与矽肺模型8周组比较下降至48.39％、52.63％和70.18％,预防治疗组与矽肺模型8周组比较下降至32.26％、64.91％和54.39％;在Ac-SDKP抗纤维化治疗组和预防治疗组Ac-Tub α蛋白表达为矽肺模型8周组的3.00和2.90倍,以上结果经方差分析差异均有统计学意义（P＜0.05）.Ang Ⅱ诱导组Ac-Tubα表达减弱为对照组的44.44％.而AngⅡ诱导组的α-SMA、HDAC6和Ⅰ型胶原表达增多,分别是对照组的1.66、3.56和4.00倍（P＜0.05）.予以Ac-SDKP、缬沙坦或TCSHDAC6 20b预处理,能明显抑制该变化.结论 Ac-SDKP抑制矽肺大鼠肌成纤维细胞转化和胶原沉积,发挥抗矽肺纤维化的作用,可能与下调HDAC6和促进Ac-Tub α的表达有关。
- 李世峰高学敏徐丁洁王小君刘燕张丽娟邓海静魏中秋田景瑞徐洪杨方
- 关键词：矽肺成纤维细胞细胞转化微管蛋白ANGIOTENSIN
- 新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立被引量：10
- 2014年
- 目的肌成纤维细胞(fibroblasts,FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞,以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点,并报道体外肌FB分化模型的建立。方法分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB,倒置相差显微镜观察原代培养,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导FB向肌FB分化。结果采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB,2种方法无论在形态、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异,但胰蛋白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多的细胞,且2种方法获得的FB在4代之内均不表达α-SMA,需经TGF-β1诱导分化为肌FB。随TGF-β1诱导时间的延长,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达上调。结论胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB,4代以内的乳鼠FB适合建立肌FB分化模型。
- 孙月徐洪徐丁洁魏中秋于婉莹邓海静薛新新杜世璞杨方
- 关键词：成纤维细胞原代培养肌成纤维细胞
- Ac-SDKP经由Epac信号抑制矽肺肌成纤维细胞分化的作用及机制被引量：6
- 2015年
- [目的]观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartly-lysyl-proline,AcSDKP)能否通过对环腺苷酸活化的交换蛋白(exchange protein activated by c AMP,Epac)信号的活化,抑制矽肺大鼠及促血管生成素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的肌成纤维细胞分化。[方法]构建矽肺大鼠模型,分为对照组(4、8周组),矽肺模型组(4、8周组),Ac-SDKP抗纤维化治疗组及Ac-SDKP预防治疗组;采用Ang Ⅱ诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5向肌成纤维细胞分化,并予以Ac-SDKP和Epac特异性活化剂8-Me-c AMP(8-p CPT-2′-O-Me-c AMP)预处理。HE及Masson染色观察肺组织病理形态。免疫组织(细胞)化学染色法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth mucle actin,α-SMA)的定位,Western blot法检测I型胶原、α-SMA和Epac蛋白的表达。[结果]在矽肺模型组中,出现明显矽结节,结节内可见α-SMA标记的肌成纤维细胞阳性表达;Western blot法检测矽肺组织中I型胶原、α-SMA表达上调,而Epac1表达下调;给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗能够抑制该变化。给予Ang Ⅱ诱导,可见MRC-5细胞胞浆内出现明显的α-SMA阳性显色;Western blot法中可见α-SMA和I型胶原蛋白表达上调;而予以8-Me-c AMP或Ac-SDKP预处理,能够上调Epac1,抑制Ang Ⅱ诱导的α-SMA和I型胶原蛋白表达的上调。[结论]Ac-SDKP能够通过对Epac信号的活化,在体内外抑制矽肺大鼠肌成纤维细胞分化和胶原沉积,从而发挥抗矽肺纤维化的作用。
- 杜世璞薛新新李世峰孙月王小君刘燕邓海静徐丁洁徐洪杨方
- 关键词：血管紧张素矽肺肌成纤维细胞
- N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对肌成纤维细胞分化的作用被引量：2
- 2015年
- 目的矽肺是我国最严重的职业病之一。文中研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)对血管紧张素(angiotensin,Ang)Ⅱ诱导的细胞外信号调节激酶信号(extracelluler signal-regulated kinase,ERK1/2)信号和Jun氨基末端激酶信号(Jun N-terminal kinase,JNK)的调控,抑制人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。观察AngⅡ是否经由ERK1/2和JNK信号诱导人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞分化以及Ac-SDKP对此过程的调节作用。方法实验分为5组:对照组(无血清培养基培养)、AngⅡ诱导组(采用100 nmol/L AngⅡ诱导MRC-5细胞)、SP600125干预组(予以JNK信号阻断剂SP600125预处理)、PD98059干预组(ERK1/2信号阻断剂PD98059预处理)和Ac-SDKP干预组(Ac-SDKP预处理)。MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及其上游转录因子血清反应因子(serum response factor,SRF)、p-ERK1/2和p-JNK的定位及表达;Western blot法检测Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF和p-ERK1/2、p-JNK的表达水平。结果 AngⅡ诱导组A值(0.56±0.08)为对照组(0.27±0.05)的2.07倍;SP600125干预组、PD98059干预组和Ac-SDKP干预组A值分别为(0.39±0.02)、(0.40±0.03)、(0.36±0.05)与AngⅡ诱导组(0.56±0.08)比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);AngⅡ诱导组的Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF蛋白水平明显上调,分别是对照组的4.50、3.50和3.00倍;AngⅡ诱导组能够上调p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是对照组的6.71和7.90倍;而Ac-SDKP干预组能够抑制p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是AngⅡ诱导组的29.79%和46.84%。结论Ac-SDKP能够通过对AngⅡ介导的ERK1/2信号、JNK信号的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。
- 薛新新杜世璞李世峰王小君刘燕邓海静徐丁洁徐洪杨方
- 关键词：肌成纤维细胞信号转导通路
