探索表达于大肠杆菌中的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白(The fusion protein of 12 peptide of hirudin and reteplase,HV12p-rPA)的体外复性方法。采用直接透析复性和氧化复性结合透析复性两种方式,并分析复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系比例对复性率的影响。分别测定其体外抗凝活性和纤溶活性,确定复性效果。结果显示:将变性溶解的HV12p-rPA在含8mol/L脲,0.05mmol/LGSSG,0.7mol/LL-Arg的50mmol/LGly-NaOH(pH9.20)缓冲液中于25℃氧化复性6h后,再在含0.5mol/LL-Arg,1mmol/L胱氨酸,2mmol/L半胱氨酸的20mmol/LGly-NaOH(pH9.20)缓冲液中于4℃进行梯度脲浓度透析,每隔8h换液一次,透析48h,可获得具有抗凝活性为730ATU/mg,纤溶活性为19768IU/mg的可溶性蛋白质。
