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复方沙棘籽油栓对6种常见阴道乳杆菌增殖影响的体外研究被引量：8: 2014年; 目的:研究复方沙棘籽油栓对6种常见阴道乳杆菌增殖的影响。方法:从中国健康妇女阴道分离乳杆菌进行纯化、鉴定后在体外培养,在培养基中加入不同浓度的复方沙棘籽油栓,观察该药对各菌种增殖的影响。结果:浓度≥405mg/m L时,所有细菌无法生长;浓度在129mg/m L^405mg/m L时,对细菌产生抑制作用(P<0.05);当浓度在16.2mg/m L^64.8mg/m L时,对卷曲乳杆菌和加氏乳杆菌产生促进作用(P<0.05),而对其它细菌无明显作用(P>0.05)。结论:复方沙棘籽油栓对阴道乳杆菌各菌种的影响存在不同,且其影响与药物浓度有关。当药物浓度合适时,能对卷曲乳杆菌和加氏乳杆菌产生一定的促进作用。; 张瑞陈锐桑佳特廖秦平; 关键词：阴道乳杆菌体外培养复方沙棘籽油栓

健康女性阴道乳杆菌抑菌功能的初步研究被引量：8: 2013年; 目的:研究健康女性阴道乳杆菌对阴道常见致病菌的抑制作用及其机制。方法:选取北京大学第一医院体检中心18～45岁的育龄期健康女性17例,从其阴道分泌物中分离、纯化乳杆菌并进行鉴定。采用spot on lawn和双层牛津杯法筛选出对粪肠球菌、微小消化链球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌有抑制作用的阴道乳杆菌菌株。测定乳杆菌的生长曲线及代谢物内的乳酸含量。将乳杆菌与白假丝酵母菌共培养,观察乳杆菌菌体和菌液粗提物在抑制白假丝酵母菌的过程中各自所起的作用。结果:17例健康女性阴道分泌物中分离出23株乳杆菌,其中6株具有抑菌作用,分别是加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、卷曲乳杆菌、发酵乳杆菌和德氏乳杆菌,其中加氏乳杆菌增殖能力较强,詹氏乳杆菌最弱。6株乳杆菌代谢物内乳酸的含量不同,发酵乳杆菌最高为(2.72±0.035)mg/ml,卷曲乳杆菌和德氏乳杆菌较低,分别为(2.14±0.035)mg/ml和(2.13±0.025)mg/ml。加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌的菌液、菌体及菌液粗提物均可以抑制白假丝酵母菌的生长(P≤0.05);发酵乳杆菌和德氏乳杆菌的菌液和菌体可以抑制白假丝酵母菌的生长(P≤0.05);卷曲乳杆菌对白假丝酵母菌则无抑制作用。结论:健康女性阴道乳杆菌的多个菌株均具有抑制大肠埃希菌、粪肠球菌、微小消化链球菌或白假丝酵母菌的功能。詹氏乳杆菌粗提物中细菌素类物质和过氧化氢的联合作用可以抑制白假丝酵母菌,加氏乳杆菌和阴道乳杆菌主要依靠过氧化氢起作用。乳杆菌产生的乳酸没有发挥抑菌作用。; 桑佳特张瑞肖冰冰韦晓昱陈锐廖秦平; 关键词：阴道乳杆菌抑菌功能粪肠球菌大肠埃希菌白假丝酵母菌

外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道乳杆菌的功能变化被引量：2: 2016年; 目的分离、纯化、鉴定外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者阴道乳杆菌菌种;绘制VVC患者阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的生长曲线,检测其产酸能力、产H_2O_2能力,分析VVC患者阴道乳杆菌的功能变化及临床意义,为VVC的病因及治疗提供理论基础。方法体外培养VVC患者阴道分泌物中的乳杆菌,分离、纯化,并用分子生物学技术鉴定;测定24h菌液浊度法绘制VVC患者及健康女性阴道内分离的4种乳杆菌的生长曲线;检测24h菌液p H值对比VVC患者与健康女性阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的产酸能力;绘制H_2O_2浓度标准曲线,定量检测摇菌3h菌液的产H_2O_2的量,对比VVC患者与健康女性阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的产H_2O_2能力。结果共分离培养了34株VVC患者阴道乳杆菌,经鉴定,分属于乳杆菌的4个种。VVC患者与健康妇女相比,阴道内卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的增殖速度差异无统计学意义(P<0.05)。健康女性加氏乳杆菌与卷曲乳杆菌的产酸能力比VVC患者强(P<0.05);詹氏乳杆菌的产酸能力两组差异无统计学意义(P>0.05);而VVC患者发酵乳杆菌的产酸能力比健康女性强(P<0.05)。VVC患者阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的产H_2O_2量均明显少于健康妇女(P<0.05)。结论本研究为进一步构建中国女性阴道来源的乳杆菌菌种库、进行阴道来源的乳杆菌的相关研究提供菌种。VVC状态下,念珠菌的增多,阴道微环境的改变,并未影响阴道内定植的乳杆菌的生长速度。阴道内乳杆菌的产酸功能并不是抑制VVC的关键。阴道内乳杆菌产H_2O_2能力可能为抑制VVC的关键。; 周丹邓文慧李叶吕秋波孟庆伟; 关键词：阴道乳杆菌 H2O2

妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病阴道乳杆菌的变化被引量：6: 2013年; 目的探讨妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）患者与妊娠期健康妇女、非妊娠期VVC患者相比阴道内乳杆菌种类的变化，检测3组中优势菌卷曲乳杆菌产过氧化氢（H2O2）和产酸能力。方法选取妊娠期VVC组和妊娠期健康组各24例，非妊娠期VVC组62例，通过种特异性聚合酶链反应（PCR）法检测阴道分泌物中的乳杆菌分布；比较妊娠期VVC组，妊娠期健康组，非妊娠期VVC组卷曲乳杆菌产H2O2和产酸能力。结果（1）妊娠期VVC组、妊娠期健康组和非妊娠期VVC组阴道内惰性乳杆菌检出率分别为8．3％，62．5％，6．5％，妊娠期VVC组与妊娠期健康组比较，差异有统计学意义；卷曲乳杆菌检出率分别为83．3％，66．7％和79．0％，3组比较，差异无统计学意义；嗜酸乳杆菌检出率分别为50．0％，58．3％和16．1％，妊娠期VVC与非妊娠期VVC比较，差异有统计学意义；（2）妊娠期健康组、妊娠期VVC组和非妊娠期VVC组卷曲乳杆菌产H2O2的量分别为（2．5±0．2）mmol／L，（2．0±0．1）mmol／L和（2．0±0．1）mmol／L，妊娠期健康组卷曲乳杆菌产H2O2功能强于妊娠期VVC组和非孕期VVC组，差异有统计学意义，妊娠期VVC组与非妊娠期VVC组卷曲乳杆菌产H2O2功能比较，差异无统计学意义；（3）妊娠期健康组、妊娠期VVC组和非妊娠期VVC组卷曲乳杆菌产酸能力分别为（7．1×10^-5±3．1×10^-5）mol／L、（5．9×10^-5±2．5×10^-5）mol／L和（4．5×10^-5±2．0×10^-5）mol／L，妊娠期健康组分离的乳杆菌产酸能力强于妊娠期VVC组，妊娠期VVC组分离的乳杆菌产酸能力强于非孕期VVC组，差异均有统计学意义。结论惰性乳杆菌可能是阴道微环境改变的一个标志物；卷曲乳杆菌均为3组女性阴道内优势菌；尽管VVC患者阴道内卷曲乳杆菌检出率无减少，但卷曲乳杆菌的产H2O2和产酸能力下降。; 周丹崔颖张瑞廖秦平; 关键词：乳杆菌外阴阴道假丝酵母菌病妊娠酸碱度过氧化氢

激光共聚焦显微镜观察阴道来源乳杆菌生物膜的形成被引量：2: 2015年; 目的：采用激光共聚焦显微镜技术动态观察一株女性阴道来源卷曲乳杆菌生物膜的形成过程。方法：使用体外盖玻片生物膜培养法,培养阴道来源卷曲乳杆菌的生物膜,在培养2、4、8、12、16、20、24、48、72、96、120 h后取出盖玻片,用异硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白A（fluorescein isothiocyanate-conjugatedconcanavalin A,FITC-con A）和碘化丙啶（andpropidium,PI）双重免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜（confocal laser scanning microscopy,CLSM）观察卷曲乳杆菌生物膜形成过程与特点。结果：获得生物膜形成过程不同时间点的CLSM图像,观察到卷曲乳杆菌在4h即开始有散在的细菌黏附于盖玻片上,为可逆吸附期;8~20 h细菌黏附量逐渐增加,进入不可逆吸附期,20 h细菌聚集成团,生物膜初步形成;24~48 h形成大片的生物膜菌落,细菌镶嵌在大量多糖基质中,结构紧密,形态稳定,生物膜成熟;72 h后生物膜菌落开始解聚。培养20 h乳杆菌生物膜密度为42.7×10-3±6.83×10-3,24 h上升为102.5×10-3±23.14×10-3,两者相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,表明培养24 h乳杆菌生物膜形成。结论：该株阴道来源卷曲乳杆菌在体外可形成生物膜,24 h可形成成熟的生物膜,72 h生物膜开始解聚再定植。; 吴丽杰王奔廖秦平张瑞; 关键词：乳杆菌属阴道

利用DNA指纹图谱技术对健康女性阴道菌群多样性的分析被引量：22: 2012年; 目的:利用DNA指纹图谱技术——变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)分析我国育龄期及绝经期健康女性阴道菌群多样性,为了解各种下生殖道感染疾病状态下的微生态环境奠定基础,为研制适合恢复中国女性正常阴道微生态环境的微生态制剂提供依据。方法:选取2009年10月至2010年1月在北京大学第一医院妇产科门诊常规体检的健康女性(其中育龄期30例、绝经后30例)为研究对象。采集阴道分泌物,提取细菌总DNA,采用通用引物对细菌16S rDNA基因的V3区进行扩增,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳,通过对DGGE特征条带切胶回收并进行克隆测序,利用GenBank中的Blast与已知序列比对,鉴定细菌菌种,分析不同生理状态下阴道菌群的多样性。结果:(1)我国育龄期健康女性阴道常见菌种为:卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)、惰性乳杆菌(Lactobacillus iners)和加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri),其中惰性乳杆菌是以往通过传统培养方法尚未认识到的阴道优势菌种。(2)绝经期健康女性阴道菌种与育龄期不同且复杂,常见菌种有:惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌(Escherichia coli)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、解没食子酸链球菌(Streptococcusgallolyticus)、韦荣球菌属(Veillonella sp.)、中间链球菌(Streptococcus intermedius)、咽颊炎链球菌(Streptococcus angi-nosus)、普雷沃氏菌属(Prevotella sp.)、气球菌(Anaerococcus lactolyticus)和脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)。结论:通过DGGE分析发现我国育龄期健康女性阴道常见优势菌种为:卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、加氏乳杆菌;绝经期健康女性阴道常见优势菌种为:惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌、链球菌属、普雷沃菌属、脆弱拟杆菌以及产乳酸的韦荣球菌、气球菌属,并首次发现在不同生理状态下惰性乳杆菌均是阴道优势菌种之一。; 肖冰冰廖秦平; 关键词：阴道变性梯度凝胶电泳女性

妇肤康喷雾剂对阴道常见微生物增殖影响的体外研究被引量：9: 2014年; 目的体外了解妇肤康喷雾剂溶液对阴道常见的益生乳杆菌和致病菌的影响,为阴道感染疾病提供药物应用的理论依据,指导临床用药。方法对从中国健康妇女阴道分离的乳杆菌、ATCC阴道来源的加德纳菌和白色念珠菌进行体外培养,以中药制剂妇肤康喷雾剂作为培养基,通过绘制生长曲线,评价妇肤康溶液对阴道常见微生物的影响。结果妇肤康实验组中,乳杆菌和白色念珠菌生长曲线随着时间延长轻微下降。加德纳菌在15 h后可完全杀灭。结论体外培养时,妇肤康溶液轻微抑制乳杆菌生长,其能够抑制白色念珠菌生长,可以杀灭加德纳菌。; 王奔肖冰冰那日苏牛小溪韦晓煜张瑞廖秦平; 关键词：阴道乳杆菌加德纳菌白色念珠菌

出生24小时内女婴阴道分泌物乳杆菌的研究被引量：1: 2015年; 目的了解出生后24h内女婴阴道分泌物的乳杆菌带菌状态。方法选取2011年8月至2011年12月在北京大学第一医院足月分娩的女婴,剖宫产和阴道分娩的足月女婴各30例,剖宫产中胎膜早破22例,宫内感染2例;阴道分娩中胎膜早破18例,宫内感染9例,于出生后24h内取女婴阴道分泌物,分别行涂片革兰染色镜检及提取DNA使用乳杆菌属特异性引物行PCR扩增,分析阴道菌群状况。结果所有样本涂片行革兰染色镜检均未见革兰阳性杆菌,提取DNA行PCR扩增,均未见到明显条带。结论生后24h的女婴阴道分泌物为无乳杆菌状态。; 韦晓昱肖冰冰廖秦平; 关键词：女婴阴道分泌物乳杆菌

阴道内乳杆菌对阴道加德纳菌生物膜影响的初步研究被引量：3: 2015年; 目的：研究阴道加德纳菌（GV）生物膜体外生长过程及阴道来源乳杆菌对GV生物膜的影响。方法：选取GV标准菌株（ATCC14018）体外培养生物膜,在成膜的不同时期检测生物膜生成量及观察生物膜生成形态。选取阴道来源乳杆菌1#（鼠李糖乳杆菌）、2#（乳酪乳杆菌）,分别在GV生物膜生成后的0h、24h、48h加等量乳杆菌共培养24h,用Live/Dead荧光染色剂染色,观察GV生物膜生成情况。结果：（1）同一培养条件下,GV生物膜生成不同时期的OD值有明显差异（P〈0.05）。电镜扫描图片显示,培养4～20h时见散落的单菌落,24h时单独菌落开始连接,48h时形成连接的菌落外面包裹一层胞外聚合物,48h后形态无变化。（2）GV生物膜的荧光染色显示,阴道内乳杆菌对抗生长后0h、24h时,GV生物膜厚度减少,形成松散的菌落,以乳杆菌为主;对抗生长后48h,菌落密度无变化,死菌面积增大,活菌以乳杆菌为主。结论：（1）阴道GV生物膜形成较缓慢,开始成膜时间约为培养后24h,约在48h后形成成熟的生物膜。（2）阴道内乳杆菌可干扰GV生物膜的形成,不同乳杆菌对不同时期GV生物膜的作用不同。; 那日苏牛小溪肖冰冰王奔张瑞霍丽丽刘朝晖廖秦平; 关键词：阴道加德纳菌生物膜乳杆菌细菌性阴道病

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国家自然科学基金(81170535)

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