国家自然科学基金(30972630)
- 作品数：8 被引量：37H指数：5
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- 肠道病毒71型重组VP2蛋白原核表达及初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的利用大肠杆菌表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP2蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法 PCR扩增EV71 VP2基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体形成pET32a(+)/VP2,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达产物,利用Ni+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经Western blot初步验证其抗原性。结果成功构建pET32a(+)/VP2重组质粒,经大肠杆菌表达,纯化获得相对分子质量约为48000的融合蛋白,经Western blot证实其抗原性良好。结论表达并鉴定了VP2抗原,为EV71疫苗研制及检测试剂盒的研发奠定了基础。
- 施静朱冰钟家禹王长兵许甜甜
- 关键词：肠道病毒71型VP2蛋白原核表达
- 广州地区2011—2013年儿童呼吸道合胞病毒流行特征分析被引量：2
- 2015年
- 目的了解广州地区2011—2013年急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒（RSV）的流行情况。方法用实时荧光PCR方法对本院收治的27116例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本进行RSV检测。随机取30例RSV阳性标本，扩增其G基因并测序。从30例阳性标本中随机取3例，扩增RSV全基因组并测序。结果27116例标本中共检出RSV阳性4421例，阳性率为16．30％（4421127116）。30株测序标本中，21株属于NA1型，2株属于ON1型，7株属于BA9型。27株G基因的GenBank登陆号是KM586819～KM586845。3株全基因组的GenBank登陆号是KM517572、KM578843、KM517573。结论RSV是引起2011—2013年广州地区儿童急性呼吸道感染的重要病原体。NA1型和BA9型分别是RSVA、B亚型的优势基因型。
- 谢嘉慧华亮钟家禹张莹莹陈翊刘晓敏连广琬周珍文朱冰
- 关键词：呼吸道合胞病毒G蛋白基因组儿童
- RD细胞肠道病毒71型受体的筛选被引量：2
- 2012年
- 目的筛选和鉴定RD细胞能与肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白结合的受体蛋白,为进一步深入研究EV71病毒受体特性和功能提供实验依据。方法提取RD细胞膜蛋白,双向凝胶电泳分离RD细胞膜蛋白后,通过Far-western印迹实验筛选能与EV71病毒VP1蛋白相互作用的RD细胞膜蛋白,同时设立阴性对照,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对特异性结合的蛋白点进行鉴定。结果通过Far-western印迹检测,从RD细胞筛选到4个能与EV71结合的蛋白点;质谱分析仅鉴定出一个膜蛋白,即stomatin-like protein2(SLP-2)。结论至少有4个蛋白可以与EV71的VP1蛋白相互作用,其中RD细胞膜上的SLP-2蛋白能够与EV71病毒的VP1特异性结合,可能是EV71病毒候选受体或受体辅助分子之一,其在EV71病毒感染RD细胞过程中的作用有待进一步研究。
- 胡小云王长兵朱冰钟家禹邝璐
- 关键词：肠道病毒71型双向电泳飞行时间质谱SLP-2
- RD细胞上EV71病毒候选受体的筛选
- 目的筛选和鉴定RD细胞膜上能与肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白结合的受体蛋白,为进一步深入研究EV71病毒受体特性和功能提供实验依据。方法提取RD细胞膜蛋白,双向凝胶电泳分离RD细胞膜蛋白后,通过Far-wester...
- 胡小云王长兵朱冰钟家禹邝璐
- 关键词：肠道病毒71双向电泳飞行时间质谱SLP-2
- 文献传递
- 2013-2014年广州地区住院儿童急性呼吸道感染病毒病原学及临床特点分析被引量：5
- 2016年
- 目的 了解广州地区急性呼吸道感染（ARI）患者常见病原体的感染状况.方法 于2013-2014年在广州市妇女儿童医疗中心收集5053例ARI患儿咽拭子标本各一份,采用荧光PCR方法检测九种呼吸道病原体.结果 5053份标本,至少检出一种病毒阳性的为1602例（31.7%）;感染前三位的病原为合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、鼻病毒（RHV）,感染率分别为9.46%、7.05%、4.87%;其次为博卡病毒（HBOV）、甲型流感病毒（IVA）、副流感病毒（PIV）、肠道病毒（EV）、偏肺病毒（HMPV）及乙型流感病毒（IVB）,感染率分别为4.20%、3.70%、1.72%、1.44%、1.29%及1.07%;男女性别比为：1.16：1,中位年龄1岁5个月,不同性别、不同年龄组感染均存在差异;单一感染、双重感染及三重感染率分别为90.70%、8.86%及0.44%,合胞病毒最易发生混合感染,其中最常见的感染组合为RSV＋ADV;感染呈季节分布,不同季节感染率存在差异,其中春季最高（39.21%）、秋季最低（25.75%）.病毒检测阳性患儿中发热、咽痛、咳嗽、呼吸困难、肺听诊异常分别占90.14%、41.20%、71.16%、29.46%、48.25%、42.45%.结论 ARI患儿中病毒感染较为常见,前三位的病原体为RSV、ADV、HBOV,临床防控和治疗应引起足够重视.混合感染是一种常见的感染模式,然而其与单一感染在疾病进展上无差异.
- 郭敏陈翊肖密丝张盈盈赵明奇连广琬朱冰
- 关键词：病毒急性呼吸道感染儿童
- 2010年广州地区儿童肠道病毒71型感染的分子流行病学研究被引量：5
- 2011年
- 目的了解广州地区2010年肠道病毒(EV)71病毒流行状况。方法设计肠道病毒71型实时荧光RT-PCR引物和TaqMan探针,运用TaqMan实时荧光RT-PCR技术,对2010年全年来医院就诊的疑似手口足病患儿送检标本20150份,进行肠道病毒71型荧光RT-PCR检测,同时,设计了扩增EV71病毒全基因组的引物,随机选取了5株病毒进行全基因组进行测定。结果在20150份临床标本中,EV71病毒的阳性为4780份,全年总的检出率为23.72%,每个月均有阳性检出;其中,EV71病毒阳性率较高的为4～7月份,最高检出率为6月份,达32.19%,最低检出率为10月份,为7.91%;扩增了5株广州株EV71病毒全基因组全长序列,提交到GenBank上,将5株广州株EV71病毒与EV71的A、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4型及阜阳株全基因组核苷酸序列进行ClustalW比较,发现与C4a型阜阳株等同源性为98.00%～99.00%,与C4b同源性为91.00%～93.00%,与C1-C3同源性为82.00%～83.00%,与B3、B4、B5同源性为81.00%～83.00%,与A型同源性为80.00%。结论 2010年广州地区手足口病的主要病原是肠道病毒71型,EV71病毒在2010年全年还是较普遍流行,全基因组序列分析表明,2010年分离的5株广州株EV71病毒属于C4a型。
- 朱冰钟家禹邝璐华亮肖密丝陈翊谢嘉慧张莹莹
- 关键词：肠道病毒71型流行病学
- 肠道病毒71型的快速纯化及其鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种简单、快速有效的从细胞培养物中纯化肠道病毒71(EV71)的方法。方法 EV71病毒在恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中增殖后,将获得的细胞培养物经反复冻融、聚乙二醇6000沉淀、超速离心、氯化铯垫层超速离心的方法纯化病毒。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和透射电镜(TEM)的方法对纯化病毒进行鉴定,并测定其感染性的滴度及回收率。结果 SDS-PAGE显示出3个条带,相对分子质量分别为3.6×103、3×103和2.6×103与EV71的VP1、VP2和VP3相符合。Westernblot证实为EV71特异性条带。经磷钨酸负染后电镜观察,能看到典型病毒颗粒。采用终浓度为10%的聚乙二醇6000沉淀后的病毒的感染性回收率为82.0%,再经氯化铯垫层超速离心后浓缩病毒的感染性回性率为29.0%。结论聚乙二醇6000沉淀结合氯化铯垫层超速离心的方法比氯化铯密度梯度区带离心方法更简便,易于操作,并且比单独聚乙二醇6000沉淀有更高的纯度,是一种简便、有效的病毒纯化方法。
- 胡小云朱冰王长兵邝璐肖密丝
- 关键词：肠道病毒71型病毒纯化超速离心
- 2008年和2010年肠道病毒71型广州分离株全基因组序列分析被引量：10
- 2011年
- 目的研究2008年和2010年广州地区手足口病患者中肠道病毒7l型（EV71）病毒全基因组序列的基因型与变异特点。方法参照GenBank上EV71深圳株SHZH03（AY465356）基因组设计分段扩增引物，进行RT-PCR分段扩增EV71病毒基因组，PCR产物直接进行序列测定，用Clustal W／X、DNASTAR、MEGA4．1等软件分析基因组序列。结果克隆9株广州株EV71，病毒全基因组全长序列均为7405bp，提交到GenBank上的序列号为HQ456305、HQ456306、HQ456307、HQ456308、HQ456309、HQ456310、HQ456311、HQ456312、HQ4563i3。将9株广州株EV71与EV71的A、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4型及阜阳株全基因组核苷酸序列进行ClustalW比较，发现与C4a型阜阳株等同源性为98％～99％，与C4b同源性为91％～93％，与c1～c3同源性为82％～83％，与B3。B5同源性为81％～83％，与A型同源性为80％。将9株广州分离株EV71的VP1基因与EV71病毒A、B、C型进行ClustalW比较，同样是与C4a为98％-99％，与C4b同源性为92％～94％，与C1-C3的同源性为88％～89％，与B1～B5型同源性为83％～84％，与A型同源性为81％～82％。将9株广州株与EV71的A、B、C型VP1基因氨基酸序列进行Clustal W比对，发现VPI基因22位点的谷氨酰胺转变为组氨酸（0-H），聚合蛋白中213位点（S—T）和1764位点（V—I）也发生了氨基酸的点突变，P的213位点属于VP2基因，1764位点属于3D基因。结论2008年和2010年分离的9株广州株EV71属于C4a型，与阜阳株同源性为98％～99％，VP1基因22位点发生了点突变，聚合蛋白中213位点和1764位点也发生了氨基酸的点突变。
- 钟家禹朱冰华亮王长兵邝璐谢嘉慧陈翊
- 关键词：肠道病毒71基因组点突变
- 手足口病与心肌酶谱变化的关系被引量：9
- 2017年
- 目的探讨手足口病患儿心肌酶谱变化规律及其临床意义。方法收集南方医科大学珠江医院175例手足口病患儿双份血清及肛拭子标本。60例近期无特殊病史的体检儿童作为对照组,并收集其血清标本。肛拭子标本进行肠道病毒核酸检测,包括肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A16型(CA16)。血清标本进行心肌酶谱检测,包括谷草转氨酶(AST)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)。结果 175例手足口病人肛拭子标本核酸检测,EV71阳性95例,CA16阳性34例,其它肠道病毒阳性46例。手足口病患儿组急性期心肌酶谱异常率高于正常对照组。心肌酶谱异常率最高的指标为LDH(84.57%),其后依次为CK-MB(62.29%)、CK(50.29%)、HBDH(43.43%)、AST(25.71%)。不同肠道病毒组急性期与恢复期不同心肌酶谱指标差异有统计学意义(P<0.05)。普通组与重症组比较,心肌酶谱各项指标差异均无统计学意义。结论心肌损伤为手足口病患儿较为常见的并发症,EV71感染较CA16感染更易引起心肌损伤。急性期心肌酶谱水平不能作为是否进展为重症手足口病的早期预警指标。
- 郭敏余楠肖密丝张盈盈赵明奇连广琬朱冰
- 关键词：手足口病心肌酶谱儿童
