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小鼠整合素β_7基因克隆、序列分析及突变修复: 2007年; 目的:克隆小鼠整合素β7基因cDNA,同时对其序列进行分析,对造成氨基酸突变的碱基进行定点突变修复。方法:采用RT-PCR的方法,从小鼠小肠PP结获得β7基因cDNA,克隆到pMD19-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定,对造成氨基酸突变的碱基进行定点突变修复。结果:扩增得到的β7基因cDNA为2418bp,编码806个氨基酸,与GenBank中公布的序列比较,有10个碱基发生突变,其中造成氨基酸发生改变的有5个碱基,涉及3个氨基酸,对发生突变的5个碱基进行定点突变修复。结论:获得小鼠整合素β7基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。; 王永明胡燕黎海芪; 关键词：基因克隆 RT-PCR

人CTLA4Ig基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：2: 2007年; 目的:用AdEasy腺病毒载体系统构建CTLA4Ig重组腺病毒,以感染树突状细胞使其递呈抗原至T淋巴细胞功能受阻.方法:双酶切、凝胶回收方法从质粒pCDM8-CT-LA4Ig提取目的基因CTLA4Ig,构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CTLA4Ig;经酶切线性化后的pAdTrack-CTLA4Ig与AdEasy-1进行同源重组,经酶切线性化转染入HEK293细胞进行包装.结果:卡那霉素抗性筛选和PacⅠ酶切确证重组腺病毒质粒pAd-CTLA4Ig,PacⅠ酶切产生30kb和4.5kb2个片断为同源重组.重组腺病毒质粒经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获病毒并制备出高滴度重组腺病毒(病毒滴度为1.6×109).结论:成功构建了携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,为利用CTLA4Ig基因转染树突状细胞的基因治疗奠定了基础.; 王永明胡燕黎海芪; 关键词：CTLA4IG基因腺病毒科

小鼠整合素α_4基因克隆、序列分析及突变修复: 2007年; 目的克隆小鼠整合素α4基因cDNA,进行分析整合素α4基因序列,对造成氨基酸突变的碱基进行定点突变修复。方法从小鼠小肠peyer’s结获得α4基因cDNA,采用RT-PCR方法,克隆到pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定,对造成氨基酸突变的碱基进行定点突变修复。结果扩增得到的α4基因cDNA为3099bp,编码1032个氨基酸,与GenBank中公布的序列比较,有12个碱基发生突变,其中6个碱基造成6个氨基酸发生改变,对发生突变的6个碱基进行定点突变修复。结论获得小鼠整合素α4基因的克隆。; 王永明胡燕黎海芪; 关键词：基因克隆 RT-PCR

致耐受性树突状细胞预防和治疗卵清蛋白过敏小鼠的作用比较: 目的：比较腺病毒重组CTLA4Ig/α4β7诱导的耐受性树突状细胞对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的预防和治疗效果.方法：BALA/c小鼠32只，分为4组.基础致敏24小时后回输耐受性DC为预防组；肠道激发4小时后回输耐受性...; 王丽胡燕程茜王永明; 关键词：食物过敏耐受性树突状细胞免疫治疗

儿童食物过敏免疫治疗研究进展被引量：2: 2008年; 儿童食物过敏的发生率逐年增加，目前对食物过敏的治疗主要是缓解症状而难以治愈。随着分子免疫学的发展及对食物过敏发生机制等的深入研究，一些行之有效的治疗措施正应用于临床。该文就食物过敏的免疫治疗方法，包括T细胞肽及重组致敏蛋白突变免疫疗法、免疫刺激的DNA序列、辅助T细胞激活作用的抑制、过敏诱导的细胞因子的抑制及炎性细胞迁移的抑制等作一综述。; 王丽胡燕程茜; 关键词：食物过敏免疫疗法

耐受性树突状细胞预防和治疗卵清蛋白过敏小鼠的的研究: 2011年; 目的比较腺病毒重组CTLA4Ig/α4β7诱导的耐受性树突状细胞对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的预防和治疗效果。方法 BALA/c小鼠32只,分为4组。基础致敏24 h后回输耐受性树突状细胞为预防组;肠道激发4 h后回输耐受性树突状细胞为治疗组;回输生理盐水为阴性对照组和OVA过敏小鼠为阳性对照组。观察各组小鼠过敏症状缓解情况;HE染色观察空肠形态;甲苯胺兰染色观察小肠固有层肥大细胞聚集及脱颗粒现象;ELISA测定各组血清中OVA特异性IgE水平。结果与阳性对照组相比,治疗组小鼠OVA特异性IgE水平显著降低(0.25±0.05 vs 0.17±0.03)(P<0.05);体重增长明显(3.16 g±0.75 g vs 5.04 g±0.49 g)(P<0.05);腹泻症状减轻;HE染色可见治疗组小肠绒毛中上皮细胞局灶性坏死、脱落,固有层炎症细胞浸润现象明显改善;肥大细胞聚集和脱颗粒现象改善。而预防组较阳性对照组过敏症状、小肠形态学及OVA特异性IgE水平差异均无统计学意义。结论 Ad CTLA4Ig/Adα4β7修饰的致耐受性树突状细胞对卵清蛋白过敏小鼠具有治疗作用而无预防作用。; 王丽胡燕程茜王永明; 关键词：食物过敏耐受性树突状细胞免疫治疗

三个拟南芥抗盐基因在玉米基因组中整合、表达及抗盐性能的研究被引量：11: 2008年; 【研究目的】以玉米优良自交系综31和178的幼胚为受体,利用农杆菌介导法将拟南芥3个耐盐基因(SOS1(SALT OVERLY SENSITIVE1)、SOS2(SALT OVERLY SENSITIVE2)和SOS3(SALTOVERLY SENSITIVE3))一起转入玉米基因组中。【方法】利用愈伤的耐盐性比较和PCR检测研究耐盐基因在玉米基因组中的整合情况,并对转基因植株进行了表型分析。【结果】早期转化的抗性愈伤耐盐性比较表明,抗性愈伤比非转基因对照愈伤耐盐性明显增强,后期表型观察分析,转基因植株比对照根系发达,根冠比增大。PCR检测结果表明,同时含有三个目的基因的阳性植株占4.63%,含有两个目的基因的阳性植株占5.56%,至少含有一个目的基因的阳性植株占11.11%。【结论】表明将多个目的基因可以同时转入玉米中已成为可能,为快速培育出优质、多抗的玉米品种奠定了基础。; 程艳松杨会侯丽宏陈章良康定明; 关键词：玉米自交系耐盐鉴定

耐受性树突状细胞治疗卵清蛋白致敏小鼠的实验研究被引量：4: 2010年; 目的将重组AdCTLA4Ig/Adα4β7诱导的耐受性树突细胞（DC）回输于卵清蛋白（OVA）致敏小鼠体内,观察其对食物过敏小鼠的治疗效果,为临床治疗儿童食物过敏提供新的思路.方法建立BALB/c小鼠食物过敏模型.BALB/c雌鼠24只,分为3组：肠道激发4 h后回输耐受性DC为治疗组,回输生理盐水为阴性对照组和OVA过敏小鼠为阳性对照组.ELISA测定各组血清中OVA特异性IgE水平;HE染色观察空肠形态;免疫组化法检测小鼠小肠组织中白介素10（IL-10）;免疫荧光法检测转化生长因子β（TGF-β）表达水平.结果 ELISA法检测小鼠血清中OVA特异性IgE水平阳性对照组为（0.25±0.05）、阴性对照组为（0.14±0.04）、治疗组为（0.17±0.03）.治疗组较阴性对照组小鼠差异无统计学意义（P＞0.05）,而较阳性对照组过敏小鼠明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.HE染色可见治疗组小肠绒毛中上皮细胞局灶性坏死、脱落,固有层炎症细胞浸润现象明显改善;IL-10表达增高.各组TGF-β表达无差异.结论 AdCTLA4Ig/Adα4β7修饰的耐受性DC对卵清蛋白过敏小鼠具有治疗作用,可以减轻肠道炎症反应,促进免疫耐受形成.; 王丽胡燕程茜; 关键词：食物过敏树突细胞

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国家自然科学基金(30400408)