国家自然科学基金(30871112)
- 作品数：8 被引量：82H指数：6
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- 一个类孟买血型家系的α1,2岩藻糖基转移酶基因突变分析被引量：10
- 2010年
- 目的 研究1个中国人类孟买型血型家系的分子遗传背景.方法 以血型血清学方法鉴定先证者及其家系的红细胞ABO和H表型,应用聚合酶链反应扩增类孟买表型家系的ABO基因第6、7外显子和α1,2岩藻糖基转移酶基因（α-1,2-fucosyltransferase,FUT1）编码区,PCR产物直接测序分析,并通过克隆测序法对存在FUT1基因复合杂合的样本进行单倍体序列分析.结果 通过血清学技术在9个家系成员中鉴定了3个类孟买型,直接测序发现先证者FUT1基因存在35C/T、235G/C和682A/G复合杂合.单倍体序列分析表明先证者的FUT1基因型为h235c/h35T＋628G.其中h235C等位基因引起α1,2岩藻糖基转移酶G79R替换,h35＋628G等位基因引起α1,2岩藻糖基转移酶A12V和M228V替换.结论 在中国人群中发现一种新的类孟买表型相关的FUT1基因突变235G〉C.
- 许先国洪小珍刘瑛应燕玲陶苏丹和艳敏朱发明吕杭军严力行
- 关键词：类孟买型FUT1基因
- ABO血型新等位基因Ael08的分子生物学研究被引量：14
- 2011年
- 目的研究ABO新等位基因Ael08的分子机制。方法利用单克隆抗体检测先证者标本红细胞ABO血型抗原，标准A、B、O红细胞检测血清中的ABO抗体，吸收放散试验检测红细胞上微量抗原；采用PCR技术扩增先证者ABO基因的第5～7外显子序列，PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子；扩增产物经TOPOTA克隆到质粒载体中获得单链，对所得克隆作ABO基因第6、7外显子双向测序分析；家系调查采集先证者父亲和哥哥的标本作血型血清学试验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞上表达很弱的A抗原，只有通过吸收放散才能有效检出，同时其血浆中存在较强的抗-B和较弱的抗-A；直接测序分析发现：6号外显子第261位缺失杂合，7号外显子第297位A／G、467C／T、646T／A、681G／A、771C／T、829G／A、804insG／G杂合；克隆测序发现1个为常见的002等位基因，另1个为1种新的等位基因（已被dRBCNCBI命名为Ae抑8），与A102比较，Ael08在第804位碱基处插入G，这导致氨基酸第268位后阅读框架发生改变，编码产物比正常A1转移酶多37个氨基酸。家系调查显示：先证者Ael08等位基因从父亲遗传所得。结论发现1个ABO新等位基因Ael08，α-1，3-N．乙酰半乳糖胺基转移酶基因（A基因）第804位碱基处插入G突变导致产生Ael表型。
- 吕杭军洪小珍应燕玲许先国朱发明严力行
- 关键词：ABO基因抗-A
- 一例ABO亚型ABx09的撒物学研究和鉴定被引量：19
- 2011年
- 目的研究1例ABO亚型ABx09的分子机制。方法应用单克隆抗体检测先证者红细胞AB0血型抗原，标准A、B、0红细胞检测先证者血清中的ABO抗体，采用聚合酶链反应（polymerase chainrea ction，PCR）技术分别扩增先证者ABO基因的第1～7外显子序列，PCR产物经酶切后直接测序分析。第5～7外显子扩增产物经TOPOTA克隆到质粒载体中获得单链，对所得克隆进行AB0基因第5～7外显子双向测序分析。家系调查采集先证者父母的标本进行血型血清学实验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞有A、B抗原，同时血清中存在抗B抗体。直接测序分析发现第6外显子第261位无缺失、第297位AG，第7外显子467CT、526CG、657CT、703GA、796CA、803GC、889GA、930GA杂合，可指定为A102Bx09基因型。克隆测序得到两个等位基因A102和Bx09。与B101序列相比，Bx09第889位G—A，导致第297位谷氨酸变成赖氨酸。家系调查显示先证者Bx09等位基因从母亲遗传所得。结论α-1，3-半乳糖基转移酶基因第889位G—A突变导致产生Bx09表型，其血清中可含有抗B抗体。
- 洪小珍应燕玲许先国马开荣兰小飞刘瑛朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因抗B抗体
- 人ABO基因5’非翻译区的基因克隆和序列分析被引量：2
- 2011年
- 目的建立ABO基因5’非翻译区（5’untranslated region，5’-UTR）长片段的序列分析方法，研究5CUTR的基因多态性，为揭示AB0基因上游转录调控的分子机制提供基础。方法以血型血清学方法和分子生物学方法鉴定30名献血者的ABO表型和第6和7外显子基因型，采用PCR长片段扩增技术得到ABO基因5＇-UTR约5kb产物，直接进行双向测序分析，并通过克隆对ABO基因5＇-UTR存在杂合的样本进行单倍型分析。结果在表型和基因型相符合的样本中，直接测序法在5＇-UTR共发现20个多态性位点，包括16个单核苷酸多态性位点、1个6bp重复序列插入／缺失多态性、1个8bp重复序列缺失多态性、1个36bp插入多态性、1个43bp重复序列多态性，其中11个为新发现的多态性位点。单倍型分析确定这些变异位点的顺／反式连锁关系，发现ABO基因5＇-UTR的7种单倍型序列组合。结论人ABO基因5＇-UTR具有序列多态性，启动子近端的序列相对保守。
- 刘瑛许先国马开荣兰小飞洪小珍朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO血型基因型单倍型多态性
- ABO血型新等位基因O61的分子生物学研究被引量：6
- 2010年
- 本研究探讨ABO新等位基因O61的分子机制。利用单克隆抗体检测标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测标本血清中的ABO抗体。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增ABO基因的第5至7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子。1例B表型标本采用基因组单链抽提技术分离杂合基因型标本的2条单体型,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析。结果表明,在417例标本中发现3个标本743位碱基发生突变,其中2例表型为O型,1例为B型。2例O型直接测序分析显示,6和7外显子有261G缺失及743G/C杂合。1例B型直接测序结果为261G/缺失及297A/G、526C/G、743G/C、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A杂合。采用基因组单链抽提技术将B型标本的两条单体型进行分离,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析,结果显示,2条链分别为B101和突变的O型。将突变的新O型基因提交血型抗原基因突变数据库,被正式命名为O61。结论:ABO基因7号外显子743G>C为1个新的突变点,发现1个ABO新等位基因O61。
- 陶苏丹和艳敏应燕玲洪小珍许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因测序
- 一例ABO血型系统B抗原减弱表达的分子机制被引量：18
- 2011年
- 目的研究1例B抗原减弱献血者的血清学特性和抗原减弱的分子机制。方法应用单克隆抗体检测献血者红细胞ABO血型抗原，标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体，并检测其血清转移酶活性。采用聚合酶链反应技术扩增ABO基因全部外显子序列和5′端非编码区序列并进行测序分析，应用逆转录-PCR和克隆测序技术分析献血者ABO cDNA转录剪接情况，采用重亚硫酸盐转化直接测序法分析ABO基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果献血者血清学表现为B抗原明显减弱，血清中无抗-B抗体，B转移酶活性降低。基因型为B101／O01，全部外显子序列和拼接接受位点碱基无任何突变。5′端非编码区序列多态性符合B101／O01的特征，启动子、增强子、负调控序列和微卫星重复序列未发现异常。献血者存在ABO基因全长cDNA转录本，未发现新的转录剪接体。与正常对照标本比较，在启动子区CpG岛内发现启动子附近有多个特异性半甲基化位点。结论启动子区CpG岛中的甲基化位点可能是引起B抗原弱表达的原因。
- 应燕玲陶苏丹和艳敏许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因甲基化表观遗传
- 一种ABx变异型相关的B糖基转移酶基因新突变研究被引量：5
- 2012年
- 目的研究1例ABO血型系统ABx变异型的分子遗传背景。方法用血型血清学技术鉴定1例AB0血型疑难样本的红细胞表型和唾液血型分泌物质，并用聚合酶链反应分别扩增先证者ABO基因全编码区共7个外显子及侧翼内含子序列，扩增产物经双酶切纯化后直接进行双向测序分析。进一步对存在突变位点的第6～7外显子扩增产物经进行TA克隆和单倍体序列分析。结果先证者红细胞ABO抗原表达为A强B弱，结合其它血清学特征，鉴定其血型为罕见的ABx变异型。ABO基因全编码区测序发现9处核苷酸杂合位点，分别为第6外显子的297A／G杂合，第7外显子的467C／T、526C／G、657C／T、703G／A、796C／A、803G／C、808T／A、930G／A杂合。单倍体序列分析发现，其中一个等位基因为常见的A102，另一个等位基因除808T〉A突变外，其它变异位点与B101等位基因一致。808T〉A突变可导致B糖基转移酶第270位苯丙氨酸转变为异亮氨酸。结论B糖基转移酶基因808T〉A突变可能引起酶活性减弱，并进而导致产生Bx变异型。
- 胡文健傅广成许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO血型基因突变
- B（A）血型分子机制研究及其家系分析被引量：15
- 2010年
- 目的研究罕见B（A）血型的血清学特性和分子机制，为B（A）血型的临床输血提供理论基础。方法利用单克隆抗体检测1例先证者、家系成员及献血者红细胞ABO血型抗原，用标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体。采用盐水法、凝聚胺法和抗球蛋白法进行先证者与献血者交叉配合试验。采用PCR技术扩增ABO基因的第6、7外显子序列，对先证者、家系成员、献血者标本的ABO基因外显子6、7和侧翼内含子序列进行测序分析，并对先证者标本进行单倍体序列分析。结果先证者及其2位家系成员红细胞上有A、B抗原，同时血清中存在抗A1抗体，血清学表型为A2B。直接测序分析发现先证者标本第6、7外显子存在261G／del、297A／G、526C／G、657C／T、700C／G、703A／G、796A／C、803G／C、930A／G杂合，可推断为B（A）02／O01基因型杂合子；家系中其母亲基因型为B（A）02／B101，外祖母为B（A）02／O01.先证者单倍体序列分析得到2个等位基因B（A）02：和O01；与B101序列相比，B（A）02第700位C〉G，导致1个氨基酸改变：第234位脯氨酸变成丙氨酸。既往血清学特性为A：B的2个献血者，1个基因型为B（A）02／O01，另1个基因型是A208／B101.B（A）血型先证者与这2名献血者进行交叉配血试验均相合，临床输注后无不良反应。结论α-1，3-半乳糖基转移酶等位基因（B等位基因）700C〉G突变可导致形成B（A）血型，其血清学特性显示为A2B表型。B（A）血型临床输血相配合的供者可选择A，B表型的献血者。
- 洪小珍许先国马开荣兰小飞朱发明严力行
- 关键词：ABO血型系统血型不合系谱
