吉林省科技发展计划基金(20030405)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：于海鹏李娟刘丹王志武盛军更多>>
- 相关机构：长春生物制品研究所吉林大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 培养条件对HBsAg转基因人参细胞的生长及表达量的影响
- 1.方法1.1 HBsAg转基因人参细胞的培养选用不含植物激素的67-V培养基为基本培养基,分别用葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖作为碳源;硝酸钾、硫酸铵作为氮源;乳清蛋白酵母浸出物和谷氨酸作为有机成分;并设计了
- 李娟盛维瑾刘大为刘丹盛军
- 文献传递
- 表达乙肝病毒表面抗原人参细胞系统的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统。方法构建含有HBsAg基因的植物细胞表达载体质粒pBIBSb。采用农杆菌感染人参细胞的方法,经农杆菌培养、农杆菌与受体细胞共培养、受体细胞的脱菌培养以及转化体细胞的选择培养后,筛选在G418抗生素培养基上正常生长的细胞株。应用ELISA方法检测抗性细胞株的HBsAg表达;提取基因组DNA进行PCR扩增反应。结果质粒pBIBSb的酶切结果正确。经G418抗生素筛选得到8株正常生长的细胞株,其中5株能够表达HBsAg,提取基因组DNA进行PCR扩增反应,得到大小约700 bp的扩增片段。结论获得了整合HBsAg基因,并能够稳定表达HBsAg的人参细胞表达系统。
- 刘丹盛军刘晓宇于海鹏王志武李娟姚为民杨贵贞
- 关键词：基因转化乙肝病毒表面抗原抗生素细胞培养
- 表达乙肝病毒表面抗原人参细胞系统的建立
- 1.载体构建1.1克隆载体的构建:将质粒pMDBS(含有乙肝病毒表面抗原s基因的克隆载体,本室构建并保存)和pBlueserlptⅡSK+用PstⅠ/SstⅠ双酶切消化,回收S基因片段与载体片段,连接、转化后得到pSKB...
- 刘丹盛军刘晓宇于海鹏王志武李娟姚为民杨贵贞
- 文献传递
- 转基因人参细胞中HBsAg的表达及稳定性研究被引量：1
- 2006年
- 目的对转基因人参CS83细胞系表达HBsAg的特异性、稳定性及表达效率进行分析。方法提取CS83细胞表达蛋白,分别以Lowry法和ELISA法检测总蛋白含量和HBsAg含量,SDS-PAGE和Western blot分析表达蛋白的HBsAg特异性。采用冷冻干燥、干燥和低温处理方法检测CS83细胞中HBsAg的稳定性。结果CS83细胞表达产物中总蛋白含量为2·024mg/g,HBsAg含量为504ng/g,占总蛋白含量的0·025%。表达的目的蛋白相对分子质量约为25000,具有HBsAg特异性。经不同方法处理后的保存结果表明,冻干保存稳定性最好。结论所建立的CS83细胞系能够稳定地表达特异性HBsAg。
- 吉海滨刘丹刘黎红李娟于海鹏富锐丽李铮盛军
- 关键词：HBSAG稳定性
- 乙肝病毒表面抗原基因在人参细胞中的表达被引量：12
- 2005年
- 为获得表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞系,构建携带HBsAg基因的植物细胞表达载体pBIBSa,采用以农杆菌LBA4404感染的方法,经G418筛选后得到13株具有抗性的人参细胞。提取基因组DNA进行PCR反应,其中8株得到约700bp的HBsAg基因片段;提取mRNA进行RT-PCR反应,其中6株得到约700bp的HBsAg基因片段;用ELISA方法检测HBsAg,6株均为阳性。每克人参细胞中最高含HBsAg184ng,占细胞可溶性蛋白的0.009%。免疫组化切片染色显示HBsAg主要分布在细胞膜上,少量位于细胞核中。这些结果表明人参细胞整合了HBsAg基因,并能稳定表达HBsAg。
- 刘丹于海鹏盛军刘晓宇王志武李娟盛唯瑾高正伦姚为民蔡伟明
- 关键词：乙肝病毒表面抗原基因转化
- Expression of Hepatitis B Surface Antigen Gene in Ginseng Cell
- 1. METHODS 1.1 Construction of Vector Plasmids The HBsAg coding region on the BamHI/SacI fragment from pMDBS w...
- 于海鹏盛军
- 文献传递
