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安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2010A187)

作品数：14 被引量：18H指数：3
相关作者：范礼斌刘晓颖耿慧武潘林鑫李春雨更多>>
相关机构：安徽医科大学复旦大学更多>>
发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 14篇医药卫生

主题

  • 11篇细胞
  • 8篇转染
  • 8篇细胞定位
  • 7篇蛋白
  • 7篇基因
  • 6篇免疫
  • 6篇基因表达
  • 5篇荧光
  • 5篇免疫荧光
  • 5篇哺乳动物
  • 4篇细胞株
  • 3篇蛋白表达
  • 3篇哺乳动物细胞
  • 2篇印迹
  • 2篇真核
  • 2篇突变体
  • 2篇BL21
  • 1篇蛋白2
  • 1篇蛋白定位
  • 1篇蛋白类

机构

  • 14篇安徽医科大学
  • 1篇复旦大学

作者

  • 14篇范礼斌
  • 13篇刘晓颖
  • 8篇耿慧武
  • 7篇潘林鑫
  • 5篇李春雨
  • 4篇乔正
  • 4篇陈应炉
  • 4篇刘君
  • 3篇李克娟
  • 3篇杨军
  • 3篇赵健
  • 2篇李新颖
  • 2篇朱恒锐
  • 2篇徐南
  • 1篇汪云飞
  • 1篇龚芮
  • 1篇张姗靖
  • 1篇李婧瑶
  • 1篇顾彧
  • 1篇姜天鹏

传媒

  • 14篇安徽医科大学...

年份

  • 4篇2014
  • 6篇2013
  • 2篇2012
  • 2篇2011
共 14 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
人COX6B1在哺乳动物细胞株中转染表达与定位的初步研究被引量：4
2012年
目的构建带FLAG标签的人野生型细胞色素氧化酶亚基COX6B1表达载体,转染至HEK 293T、COS7细胞观察COX6B1蛋白在细胞内表达与定位。方法以含人COX6B1全长cDNA序列的质粒为模板,通过上游带有FLAG标签的引物,PCR方法扩增出COX6B1全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中构建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体。将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了pCD-NA3.1-FLAG-COX6B1表达载体,其在HEK 293T细胞中能有效地表达;在COS7细胞中呈斑点状分布,且主要在胞质内分布,细胞核中未见其明显表达。结论 COX6B1在HEK293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在胞质内,这为进一步了解COX6B1的功能提供了一定的基础。
刘君耿慧武陈应炉刘晓颖范礼斌
关键词：基因表达转染细胞定位
人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达
2014年
目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原核表达载体pGEX-5X-3-CLIC3,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白GST-CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3在COS7细胞质和细胞核中均有分布;Western blot结果显示CLIC3在HEK-293T细胞中能有效表达;考马斯亮蓝染色结果表明融合蛋白GST-CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BL21菌株均能有效表达,为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定的基础。
李春雨潘林鑫刘晓颖范礼斌
关键词：细胞定位蛋白表达
OPTN基因shRNA真核表达载体的构建及干扰效应的检测
2014年
目的通过构建针对视神经病变诱导基因(OPTN)的shRNA的真核表达载体,并转染HEK293FT细胞,实现对OPTN基因表达的抑制,为进一步研究OPTN蛋白的分子机制奠定基础。方法根据Origene中OPTN基因序列设计并合成能转录shRNA的双链DNA序列,插入真核表达载体pRFP-C-RS中,构建重组载体pRFP-C-RS-shOPTN。经鉴定正确后转染HEK293FT细胞,荧光显微镜下观察shRNA转染情况,Western blot法检测OPTN蛋白表达,检测其干扰效率;沙门菌感染实验检测沙门菌在细胞内的增殖,进一步检测OPTN蛋白干扰后对OPTN蛋白作为自噬受体功能的影响。结果成功构建了针对OPTN基因的shRNA表达载体,转入HEK293FT细胞72 h之后,pRFP-C-RS-shOPTN表达增强,OPTN蛋白表达受到明显抑制;细胞内的沙门菌感染实验证明OPTN蛋白可以显著抑制沙门菌的增殖。结论靶向OPTN基因的特异性shRNA转染HEK293FT细胞后可抑制OPTN蛋白表达效率达80%以上,可用于OPTN调控自噬的进一步研究,同时自噬调节蛋白OPTN可以显著抑制沙门菌在细胞内的增殖。
顾彧范礼斌刘晓颖
关键词：RNA干扰OPTN沙门菌
人RB1及其突变体的表达与定位被引量：6
2013年
目的研究人RB1及其缺失突变体蛋白在细胞内的表达与定位。方法以含人RB1全长cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法分别扩增出RB1全长及其三段缺失突变体序列,然后分别构建其表达载体,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞株中的表达与定位。结果成功构建了pCDNA3.1-FLAG-RB1及其缺失突变体的表达载体,Western blot法结果证明其在细胞中都能有效地表达,免疫荧光的结果显示了RB1主要分布在细胞核,但其缺失突变体在细胞质中也有分布。结论人RB1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在细胞核内,其缺失突变体在胞质中也有分布,这为进一步了解人RB1的功能提供了一定的基础。
潘林鑫李新颖徐南李克娟乔正耿慧武刘晓颖范礼斌
关键词：RB1转染基因表达细胞定位
细胞内氯离子通道蛋白2的定位与表达被引量：1
2013年
目的研究细胞内氯离子通道蛋白2(CLIC2)在细胞中的定位与表达。方法以含人CLIC2全长cDNA序列的菌液为模板,PCR法构建CLIC2真核表达载体,利用免疫荧光和Western blot法检测其在细胞株中的定位与表达。结果细胞免疫荧光结果显示CLIC2在细胞质、细胞核中均有分布;Western blot的结果证明其在细胞中能有效地表达。结论 CLIC2蛋白在细胞质和细胞核中均大量分布,为进一步了解CLIC2的功能奠定了基础。
徐南潘林鑫耿慧武李春雨刘晓颖范礼斌
关键词：免疫荧光蛋白表达
PAM14缺失突变体在哺乳动物细胞中的表达和定位
2011年
目的构建带HA标签(标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇)的PAM14缺失突变体PAM14-N和PAM14-C的真核表达载体,将其分别转染至COS7细胞中观察PAM14-N和PAM14-C蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其是否表达。方法以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,PCR法扩增PAM14-N-HA,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入真核表达载体pCDNA3.1中,同理构建pCDNA3.1-HA-PAM14-C,将重组表达质粒pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测。结果经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C,转染后荧光显微镜观察PAM14-N在COS7细胞中主要定位于细胞核,PAM14-C定位不明显;经Western blot检测PAM14-N在HEK293T细胞中能够有效表达,PAM14-C无表达。结论实验结果确定了PAM14功能最小区域及PAM14-N的定位和表达,为进一步了解PAM14的功能奠定了基础。
杨军陈应炉汪云飞朱恒锐刘晓颖范礼斌
关键词：基因表达转染核蛋白类
人通用转录因子GTFIIF2表达与定位
2014年
目的构建不同标签的人通用转录因子IIF多肽2(GTFIIF2)表达载体,观察其细胞内的表达和定位。方法设计GTFIIF2的引物,以全长cDNA序列为模板,利用聚合酶链式反应技术扩增GTFIIF2全长序列,构建pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞表达与定位;构建GST-GTFIIF2质粒,转化到BL21菌株,用IPTG诱导剂诱导融合蛋白表达,用SDS-PAGE分析诱导表达情况。结果免疫荧光法检测GTFIIF2蛋白集中分布在COS7细胞核中,在细胞质没有分布;pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒能够在HEK293T细胞中有效表达;GST-GTFIIF2在BL21菌株中很好的诱导表达。结论 GTFIIF2在COS7细胞、HEK293T细胞和BL21感受态细胞中能有效表达,为更好地了解GTFIIF2蛋白在细胞内的功能提供一定的研究基础。
赵健耿慧武乔正李春雨李克娟刘晓颖范礼斌
关键词：基因表达蛋白定位BL21
人cystatinB基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达被引量：2
2012年
目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人cystatinB真核表达载体,用其转染COS-7和HEK 293 T细胞观察cystatin B在增殖细胞内的定位;转染HEK 293 T细胞检测其表达。方法设计带FLAG-tag的引物,以人cystatin B全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增cystatin B全长序列,然后插入pCDNA 3中构建pCDNA 3-cystatin B-FLAG(CSTBF)质粒;脂质体法转染至COS-7、HEK 293 T细胞,荧光显微镜下观察其在细胞内定位;转染至HEK 293 T细胞,提取细胞总蛋白进行Western blot。结果正确构建了pCD-NA 3-cystatin B-FLAG质粒;定位实验表明在COS-7和HEK293 T细胞中,cystatin B主要分布在细胞核内,核膜处更集中,胞浆内也有广泛分布;Western blot结果表明该质粒能在细胞中有效表达。结论该研究结果为了解cystatin B在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础。
耿慧武刘君陈应炉杨军刘晓颖范礼斌
关键词：细胞定位转染免疫荧光
孕酮诱导的蜕膜蛋白Depp在哺乳细胞株的转染表达与定位被引量：2
2011年
目的将孕酮诱导的蜕膜蛋白Depp基因构建到pC-DGFP表达载体中,分析其在哺乳细胞株中的表达和定位情况。方法用PCR方法扩增Depp全长序列,插入真核表达载体pCDGFP中,将构建好的质粒转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位;转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,利用GFP抗体进行Western blot检测。结果荧光显微镜观察表明,Depp蛋白主要分布在COS7细胞的胞质内,在细胞核周呈斑块状分布,在细胞核未见到明显表达,在HEK293T细胞中能有效表达。结论成功构建pCDGFP-Depp表达载体并确定Depp蛋白在哺乳细胞株中能有效表达。
陈应炉朱恒锐杨军耿慧武刘君刘晓颖范礼斌
关键词：转染蜕膜孕酮蛋白质类
人MRG15在哺乳动物细胞中表达与定位的初步研究
2013年
目的研究细胞周期调控蛋白(MRG15)在哺乳动物细胞中的表达与定位。方法以含人MRG15全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增,构建MRG15真核表达载体,分别利用Western blot法和免疫荧光法检测其在哺乳动物细胞株中的表达与定位。结果 Western blot法检测结果表明MRG15在哺乳动物细胞中能有效地表达,免疫荧光法结果显示MRG15主要分布在细胞核。结论 MRG15蛋白主要在细胞核中表达,为进一步了解MRG15的功能奠定了一定基础。
姜天鹏潘林鑫赵健乔正李春雨张珊静李克娟范礼斌
关键词：蛋白表达免疫荧光
全选 清除 导出
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