教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-07-0376)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 相关作者：熊盛钱垂文陈薪研陈伟安卫征更多>>
- 相关机构：暨南大学广东药学院南昌大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 蓝藻抗病毒蛋白-N基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定被引量：8
- 2010年
- 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)具有强效抗HIV及其他包膜病毒活性,该蛋白序列特殊,难以重组制备,在大肠杆菌细胞质中形成包涵体。本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对CVN原始核苷酸序列进行优化,通过多次PCR合成SUMO-CVN的全长DNA序列,构建pET3c-SUMO-CVN重组表达质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株。通过对诱导剂浓度和诱导时间的优化,发现以0.5mmol/LIPTG在20℃诱导24h可获得最高表达,SDS-PAGE结果显示,SUMO-CVN为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的28%;经特异性的SUMO蛋白酶对融合蛋白进行酶切及两步Ni-NTA凝胶亲和层析可以得到纯度较高的重组CVN蛋白。ELISA结果表明,重组蛋白CVN与gp120蛋白有较高的亲和力。体外抗病毒活性实验表明,重组蛋白CVN在纳摩尔浓度具有很好的抗HSV-1和HIV-1/ⅢB活性;这为开发基于CVN的新型、高效抗病毒药物打下了基础。
- 陈伟韩波钱垂文刘秋英熊盛
- 关键词：纯化HSV-1
- 孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B3活性被引量：8
- 2010年
- 目的从绿藻孔石莼中分离具有抗病毒活性蛋白多糖提取物。方法新鲜孔石莼经pH7.0的磷酸盐缓冲液提取和硫酸铵沉淀得到粗提取物,大孔树脂层析分离得到蛋白多糖。经紫外扫描、高温高压处理(121℃,15min)和糖苷酶水解测定提取物的性质。MTT法检测蛋白多糖对Hela细胞的毒性,细胞病变法(CPE)检测蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)引起的细胞病变抑制作用。通过样品对细胞的保护作用、对CVB3增殖的影响、对CVB3感染细胞的综合作用,初步研究了样品抗病毒作用的机理。结果从孔石莼中提取了蛋白多糖,得率为0.5%。毒性试验结果表明,孔石莼蛋白多糖对He-La细胞的半数中毒浓度TC50大于8mg.ml-1。孔石莼蛋白多糖具有显著的抗CVB3活性,通过试验测得孔石莼蛋白多糖对CVB3主要是预防作用和直接杀灭作用,其IC50为3.7μg.ml-1。结论从孔石莼中分离到具有抗病毒活性的蛋白多糖,具有很好的抗CVB3活性。
- 罗振宇陈薪研王小燕瞿畅张美英安卫征熊盛
- 关键词：孔石莼纯化抗病毒活性CVB3
- 氧化还原对NDPK-A及突变体磷酸转移酶活性的影响
- 2012年
- 对核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)及其4种半胱氨酸突变体进行诱导表达及纯化,测定它们在氧化还原条件及正常条件下的磷酸转移酶活性,研究氧化还原及二硫键异构对NDPK-A及突变体活性的影响。将实验室之前构建成功的野生型NDPK-A(PBV-NDPK-A)及4种突变型NDPK-A基因(PBV-NDPK-A C4S,PBV-NDPK-A C109S,PBV-NDPK-A C145S,PBV-NDPK-A C4/109/145S)在大肠杆菌中高效表达;以DEAE-sepharose Fast Flow离子交换层析与Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B亲和层析技术纯化目的蛋白;HPLC法测定比较野生型NDPK-A及突变体在氧化还原和正常环境下磷酸转移酶活性。结果显示,NDPK-A及突变体在大肠杆菌中高效表达;经纯化分别获得了均一的NDPK-A蛋白及突变体蛋白,纯度均达到98%;在还原环境下NDPK-A及突变体的磷酸转移酶活性均高于正常环境下的活性,但是在氧化环境下的磷酸转移酶活性明显低于正常环境下。氧化还原环境对NDPK-A结构异构及磷酸转移酶活性有一定的影响,提示氧化还原环境可能调控NDPK-A二硫键的形成,影响蛋白的聚集状态,从而影响蛋白的磷酸转移酶活性,并且NDPK-A结构中可能有更为复杂的氧化还原调控酶活性机制。
- 张志红吕芬高雪杨依丽罗勇熊盛
- 核苷二磷酸激酶A的定点突变及C4S突变体的制备和活性研究被引量：1
- 2010年
- 目的:对核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)二硫键异构的关键残基C4进行定点突变,构建、表达并纯化C4S突变体,测定其磷酸转移酶活性和DNase活性,研究二硫键异构对NDPK-A活性的影响。方法:以pBV220-nm23-H1质粒作为模板,通过设计合适的引物对NDPK-A进行定点突变,将第4位半胱氨酸突变为丝氨酸,构建NDPK-AC4S突变体;在大肠杆菌BL21中表达,DEAE-sepharose Fas tFlow与Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B纯化目的蛋白,获得均一重组蛋白,纯度达到98%;DNA序列测定及重组蛋白的肽质量指纹图谱(PMF)分析均证明构建正确突变体;高效液相色谱法(HPLC)与DNA消化法分别测定野生型NDPK-A与C4S突变体的磷酸转移酶活性与DNase活性差异。结果:NDPK-AC4S突变体的磷酸基转移酶与DNase酶活性均高于野生型NDPK-A。结论:NDPK-A缺失二硫键后,活性增高。NDPK-A形成链内二硫键可能是其活性负调控模式之一。
- 陈蕴如郭朝万黄增委钱垂文张晓伟王一飞熊盛
- 关键词：定点突变二硫键
